第八章微生物遺傳-資料下載頁
2025-04-07 04:00本頁面
【正文】 106），部分缺陷的溫和噬菌體，把供體菌的少數(shù)特定基因轉(zhuǎn)移到受體菌中。3．細菌的遺傳轉(zhuǎn)化（genetic transformation）同源或異源的游離DNA分子(質(zhì)粒和染色體DNA)被自然或人工感受態(tài)細胞攝取，并得到表達的水平方向的基因轉(zhuǎn)移過程自然遺傳轉(zhuǎn)化（natural genetic transformation）人工轉(zhuǎn)化（artificial transformation）進行轉(zhuǎn)化必要的二方面條件：感受態(tài)的受體細胞:自然感受態(tài)的出現(xiàn)是細胞一定生長階段的生理特性，受細菌自身的基因控制； 人工感受態(tài)則是通過人為誘導(dǎo)的方法，使細胞具有攝取DNA的能力，或人為地將DNA導(dǎo)入細胞內(nèi)。外源游離DNA分子:轉(zhuǎn)染(transfection)：噬菌體DNA被感受態(tài)細胞攝取并產(chǎn)生有活性的病毒顆粒。特點：提純的噬菌體DNA以轉(zhuǎn)化的（而非感染）途徑進入細胞并表達后產(chǎn)生完整的病毒顆粒。4．原生質(zhì)體融合兩個親本菌株去除細胞壁后的一種體細胞雜交育種方法(1) 親本及其遺傳標(biāo)記選擇營養(yǎng)缺陷、抗性標(biāo)記、熒光染色標(biāo)記等(2) 原生質(zhì)體制備 ? 高滲溶液：無機鹽（KCl, NaCl, MgSO4）、 有機物(蔗糖、甘露醇、山梨醇)? 水解酶： 溶菌酶\蝸牛酶、纖維素酶、葡聚糖酶）(3) 原生質(zhì)體融合化學(xué)融合法：30%50%PEG(10006000)誘導(dǎo)，滲透壓，低速離心10002000g電融合:細胞在電場作用下,細胞內(nèi)產(chǎn)生偶極化,促使細胞排列成串,外加瞬間高頻直流強電壓作用,原生質(zhì)膜穿孔復(fù)原(4) 原生質(zhì)體再生再生培養(yǎng)基高滲，無機鹽/有機物，防止機械損傷(5) 融合子選擇營養(yǎng)缺陷型, 抗性, 熒光染色標(biāo)記, 鈍化選擇(親本一方融合前50℃23h) ；連續(xù)傳代幾次四種方法比較類型受體\供體是否接觸DNA傳遞媒介重組涉及DNA大小接合是F因子部分染色體轉(zhuǎn)導(dǎo)否噬菌體一個或少數(shù)幾個基因轉(zhuǎn)化否無一個或少數(shù)幾個基因原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體 +原生質(zhì)體2個細胞的基因組八．微生物與基因工程 基因工程（genetic engineering）或重組DNA技術(shù)(rebinant DNA technology)：是指對遺傳信息的分子操作和施工，即把分離到的或合成的基因經(jīng)過改造，插入載體中，導(dǎo)入宿主細胞內(nèi)，使其擴增和表達，從而獲得大量基因產(chǎn)物，或者令生物表現(xiàn)出新的性狀。對基因工程的建立與發(fā)展具有重要意義的幾項關(guān)鍵技術(shù)：DNA的特異切割；DNA的分子克?。ㄈ斯まD(zhuǎn)化方法的建立）；DNA的快速測序；DNA合成技術(shù)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）（DNA的體外擴增）；DNA的定位誘變技術(shù)。 M與基因工程的關(guān)系 ? 基因工程所用克隆載體主要是用病毒、噬菌體和質(zhì)粒改造而成；? 基因工程所用千余種工具酶絕大多數(shù)是從微生物中分離純化得到的；? 微生物細胞是基因克隆的宿主，即使植物基因工程和動物基因工程也要先構(gòu)建穿梭載體，使外源基因或重組體DNA在大腸桿菌中得到克隆并進行拼接和改造，才能再轉(zhuǎn)移到植物和動物細胞中；①能夠高效吸收外源DNA；②具有使外源DNA進行高效復(fù)制的酶系統(tǒng)；③不具有限制修飾系統(tǒng)；④不具有DNA重組系統(tǒng)，常用重組缺陷型（RecA）；⑤便于進行基因操作、篩選和大量繁殖；⑥具有安全性。宿主細胞應(yīng)該對人、畜、農(nóng)作物無害或無致病性等。? 為大規(guī)模表達各種基因產(chǎn)物，從事商品化生產(chǎn)，通常都是將外源基因表達載體導(dǎo)入大腸桿菌或是酵母菌中以構(gòu)建成工程菌，利用工廠發(fā)酵來實現(xiàn)的；? 微生物的多樣性，尤其是抗高溫、高鹽、高堿、低溫等基因，為基因工程提供了極其豐富而獨特的基因資源；? 有關(guān)基因結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和表達調(diào)控的理論主要也是來自對微生物的研究中取得的，或者是將動、植物基因轉(zhuǎn)移到微生物中后進行研究而取得的，因此微生物學(xué)不僅為基因工程提供了操作技術(shù)，同時也提供了理論指導(dǎo)。9 / 9
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