db21t18612-20xx水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法-資料下載頁(yè)
2025-04-07 03:03本頁(yè)面
【正文】 胺變性凝膠配制藥品與試劑體積20％膠儲(chǔ)存液15mL超純水10％過(guò)硫酸銨TEMED總體積50mL（3）預(yù)電泳 凝膠聚合后，將梳子正向插入膠頂空處，形成加樣孔，連接好電泳設(shè)備，添加TBE電泳緩沖液。（4）清洗上樣孔 關(guān)閉電源，用注射器吸取電泳緩沖液逐個(gè)清洗加樣孔。（5）產(chǎn)物變性 選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物中添加等體積上樣緩沖液混勻，95℃變性5min，迅速置于冰上。（6）上樣 用微量移液器取變性反應(yīng)物加到加樣孔內(nèi)，每孔上樣量為5~8181。L。（7）電泳 采用恒恒功率電泳，至二甲苯青達(dá)凝膠的下2/3處，停止電泳。（8）銀染 取下凝膠板，拆除耳板和邊條，將其置于10％冰醋酸中進(jìn)行固定，搖床上搖30min，將膠板轉(zhuǎn)入超純水中清洗3次，每次2min，將膠板置于銀染液中染30min，超純水沖洗5s后立即放入顯影液中，待條帶顯出后，用10％冰醋酸定影5min，自來(lái)水沖洗1min，晾干。（9）將上述膠板置于凝膠成像儀中，利用相關(guān)圖像采集系統(tǒng)得到清晰的電泳凝膠圖像，用于結(jié)果分析。9 數(shù)據(jù)分析選擇電泳后清晰的擴(kuò)增片段進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。在相同遷移位置，按每一個(gè)體擴(kuò)增片段的有無(wú)，出現(xiàn)擴(kuò)增帶記錄為1，無(wú)擴(kuò)增帶記錄為0。建立各個(gè)群體的01數(shù)據(jù)陣列。 結(jié)果分析 利用群體遺傳學(xué)分析軟件專(zhuān)業(yè)（PopGene ），對(duì)建立的群體01數(shù)據(jù)陣列，按照顯性二倍體數(shù)據(jù)模型，進(jìn)行等位基因數(shù)(Allele Number，Na)、有效等位基因數(shù)（Effective Allele Number，Ne）、多態(tài)性位點(diǎn)百分率 (Polymaorphic Loci P) 、Nei’s 基因多樣性指數(shù)（Gene Diversity，H）、Shannon多樣性指數(shù)(Shannon index，I) 、遺傳距離（Genetic Distance，D）等遺傳參數(shù)的分析和計(jì)算。并用 UPGMA做基于Nei’s遺傳距離的樹(shù)形圖，以及用鄰近法（Neighbor joining method，NJ）構(gòu)建聚類(lèi)圖（系統(tǒng)樹(shù)檢驗(yàn)置信度值為1000次）。附錄A(資料性附錄)EcoRⅠ與MseⅠ接頭序列EcoRⅠ接頭：5180。 CTCGTAGACTGCGTACC3180。3180。CTGACGCATGGTTAA5180。MseⅠ接頭：5180。 GACGATGAGTCCTGAG3180。3180。TACTCAGGACTCAT5180。附錄B(資料性附錄)EcoRⅠ與MseⅠ預(yù)擴(kuò)增引物序列EcoRⅠ預(yù)擴(kuò)增引物：5180。GACTGCGTACCAATTC 3180。MseⅠ預(yù)擴(kuò)增引物：5180。GATGAGTCCTGAGTAA 3180。附錄c(資料性附錄)EcoRⅠ與MseⅠ選擴(kuò)增引物序列EcoRⅠ選擇擴(kuò)增引物：5180。GACTGCGTACCAATTCXXX3180。MseⅠ選擇擴(kuò)增引物：5180。GATGAGTCCTGAGTAAXXX3180。注：其中X代表任意一種堿基。_________________________________
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