db21t 18612-20xx 水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法-全文預(yù)覽
【正文】 接頭復(fù)性將EcoRⅠ和MseⅠ各自的單鏈接頭等分子數(shù)混合， 94℃變性3min，37℃保溫5min。l5181。L）酶切緩沖液10X1XEcoRⅠ10U/181。按表1配制酶切體系，每40181。應(yīng)保證DNA濃度在10μg/mL以上，方可正常進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 DNA濃度檢測(cè)分別于260 nm波長(zhǎng)和280 nm波長(zhǎng)下測(cè)定產(chǎn)物（或產(chǎn)物稀釋液）的紫外吸收值。L TE緩沖液 (10mmol/L TrisHCl pH ，lmmol/L EDTA)，置20℃保存?zhèn)溆谩Ｕ袷幘鶆蚝螅?5℃水浴1h；按GB/T ，用苯酚和氯仿方法抽提DNA；用50 181。 DNA提取 Ⅰ型樣品在200μL 離心管中放入1~4根毛發(fā)，毛囊置于離心管底部，剪去高于離心管部分的毛發(fā)，設(shè)置一個(gè)空白對(duì)照管；在每個(gè)離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。樣品標(biāo)注后，活體運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。 采樣方法應(yīng)在自然保護(hù)機(jī)構(gòu)、人工養(yǎng)殖部門(mén)等協(xié)助下進(jìn)行，以不傷害個(gè)體、不破壞其生境為原則，采集其毛發(fā)、皮毛等作為樣品，特殊情況（如出現(xiàn)受傷個(gè)體等）可酌情采取其他部位（如肌肉、肝臟等）。 測(cè)序凝膠電泳槽。 紫外分光光度計(jì)。 電子天平（ mg）。 低溫高速離心機(jī)。 銀染液：1g硝酸銀溶于1L超純水中，加入37%。 限制性內(nèi)切酶： EcoRⅠ、MseⅠ。 標(biāo)準(zhǔn)分子量Markers（100bp）。 硝酸銀（AgNO3）：分析純。 蛋白酶K（20 mg/mL）：生化試劑。 20TBE緩沖液：三羥甲基氨基甲烷121g，EDTA ，加超純水到1L。5 試劑 三羥甲基氨基甲烷（Tris）飽和酚。 Shannon多樣性指數(shù)(Shannon index，I)用來(lái)估算群落多樣性的高低。多態(tài)性位點(diǎn)百分率 (Percent of Polymaorphic Loci，P) 表示后代所獲得某個(gè)等位標(biāo)記來(lái)自于它的父親（或母親）的同一個(gè)等位標(biāo)記的可能性。 基因型（Genotype） 控制某一性狀的基因組合。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。附錄A、B、C均為資料性附錄。B50DB21遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 21/ ?—2010水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法AFLP procedure to detect germplasm for aquaculture species2010 12 31發(fā)布2011 02 01實(shí)施遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB21/ ?—2010前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：劉衛(wèi)東、高祥剛、赫崇波、李云峰、李宏俊、鮑相渤。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）用一對(duì)寡核苷酸引物、四種脫氧核糖核苷酸（dNTPs）為原料，在合適的溫度、離子條件和耐熱 DNA聚合酶催化下，在體外人工合成特異的DNA片段的過(guò)程。在一個(gè)群體中一
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