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db21t18612-20xx水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程擴(kuò)增片段長度多態(tài)性法-免費(fèi)閱讀

2025-05-01 03:03 上一頁面

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【正文】 MseⅠ選擇擴(kuò)增引物:5180。3180。 結(jié)果分析 利用群體遺傳學(xué)分析軟件專業(yè)(PopGene ),對(duì)建立的群體01數(shù)據(jù)陣列,按照顯性二倍體數(shù)據(jù)模型,進(jìn)行等位基因數(shù)(Allele Number,Na)、有效等位基因數(shù)(Effective Allele Number,Ne)、多態(tài)性位點(diǎn)百分率 (Polymaorphic Loci P) 、Nei’s 基因多樣性指數(shù)(Gene Diversity,H)、Shannon多樣性指數(shù)(Shannon index,I) 、遺傳距離(Genetic Distance,D)等遺傳參數(shù)的分析和計(jì)算。(6)上樣 用微量移液器取變性反應(yīng)物加到加樣孔內(nèi),每孔上樣量為5~8181。l)MseⅠ選擇擴(kuò)增引物 (50ng/181。按表3配制預(yù)擴(kuò)增體系,按表4進(jìn)行PCR反應(yīng)。l總計(jì)————50181。表1  限制性內(nèi)切酶消化反應(yīng)體系試劑原始濃度最終濃度體積(181。DNA濃度(μg/mL)=[A260/(L)]稀釋倍數(shù),公式中的A260表示被測(cè)樣品在260nm波長下的吸光度值,L為比色池厚度,單位是cm。65℃保溫15~60min,按GBT ,用苯酚和氯仿方法抽提DNA; (3mol/L,) 和兩倍體積無水乙醇沉淀;溶于50181。 Ⅲ 型樣品選取幼嫩藻尖,用毛筆在無菌海水中充分刷洗,解剖鏡下觀察,確定沒有附生雜藻后,在無菌蒸餾水中清洗,晾干備用。 III型樣品:藻類(海帶、裙帶菜、鼠尾藻等)。 冷凍離心機(jī)。 梯度PCR儀。 乙二胺四乙酸(EDTA):分析純。 過硫酸銨:分析純。 無水乙醇:分析純。群體或個(gè)體間的遺傳距離越小,它們之間的親緣關(guān)系越近,反之群體或個(gè)體間的遺傳距離越大,那么它們之間的親緣關(guān)系將越遠(yuǎn)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)用一對(duì)寡核苷酸引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTPs)為原料,在合適的溫度、離子條件和耐熱 DNA聚合酶催化下,在體外人工合成特異的DNA片段的過程。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:劉衛(wèi)東、高祥剛、赫崇波、李云峰、李宏俊、鮑相渤。附錄A、B、C均為資料性附錄。 基因型(Genotype) 控制某一性狀的基因組合。 Shannon多樣性指數(shù)(Shannon index,I)用來估算群落多樣性的高低。 20TBE緩沖液:三羥甲基氨基甲烷121g,EDTA ,加超純水到1L。 硝酸銀(AgNO3):分析純。 限制性內(nèi)切酶: EcoRⅠ、MseⅠ。 低溫高速離心機(jī)。 紫外分光光度計(jì)。 采樣方法應(yīng)在自然保護(hù)機(jī)構(gòu)、人工養(yǎng)殖部門等協(xié)助下進(jìn)行,以不傷害個(gè)體、不破壞其生境為原則,采集其毛發(fā)、皮毛等作為樣品,特殊情況(如出現(xiàn)受傷個(gè)體等)可酌情采取其他部位(如肌肉、肝臟等)。 DNA提取 Ⅰ型樣品在200μL 離心管中放入1~4根毛發(fā),毛囊置于離心管底部,剪去高于離心管部分的毛發(fā),設(shè)置一個(gè)空白對(duì)照管;在每個(gè)離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。L TE緩沖液 (10mmol/L TrisHCl pH ,lmmol/L EDTA),置20℃保存?zhèn)溆?
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