db21t18612-20xx水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法-wenkub
2023-04-22 03:03:55 本頁(yè)面
【正文】 丙烯酰胺：分析純。 冰乙酸：分析純。 三氯甲烷：分析純。 聚類(lèi)分析（Cluster Analysis） 將研究對(duì)象分為相對(duì)同質(zhì)的群組（clusters）的統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)。 Nei’s 基因多樣性指數(shù)（Gene Diversity，H）隨機(jī)選擇基因間的非同一的概率。 座位（Locus） 基因在染色體上所處的特定位置。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。8 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法????? 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)生物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（AFLP）的原理、試劑、儀器和設(shè)備、采樣、分析步驟和數(shù)據(jù)運(yùn)算方法。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院提出。本標(biāo)準(zhǔn)歸口單位：遼寧省海洋與漁業(yè)廳。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)生物種質(zhì)檢測(cè)與鑒定等方面的種質(zhì)檢驗(yàn)工作。GB/T 養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)種質(zhì)檢驗(yàn) 第15部分：RAPD分析3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 等位基因（Allele）基因的一種變異體，在二倍體細(xì)胞內(nèi)每個(gè)基因有兩個(gè)等位基因，每個(gè)等位基因分別來(lái)自于各自的親本。 遺傳距離（Genetic Distance，D）用基因頻率的函數(shù)表示的群體間遺傳差異，它的最適宜的測(cè)度是單位長(zhǎng)度DNA的核苷酸數(shù)或密碼子的差數(shù)，是用來(lái)表示群體或個(gè)體之間遺傳關(guān)系遠(yuǎn)近的一個(gè)量化指標(biāo)，其值可以從0至無(wú)限大。4 原理擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）的原理是對(duì)基因組總DNA酶切后經(jīng)PCR進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，先將基因組DNA用兩種限制性內(nèi)切酶酶切成大小不等的片段，并與含有粘性末端的人工接頭相連，形成酶切位點(diǎn)不同的限制性酶切片段，然后用與接頭和位點(diǎn)相匹配的引物進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物作為進(jìn)一步PCR擴(kuò)增的模板，再選用特異引物進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，擴(kuò)增后的產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳將特異的限制性片段分離。 異戊醇：分析純。 瓊脂糖：生化試劑。 甲叉雙丙烯酰胺：分析純。 無(wú)水碳酸鈉：分析純。 37%甲醛溶液。 上樣緩沖液：98％甲酰胺，10mM EDTA()，％溴酚藍(lán)及二甲苯青。6 儀器和設(shè)備 凝膠成像分析系統(tǒng)。 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀。 電泳槽。 超純水器。 Ⅱ型樣品：肌肉、臟器組織類(lèi)（仿刺參、海膽、虹鱒、大菱鲆、鰻鱺、中國(guó)對(duì)蝦、日本對(duì)蝦、中華絨鰲蟹、三疣梭子蟹、皺紋盤(pán)鮑、海灣扇貝、蝦夷扇貝、櫛孔扇貝、文蛤、牡蠣、海蜇等）。所采樣品標(biāo)注后，妥善存放，防止污損，做好采樣記錄。 Ⅱ型樣品從活體中直接采集肌肉或臟器組織， 20℃冰箱直接凍存。程序結(jié)束后，將離心管進(jìn)行瞬時(shí)離心，20℃保存?zhèn)溆谩? Ⅲ型樣品取鮮樣品50～150mg，剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品完全冷凍后，快速、用力研磨至粉末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開(kāi)始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L TrisHCl，pH ，75mmol/L NaCl，％SDS，5mmol/L EDTA)及RNA酶、蛋白酶K共400μL，用力碾磨
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