db21t18612-20xx水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗技術(shù)規(guī)程擴增片段長度多態(tài)性法-wenkub
2023-04-22 03:03:55 本頁面
【正文】 丙烯酰胺：分析純。 冰乙酸：分析純。 三氯甲烷：分析純。 聚類分析（Cluster Analysis） 將研究對象分為相對同質(zhì)的群組（clusters）的統(tǒng)計分析技術(shù)。 Nei’s 基因多樣性指數(shù)（Gene Diversity，H）隨機選擇基因間的非同一的概率。 座位（Locus） 基因在染色體上所處的特定位置。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。8 擴增片段長度多態(tài)性法????? 擴增片段長度多態(tài)性法1 范圍本標準規(guī)定了水產(chǎn)生物擴增片段長度多態(tài)性分析（AFLP）的原理、試劑、儀器和設備、采樣、分析步驟和數(shù)據(jù)運算方法。本標準由遼寧省海洋水產(chǎn)科學研究院提出。本標準歸口單位：遼寧省海洋與漁業(yè)廳。本標準適用于水產(chǎn)生物種質(zhì)檢測與鑒定等方面的種質(zhì)檢驗工作。GB/T 養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第15部分：RAPD分析3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。 等位基因（Allele）基因的一種變異體，在二倍體細胞內(nèi)每個基因有兩個等位基因，每個等位基因分別來自于各自的親本。 遺傳距離（Genetic Distance，D）用基因頻率的函數(shù)表示的群體間遺傳差異，它的最適宜的測度是單位長度DNA的核苷酸數(shù)或密碼子的差數(shù)，是用來表示群體或個體之間遺傳關(guān)系遠近的一個量化指標，其值可以從0至無限大。4 原理擴增片段長度多態(tài)性法（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）的原理是對基因組總DNA酶切后經(jīng)PCR進行選擇性擴增，先將基因組DNA用兩種限制性內(nèi)切酶酶切成大小不等的片段，并與含有粘性末端的人工接頭相連，形成酶切位點不同的限制性酶切片段，然后用與接頭和位點相匹配的引物進行預擴增，預擴增產(chǎn)物作為進一步PCR擴增的模板，再選用特異引物進行選擇性擴增，擴增后的產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳將特異的限制性片段分離。 異戊醇：分析純。 瓊脂糖：生化試劑。 甲叉雙丙烯酰胺：分析純。 無水碳酸鈉：分析純。 37%甲醛溶液。 上樣緩沖液：98％甲酰胺，10mM EDTA()，％溴酚藍及二甲苯青。6 儀器和設備 凝膠成像分析系統(tǒng)。 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀。 電泳槽。 超純水器。 Ⅱ型樣品：肌肉、臟器組織類（仿刺參、海膽、虹鱒、大菱鲆、鰻鱺、中國對蝦、日本對蝦、中華絨鰲蟹、三疣梭子蟹、皺紋盤鮑、海灣扇貝、蝦夷扇貝、櫛孔扇貝、文蛤、牡蠣、海蜇等）。所采樣品標注后，妥善存放，防止污損，做好采樣記錄。 Ⅱ型樣品從活體中直接采集肌肉或臟器組織， 20℃冰箱直接凍存。程序結(jié)束后，將離心管進行瞬時離心，20℃保存?zhèn)溆谩? Ⅲ型樣品取鮮樣品50～150mg，剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品完全冷凍后，快速、用力研磨至粉末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L TrisHCl，pH ，75mmol/L NaCl，％SDS，5mmol/L EDTA)及RNA酶、蛋白酶K共400μL，用力碾磨
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