微生物實驗思考題(南京工業(yè)大學生物與制藥工程學院)-資料下載頁
2025-04-04 23:24本頁面
【正文】 徹底 [2]開始滅菌，設定溫度為160℃，當干燥箱中溫度達到160℃時，滅菌1~2h [3]注意干熱滅菌過程嚴防恒溫調節(jié)的自動控制失靈而造成安全事故，滅菌時人不能離開滅菌后：[4]不要立即打開電熱干燥箱，否則會因為內外溫差過大而引起玻璃器皿的破裂，滅菌結束后應先關閉電源，放置一段時間后再拿出。2為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需要的溫度更高，時間要長？答：高壓蒸汽滅菌時利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌目的的。干熱滅菌也是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌目的的。細胞內蛋白質凝固性與其本身的含水量有關，菌體受熱時環(huán)境和細胞內含水量越大，蛋白質凝固就越快，反之含水量少，凝固慢。因此與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度更高，時間更長。3玻璃器皿為什么在干熱滅菌前要先行干燥？答：干熱滅菌溫度一般在160~170℃，若玻璃器皿上有過多的水，可能會引起炸裂。實驗十一 微生物接種與培養(yǎng)技術 實驗原理只有一種微生物的培養(yǎng)物為純培養(yǎng)，通常情況下只有純培養(yǎng)物才能可以提供重復的結果，所以純培養(yǎng)技術是進行微生物學研究的技術。接種時必須是嚴格的無菌操作，通常，斜面接種、固體接種、液體接種、穿刺接種均以獲得良好的純種微生物為目的。其中，穿刺接種可以檢測出菌體是否有鞭毛以及哪個方向運動。二、思考題接種前為什么要灼燒接種環(huán)？答：為了保證純種微生物在接種過程中不被污染（接種前），以及實驗操作用的微生物不污染周圍環(huán)境（接種后），接種必須在一個無雜菌污染的環(huán)境中進行嚴格的無菌操作。為什么要待接種環(huán)冷卻后才能與菌種接觸？是否可以將接種環(huán)放在臺子上冷卻？如何知道接種環(huán)是否已經冷卻？答：若不冷卻，會燙死菌種；不能直接放臺子上冷卻，會引入雜菌，若要冷卻接種環(huán)可以將其在試管內壁上或者未長菌的培養(yǎng)基上接觸一下。當無嗞嗞聲或者培養(yǎng)基不熔化是接種環(huán)冷卻。若你接種的培養(yǎng)物出現雜菌，如何分析引起雜菌的原因？答：①培養(yǎng)基及相關器皿是否滅菌徹底；②接種器具及接種環(huán)境是否干凈；③接種操作是否正確規(guī)范；④接種后菌的培養(yǎng)是否正確。斜面培養(yǎng)物出現水膜現象，請問如何避免水膜的行成？答：①斜面培養(yǎng)基滅菌后經過干燥再用于接種；②接種后試管的塞子不要塞的太緊，以防滅菌后所余水及菌種生長旺盛生成的水留在試管內行成水膜。為什么平板培養(yǎng)時需要倒置？答：空氣不易進入，從而不易引入雜菌，特別是在培養(yǎng)厭氧菌時，倒置可隔絕氧氣的進入，從而可以使厭氧菌更好的生長。另外，平板培養(yǎng)時倒置可防止平板內微生物進入周圍環(huán)境中，從而污染空氣，特別是一些致病菌。而且，若不倒置，會行成水膜，影響劃線。實驗十二 微生物計數技術——平板菌落計數法一．思考題為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻到45℃左右才能倒平板？答：溫度過高會燙死菌種，溫度過低則培養(yǎng)基會凝固，不利于培養(yǎng)基與菌液混合均勻要使平板菌落計數準確，需要掌握哪些關鍵？答：（1）菌懸液細胞密度適宜，稀釋倍數適宜；（2）吸樣量準確；（3）混合均勻；（4）更換吸管；（5）加培養(yǎng)基時立即搖勻；（6）涂布均勻；3當平板上的菌落不均勻而是集中的你認為問題在哪？答：（1）涂布或傾注不及時；（2）涂布不均勻；（3）沒有立即搖勻；（4）菌液過少不易涂布；用平板傾注法和涂布法計數，其平板上長出的菌落有何不同？為什么平板傾注要培養(yǎng)較長時間后觀察結果？答：（1）平板傾注法：菌落出現在平板表面及內部；涂布法：只在平板表面；（2）培養(yǎng)時間長，菌落的形態(tài)特征才明顯，便于觀察計數。5平板計數的優(yōu)缺點有哪些？答：優(yōu)點：可直接反映樣品中活細胞數量；計數的線性范圍大；菌落分布均勻，能較好的反映疏密程度，重復性強，平行性好。 缺點：操作較繁瑣，結果需要培養(yǎng)一段時間才能獲得，而且測定結果易受多種因素影響。
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