微生物學(xué)教程(周德慶祝第三版)重點(diǎn)17章-資料下載頁(yè)
2025-04-04 23:23本頁(yè)面
【正文】 核酸水平?；蛩健Ｃ艽a子水平。核苷酸水平。凡游離在原核生物核基因組以外，具有獨(dú)立復(fù)制能力的小型共價(jià)閉合環(huán)狀的dsDNA分子，即cccDNA，就是典型的質(zhì)粒。含質(zhì)粒的細(xì)胞在正常的培養(yǎng)基上受吖啶類燃料、絲裂霉素C、紫外線、利福平、重金屬離子或高溫等因子處理時(shí)，由于其復(fù)制受抑而核染色體的復(fù)制繼續(xù)進(jìn)行，從而引起子代細(xì)胞中不帶質(zhì)粒，叫質(zhì)粒消除。質(zhì)粒在基因工程中的優(yōu)點(diǎn)：①相對(duì)分子質(zhì)量小，便于DNA的分離和操作；②呈環(huán)狀，使其在化學(xué)分離過(guò)程中能保持性能穩(wěn)定；③有不受核基因組控制的獨(dú)立復(fù)制起始點(diǎn)；④拷貝數(shù)多，使外源DNA可很快擴(kuò)散；⑤存在抗藥性基因等選擇性標(biāo)記，便于含質(zhì)?？寺〉臋z出和選擇。F質(zhì)粒又稱F因子、致育因子或性因子，是大腸桿菌等細(xì)菌決定性別并有轉(zhuǎn)移能力的質(zhì)粒?；蛲蛔兒?jiǎn)稱突變，是變異的一類，泛指細(xì)胞內(nèi)(或病毒體內(nèi))遺傳物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)或數(shù)量突然發(fā)生的可遺傳的變化，可自發(fā)或誘導(dǎo)產(chǎn)生。概率很低，一般在百萬(wàn)分之一到億分之一?；蛲蛔兊钠邆€(gè)特點(diǎn)：①自發(fā)性；②不對(duì)應(yīng)性；③稀有性；④獨(dú)立性；⑤可誘變性；⑥穩(wěn)定性；⑦可逆性。Luria等的變量試驗(yàn)和Newbe的涂布試驗(yàn)證明了自發(fā)性；Lederberg等的影印試驗(yàn)證明了不對(duì)應(yīng)性。誘變育種的原則：①選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑；②選擇優(yōu)良的出發(fā)菌株；③處理單細(xì)胞或單孢子懸液；④選用最適的誘變劑量；⑤充分利用復(fù)合處理的協(xié)同效應(yīng)；⑥利用和創(chuàng)造形態(tài)、生理與產(chǎn)量間的相關(guān)指標(biāo)；⑦設(shè)計(jì)高效篩選方案；⑧創(chuàng)造新型、高效篩選方法。艾姆思試驗(yàn)（了解內(nèi)容P210）兩個(gè)獨(dú)立基因組內(nèi)的遺傳基因，通過(guò)一定的途徑轉(zhuǎn)移到一起，形成新的穩(wěn)定基因組的過(guò)程，稱為基因重組或遺傳重組，簡(jiǎn)稱重組。受體菌直接吸收供體菌的DNA片段而獲得后者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)化。通過(guò)轉(zhuǎn)化形成的雜種后代叫轉(zhuǎn)化子。感受態(tài)是指受體細(xì)胞最易接受外源DNA片段并能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。轉(zhuǎn)化因子（了解內(nèi)容P218）轉(zhuǎn)化過(guò)程：①供體菌的dsDNA片段與感受態(tài)受體菌細(xì)胞表面的膜連DNA結(jié)合蛋白相結(jié)合，其中一條鏈被核酸酶切開和水解，另一條進(jìn)入細(xì)胞；②來(lái)自供體菌的ssDNA片段被細(xì)胞內(nèi)的感受態(tài)特異的ssDNA結(jié)合蛋白相結(jié)合，并使ssDNA進(jìn)入細(xì)胞，隨即在RecA蛋白的介導(dǎo)下與受體菌染色體上的同源區(qū)段配對(duì)、重組，形成一小段雜合DNA片段；③受體菌染色體組進(jìn)行復(fù)制，于是雜合區(qū)也跟著得到復(fù)制；④細(xì)胞分裂后，形成一個(gè)轉(zhuǎn)化子和一個(gè)仍保持受體菌原來(lái)基因型的子代。普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過(guò)極少數(shù)完全缺陷噬菌體對(duì)供體菌基因組上任何小片段DNA進(jìn)行“誤包”，而將其遺傳型傳遞給受體菌的現(xiàn)象。(詳細(xì)了解內(nèi)容P219)高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)裂解物、雙重溶源菌。供體菌通過(guò)性菌毛與受體菌直接接觸，把F質(zhì)?；蚱鋽y帶的不同長(zhǎng)度的核基因組片段傳遞給后者，使后者獲得若干新遺傳性狀的現(xiàn)象叫接合。大腸桿菌的4種接合型菌株(了解內(nèi)容P222)有性雜交一般指不同遺傳型的兩性細(xì)胞間發(fā)生的接合和隨之進(jìn)行的染色體重組，進(jìn)而產(chǎn)生新遺傳型后代的一種育種技術(shù)。準(zhǔn)性生殖是一種類似于有性生殖，但比他更原始的兩性生殖方式，這是一種在同種而不同菌株的體細(xì)胞間發(fā)生的融合，他可不借減數(shù)分裂而導(dǎo)致低頻率基因重組并產(chǎn)生重組子。準(zhǔn)性生殖過(guò)程：①菌絲聯(lián)結(jié)；②形成異核體；③核融合；④體細(xì)胞交換和單倍體化?；蚬こ逃址Q遺傳工程，是指人們利用分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，自覺(jué)設(shè)計(jì)、操縱、改造和重建細(xì)胞的遺傳核心——基因組，從而使生物體的遺傳性狀發(fā)生定向變異，以最大限度地滿足人類活動(dòng)的需要?；蚬こ痰幕静僮鳎阂?、目的基因的取得。①適當(dāng)供體物中提?。虎谀孓D(zhuǎn)錄酶作用，由mRNA合成cDNA；③化學(xué)方法合成。二、優(yōu)良載體的選擇。①是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量較小、結(jié)構(gòu)清楚、有自我復(fù)制能力的復(fù)制子；②能在受體細(xì)胞內(nèi)大量擴(kuò)增；③載體上最好只有一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的切口；④必須有一種選擇性遺傳標(biāo)記。三、目的基因與載體DNA的體外重組。四、重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增。五、重組受體細(xì)胞的篩選和鑒定。六、鑒定外源基因的表達(dá)產(chǎn)物。七、“工程菌”或“工程細(xì)菌”的大規(guī)模培養(yǎng)。
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