各種疾病的分子基礎-資料下載頁
2025-03-22 05:03本頁面
【正文】 萬，可以做為基因組的標記 這個多形 性的 Allele是正常的，或者在某種情況下有潛在致病傾向 建構(gòu)全基因組 SNP的晶片，排除個體、種族和環(huán)境非疾病因素的影響，使用晶片來尋找致病基因 CFLP (cleavage fragment length polymorphism ) 單股的 DNA在一定條件下會形成鏈內(nèi)的二級結(jié)構(gòu)，相同長度而 序列有變異 所形成的二級結(jié)構(gòu)會不相同 藉由 structurespecific的內(nèi)切酶 cleavase I來切，就會在正常與變異中形成不同的條帶圖形 ( band pattern) Muts 由 E. coli所分泌， Muts蛋白可以跟錯配的DNA結(jié)合 與錯配的 DNA結(jié)合，造成錯配的 DNA 電泳速度減慢 自動定序 Automated sequencing 使用 Sanger所發(fā)明的雙去氧鏈終止法的原理 利用 DNA聚合酶，一個引子、四種 dNTP、四種ddNTP、單股 DNA 模板，類似 PCR方法， DNA聚合酶催化 5‘→3’ 的複製 因 ddNTP沒有 3‘OH，不能與後續(xù)加入的 dNTP的磷酸基團，形成磷酸雙脂鍵，所以鏈的延伸就會終止 調(diào)整每個定序反應中 ddNTP與 dNTP的比例，任何相對的鹼基都有可能被 ddNTP所取代，只要一取代就形成鏈的終止 定序方法所得到的是大大小單股 DNA 利用 4種螢光分別標記 4種不同的 ddNTPs 自動定序儀以雷射偵測器，偵測時間和不同螢光顏色， 以電腦加以判讀 ?Fluorescence dideoxy Method I 參考資料： ?Fluorescence dideoxy Method II 一般大量檢體可以先用 PCRRFLP來做或PCRSSCP分析，有問題的檢 體再送定序 檢體量少或很重要的檢體，可以做完 PCR後就直接定序 所有篩選突變的方法，最終都必須定序來確定 定序頭尾比較不正確，最好 3‘端及 5’端以另一個引子做定序 目前技術大概可一次定 1000 bp 左右 Minisequencing PCR時，是引子依據(jù)模板逐一加入互補的dNTP做延伸反應 此方法則使用 ddNTP。所以若在引子的 3‘端加入一個雙去氧鹼基就終止了反應 加 ddNTP的位置就是要突變所在 產(chǎn)物跑自動定序分析 Minisequencing反應產(chǎn)生一個 peak就是homozygote (同型合子，純合 子 ) ， 2個peak就是 heterozygote (異型合子，雜合子 ) 初步篩選突變比較常用的是 Sequencing ， SSCP及 DHPLC 定序是目前最好的方法 趨勢是自動化的過程，包括自動化的資料未來分析解讀及自動 化的樣本操作 關鍵技術是 Microarray Sequencing 分子診斷只是將 DNA序列上可能的異?；蛲蛔兣c正常的比對而已 異常及突變太複雜，目前不可能將所有人類的異常突變都點在一片晶片上
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