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正文內(nèi)容

各種疾病的分子基礎(chǔ)(編輯修改稿)

2025-04-18 05:03 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 在 l50~300 bp左右 ) SSCP的結(jié)果判定是與正常樣品來比較 含未變性徹底的雙鏈、及正鏈和負(fù)鏈 有時在某些條件下會出現(xiàn)額外的 band,可能是某條鏈在這種條件下會形成兩種構(gòu)形 變性不徹底的雙鏈,有同源雙鏈外,還有更多異源雙鏈 SSCP會隨著分析片段長度增加而降低檢出率 最好的解析長度是 250 bp左右 1992年 Sarkar等利用 Sanger定序法原理,建立雙去氧指紋法 ( dideoxyl fingerprinting, ddF) ddF是將雙去氧終止法與 SSCP結(jié)合的分析技術(shù), 以一側(cè)引子,對 PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙去氧末端終止定序反應(yīng),以 ddCTP加入反應(yīng)系中, 就會產(chǎn)生一系列長短不一的單鏈 DNA,然後再進(jìn)行 SSCP比較分析 將 SSCP加上螢光及毛細(xì)管電泳的技術(shù)就可以提高 ddF的靈敏度 異源雜合雙鏈分析 Heteroduplex Analysis,HA HA 在非變性膠電泳上,雜合的雙鏈與純合雙鏈的電泳速度不同,雜合速度會減慢 正常基因與突變基因的 PCR產(chǎn)物,可以加熱後緩慢冷卻就會形成異源的雜合雙鏈 個體是突變的純合子,則可以將其 PCR產(chǎn)物與正常個體的 PCR產(chǎn)物 以 1: 1混合 因鹼基錯配,其分子的構(gòu)形與同源雙鏈 DNA不同,可區(qū)分開 HA可分析大於 1 kb的片段,但是片段愈大檢測的效率愈差 使用溫和變性凝膠電泳,電泳的條件與SSCP類似,這種方法稱為 formationsensitive gel electrophoresis (CSGE) 分析 200 ~ 800 bp長度 DNA片段的多形性 Carbodiimide修飾 Carbodiimide Modification 異源雜合的雙鏈,在 C和 T的錯配鹼基中,使用 Carbodiimide來修飾錯配的地方 這種雜合修飾過的錯配雙鏈,在電泳中會改變電泳的速度 (被修飾的 DNA會跑得比較慢 ) 藉由電泳 速度的不同來檢測突變的情形 或使用 primer做延伸反應(yīng),當(dāng)?shù)搅吮恍揎椀膍ismatch鹼基時就會停止引子的延伸,藉由引子延伸反應(yīng)的中止而判斷突變的情形 DHPLC變性高效液相層析 Denaturing high performance liquid chromatography 1995年史丹佛大學(xué)的 Peter Oefner和 Umderhill改進(jìn) HPLC分析 DNA片段的技術(shù) 分析 150 ~ 1000 bp長度多形性 HPLC原理:使用高壓幫浦連續(xù)按一定流量將 溶劑打入層析性中,再將定量的樣品注入管柱頂端,接著連續(xù)洗脫管柱,樣品中各成分,依在管柱中 留置的時間 ( retention time) 不同逐漸分離 DHPLC也稱為 TMHA (temperaturemodulated heteroduplex analysis) 由控制管柱的溫度,選擇一個適當(dāng)溫度,在這溫度下,雜合的雙鏈在錯配鹼基中會發(fā)生部份解鏈,而有部份解鏈的 DNA在管柱中結(jié)合
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