【正文】 的效價測定：o （ 1）試驗菌液的配制： 取金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面上，在 35～ 37℃ 培養(yǎng) 20～22小時后，用 %滅菌氯化鈉溶液洗下菌苔，并用 %滅菌氯化鈉溶液稀釋，使其在 650nm波長處的吸收值為 。o （ 2）含試驗菌的液體培養(yǎng)基配制： 取試驗菌液 ～ III中，搖勻，備用。臨用前，取規(guī)定的試驗菌懸液適量（ 35～ 37℃ 培養(yǎng)3～ 4小時后測定的吸光度在 ～ ，且劑距為 2的相鄰劑量間的吸光度差值 不小于 ），加入到各規(guī)定的液體培養(yǎng)基中，混合。使在實驗條件下能得到滿意的劑量 反應(yīng)關(guān)系和適宜的測定濁度。已接試驗菌的液體培養(yǎng)基應(yīng)立即使用。中國藥典 2022年版硫酸慶大霉素的效價測定：o （ 3）緩沖液： 中國藥典 2022年版硫酸慶大霉素的效價測定：216。 陽性對照： 取 1支試管，加入滅菌水 ，再加入含試驗菌的液體培養(yǎng)基 。216。 陰性對照（空白對照） ：取 1支試管，加入滅菌水 ，再加入含試驗菌的液體培養(yǎng)基，立即加入甲醛溶液 ，混勻，作為吸光度測定的空白液。中國藥典 2022年版硫酸慶大霉素的效價測定：o （ 4）效價測定：o 供試品溶液的配制：取慶大霉素制劑適量，精密稱定，按標示量用滅菌水制成 1000u/ml的溶液，精密量取溶液適量，用 (1:2)的溶液。o 標準品溶液的配制：取慶大霉素標準品適量，精密稱定，用滅菌水制成 1000u/ml的溶液，精密量取溶液適量，用 酸鹽緩沖液稀釋成 (1:2)的溶液。o 分別精密量取高低劑量的供試品溶液和對照品溶液各 ，置滅菌試管中，每個濃度 6管，分別加入實驗培養(yǎng)基 ，立即搖勻，置 37℃ 水浴培養(yǎng) 3～ 4小時，取出，立即加入甲醛溶液，搖勻，照分光光度法，在 530nm波長處測定吸收值，照生物檢定統(tǒng)計法（附錄 XIV）中的 ，同時與管碟法進行了比較，結(jié)果如下： 測定結(jié)果的比較 ： 預試驗 → 試驗準備 → 供試品、標準品溶液的制備 → 菌液培養(yǎng)基的制備 → 加抗生素溶液→ 比色管的培養(yǎng) → 菌濃度的測量 → 結(jié)果的可靠性檢驗及效價測定o 預試驗： 確定最佳的試驗條件：調(diào)整試驗菌的濃度、使用量、抗生素終濃度、培養(yǎng)基等，使高、低劑量濃度標準品溶液所致的菌液濃度的吸收值在 ~；高、低劑量濃度標準品溶液所致的菌液濃度的吸收值的差值大于。o 試驗準備： 比色管、攪拌轉(zhuǎn)子、塞子的清洗及滅菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培養(yǎng)基、緩沖液的準備、半無菌間的紫外消毒等。 o 供試品、標準品溶液的制備： 估計供試品的效價，根據(jù)試驗要求設(shè)計供試品、標準品溶液稀釋步驟，平行制備供試品、標準品相關(guān)劑量的溶液。o 菌液培養(yǎng)基的制備： 根據(jù)預試驗確定加入液體培養(yǎng)基的菌液量，注意制備菌液與培養(yǎng)基充分混勻。o 加抗生素溶液： 在比色管中定量加入抗生素溶液后，再定量加入菌液培養(yǎng)基，混勻后，在規(guī)定溫度培養(yǎng)。o 菌濃度的測量： 在 530nm或其他波長 (580nm)處測定各比色管的菌液濃度，注意測定時間的一致性。o 結(jié)果的可靠性檢驗及效價結(jié)果：o 加菌量的影響：加菌量的多少（ %、%、 %），影響培養(yǎng)至適宜的菌液測定濃度所用的時間，加菌量過少，則測定時可利用的濃度范圍窄。o 各抗生素各濃度之間的吸收度的差值在 以上為佳，此時菌液對不同濃度的抗生素敏感，測定誤差較低。 項 ：o 比色池的清潔： 測定用的比色管需用硝酸－硫酸（5： 95）浸泡并用蒸餾水沖洗干凈，不要有污漬和劃痕，與分光光度計的試管要匹配，要清除抗生素殘留和清洗液的痕跡，除去纖維等雜質(zhì)。 項o 時間的一致性： 主要是使每管的培養(yǎng)時間相等，實驗時在試管中加入含試驗菌液的培養(yǎng)基后，應(yīng)立即加入標準品溶液和供試品溶液，混合均勻。必要時可先將培養(yǎng)基冷卻至 2～ 4℃ 左右，再接種菌種，并在此溫度下，將含菌培養(yǎng)基加至各試管中，可避免加注試管先后的誤差。培養(yǎng)終止時將各管同時放入冰浴中，并盡快加入甲醛溶液滅活，使各試驗管的培養(yǎng)時間一致。 項o 測定時氣泡的影響： 在測定比濁法讀數(shù)前必須將培養(yǎng)基充分搖勻才能準確測定細菌的濃度，但振搖產(chǎn)生的氣泡嚴重干擾了測定結(jié)果。如在充分搖勻后放置一段時間，待氣泡消失后再進行測定，雖然仍可逐漸下沉，但其誤差較小。6. 影響因素o 培養(yǎng)溫度控制：u 溫度的均勻性直接影響試驗菌的生長速率。美國藥典 28版中對管碟法的培養(yǎng)溫度要求為 177。 ％，而比濁法的溫度要求 177。 ％，更為嚴格。u 一般恒溫水浴的各部位仍有差異，應(yīng)有攪拌裝置，使培養(yǎng)溫度均勻。u 培養(yǎng)管的材質(zhì)和管壁的厚度及體積大小應(yīng)均勻一致，若厚薄不均可能影響溫度的傳導，使培養(yǎng)溫度不均一。u 在水浴中供試品溶液和標準品溶液的放置位置最好按隨機區(qū)組分配，以抵消溫度的差異。o通氣 ： 靜置培養(yǎng)時，細菌慢慢沉降至底部，會產(chǎn)生梯度的微生物生長區(qū)和微生物代謝環(huán)境，表面為微親氧性，底部為厭氧性。如采用振搖培養(yǎng)，可增加氧的供應(yīng)，促進細菌生長，縮短培養(yǎng)時間。o 菌液的濃度（吸光度）： 分光光度計最正確的測量范圍在 ～ 。比濁測定時，控制菌液濃度的吸收度應(yīng)控制在此范圍內(nèi)， 可獲得較為正確的結(jié)果。o菌液需新鮮配制： 當天使用，若放在冰箱放置一段時間后再使用，所測定的數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，誤差大（金葡）。因為菌液在放置一段時間后，細菌老化死亡，但測定的吸收值不變，從而影響試驗時活菌的量，使結(jié)果產(chǎn)出偏差。 注意菌種使用不超過 5代。 7 比濁法的特點和儀器要求比濁法的特點：o優(yōu)點：o 與管碟法比較，比濁法具有快速，試驗過程 3～ 4小時，加上其他操作，可在當天獲得結(jié)果；o 采用液體培養(yǎng)基，無擴散因素的影響，試驗的靈敏度高，結(jié)果的精密度和正確度都較瓊脂擴散法好。比濁法的特點：o缺點：o 對試驗儀器的性能及試驗器具的要求較高，如培養(yǎng)溫度要求一致，比色管的清潔等。o 任何影響液體培養(yǎng)基內(nèi)微生物生長的因素都會影響抗生素效價的測定。比濁儀 比色管o 可選擇多個實驗波長 根據(jù)藥典采用了 3個波長 5 580、 650，用戶可以根據(jù)要求進行實驗！鎢燈濾光片透鏡培養(yǎng)皿透鏡接收器自動判別，生成唯一報告 在生物生長過程中根據(jù)生物生長特性，自動判別，生成唯一報告CBZ1抗生素比濁法測量儀o 對微生物進行 在線監(jiān)測、測控、培養(yǎng) 并在線完成 測量CBZ1抗生素比濁法測量儀小 結(jié)：o 抗生素微生物檢定法雖然操作繁瑣，需培養(yǎng)有經(jīng)驗的操作人員，整個操作過程需時較長，影響因素多，可信限率高，誤差相對較大，但在各國藥典中仍為不可缺少的部分。o 通過儀器精度的提高、培養(yǎng)基質(zhì)量達到標準化，則微生物檢定法的誤差會大大降低。謝 謝 大 家 ！題o 抗生素微生物檢定方法以實驗設(shè)計原理不同可分為： 稀釋法 、 比濁法 、 瓊脂擴散法 。各國藥典通常采用 后兩種方法 測定抗生素的效價。o 中國藥典要求在管碟法的二劑量法中，標準品溶液高濃度所致抑菌圈直徑在 18～ 22mm。除藥典各論另有規(guī)定外，本法的可信限率不得超過 5%。o 中國藥典要求在比濁法中，高、低劑量濃度標準品溶液所致的菌液濃度的吸收值在 ～ ；高、低劑量濃度標準品溶液所致的菌液濃度的吸收值的差值 大于 。簡述題：簡述管碟法的操作步驟o ：確定最佳的試驗條件：調(diào)整試驗菌的濃度、使用量、抗生素終濃度、培養(yǎng)基等，使抑菌圈的大小符合規(guī)定：高劑量濃度溶液所致的抑菌圈直徑在 18～22mm。高劑量與低劑量的抑菌圈直徑之差最好不小于 2mm。o ：雙碟、鋼管、毛細滴管、吸管的清洗及滅菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培養(yǎng)基、緩沖液的準備、半無菌間的紫外消毒等。o ：每只雙碟加底層培養(yǎng)基約 20ml，待培養(yǎng)基凝固，待用。o 、標準品溶液的制備：估計供試品的效價，根據(jù)試驗要求設(shè)計供試品、標準品溶液稀釋步驟，平行制備供試品、標準品相關(guān)劑量的溶液。o ：每只雙碟加入 5ml菌層培養(yǎng)基。注意菌層培養(yǎng)基溫度；根據(jù)預試驗確定加入菌層培養(yǎng)基的菌液量，注意制備菌層的速度和平整度。o ：在每個雙碟的 4個鋼管中，對角的兩個鋼管分別滴加高濃度和低濃度的標準品溶液，其余兩個對角位置的鋼管分別滴加相應(yīng)的高、低濃度的供試品溶液。o ：根據(jù)培養(yǎng)溫度的要求在培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中水平疊放的雙碟數(shù)以不超過三層為宜。o ，結(jié)果的可靠性檢驗及效價測定