【正文】 革蘭氏染色、顯微鏡檢查和過氧化氫酶試驗。過氧化氫酶陰性、革蘭氏染色陽性、無芽孢、著色不均勻、出現(xiàn)“Y”或“V”型的分叉狀、或棒狀等多形態(tài)的桿菌可定為雙歧桿菌；表51 雙歧桿菌在不同培養(yǎng)基上菌落生長形態(tài)特征培養(yǎng)基雙歧桿菌特征BBL培養(yǎng)基為黃色菌落中等大小，表面光滑、凸起、邊緣整齊呈奶油色，質(zhì)地柔軟、細膩TPY培養(yǎng)基為黃色菌落表面光滑、凸起，邊緣整齊呈奶油色、瓷白色，質(zhì)地柔軟細膩⑺菌落計數(shù)：根據(jù)證實為雙歧桿菌的菌落數(shù)，計算出平皿內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)，然后乘以樣品的稀釋倍數(shù)，得每毫升樣品中雙歧桿菌數(shù)；取兩種培養(yǎng)基中計數(shù)較高的為最終結果；例如，檢樣1104倍的稀釋液在BBL瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個；取5個鑒定，證實為雙歧桿菌的是4個，則1mL樣品中，雙歧桿菌數(shù)為：10344/5104=106 10L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)試驗10升發(fā)酵罐的發(fā)酵試驗結果 (見表52)表52 三批次10升罐發(fā)酵液的活菌數(shù)活菌數(shù)批次雙歧桿菌（cfu/ml）201004031092010040810920100412109平均109經(jīng)過兩次對發(fā)酵系統(tǒng)進行微調(diào)后，發(fā)酵效果良好，雙歧桿菌產(chǎn)物的數(shù)量和質(zhì)量達到預期效果，發(fā)酵液的雙歧桿菌活菌數(shù)均達到每mL在10億個以上。將發(fā)酵進一步擴大到100升發(fā)酵罐進行生產(chǎn)研究試驗。 100L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)試驗100升發(fā)酵罐的發(fā)酵研究結果（見表53）表32 三批次100升罐發(fā)酵的活菌數(shù)活菌數(shù)批次雙歧桿菌（cfu/ml）201004161092010042010920100425109平均109三次厭氧發(fā)酵試驗中，雙歧桿菌活菌數(shù)均達到每mL在10億個以上。厭氧條件良好，雙歧桿菌活性高，且無雜菌污染。產(chǎn)量達到基本生產(chǎn)要求，厭氧發(fā)酵方案可用于實際生產(chǎn)。 本章小結通過“雙歧桿菌生理特性試驗”得到的發(fā)酵培養(yǎng)方案，可用于實際生產(chǎn)。此外，10L擴大培養(yǎng)試驗的平均產(chǎn)量比100L擴大培養(yǎng)產(chǎn)量少，初步估計是由于10L發(fā)酵罐設備老化，使厭氧環(huán)境相對不良而導致的。若條件允許，可用新的10L發(fā)酵罐再進行一次擴大發(fā)酵試驗，驗證發(fā)酵方案的可行性。6 結論與展望 結論 本文研究了從仔豬糞便中提取并鑒定出雙歧桿菌，并嘗試用于生產(chǎn)的相關內(nèi)容。詳細研究了將豬源雙歧桿菌用于擴大發(fā)酵生產(chǎn)的最佳培養(yǎng)方案，和合適的生產(chǎn)發(fā)酵周期。所得結論如下：⒈燭缸法和焦性沒食子酸法結合的厭氧培養(yǎng)方法培養(yǎng)雙歧桿菌，厭氧效果良好；培養(yǎng)成功率達到90%以上⒉成功分離雙歧桿菌，馴化出的菌種具有一定的氧耐受性⒊通過一系列試驗，成功確定了雙歧桿菌發(fā)酵培養(yǎng)的最佳方案⒋成功描繪出雙歧桿菌在最佳發(fā)酵方案下的生長曲線，并大致測定了在該方案下的產(chǎn)酸情況⒌通過試驗，把發(fā)酵生產(chǎn)規(guī)模逐步擴大到100升發(fā)酵罐。并且發(fā)酵結果符合生產(chǎn)要求。 展望雙歧桿菌具有很重要的保健功效和醫(yī)用價值，本研究工作尚屬初步，今后可在下述方面進行更為深入和廣泛的研究：⒈嘗試使用天然培養(yǎng)基，如胡蘿卜汁、番茄汁、牛乳等培養(yǎng)基代替合成培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)雙歧桿菌。⒉進一步以人源雙歧桿菌為研究材料，研究其發(fā)酵生產(chǎn)方案。并與豬源雙歧桿菌的保健和醫(yī)用功效作對比。⒊進一步研究雙歧桿菌產(chǎn)品的包裝和保鮮技術，以保證雙歧桿菌產(chǎn)品的菌活性。⒋雙歧桿菌屬放線菌門，由于其形態(tài)特征，對剪應力有一定的敏感度?？梢詮拇颂幦胧郑M一步研究發(fā)酵罐內(nèi)螺旋槳攪拌功率對雙歧桿菌生長的影響。參考文獻[1]李永敬 金蘇：《益生菌與健康生活》[M]中國輕工出版社 2005[2]張剛：《乳酸細菌——基礎技術和應用》[M]化學工業(yè)出版社 2007[3]陳歷?。骸度槠房茖W與技術中》[M]國輕工業(yè)出版社 2007[4]郭興華：《益生乳酸細菌——分子生物學及生物技術》[M]科學出版社 2005[5]王順余：《雙歧桿菌的研究現(xiàn)狀》[J]《長春大學學報》2007年08期 第15頁[6] 張明江等：《雙歧桿菌用于腫瘤基因治療的研究現(xiàn)狀》[J]《中國微生態(tài)學雜志》2006年02期 第145頁[7]員克勤 張帥清：《焦性沒食子酸培養(yǎng)厭氧菌的體會》[J]《實用預防醫(yī)學》1996年04期[8]楊寶蘭 冉陸等：《食品衛(wèi)生微生物學檢驗——雙歧桿菌檢驗》[C]《中華人民共和國國家標準 GB/》附錄I 培養(yǎng)基的配制⒈PTYG培養(yǎng)基：成分：胰胨Tryptone (Oxoid)，,，酵母粉(Oxoid)，吐80 ,， ，蒸餾水1 。pH 制法：將以上成分加熱完全溶解，分裝于錐形瓶中，115℃高壓滅菌30min。⒉TPY瓊脂培養(yǎng)基：成分：，，5%，磷酸氫二鉀（K2HPO4），氯化鎂（MgCl26H2O），硫酸鋅（ZnSO47H2O），氯化鈣（CaCl2），氯化鐵（FeCl3）微量，吐溫80 ，蒸餾水1 。177。制法：將以上成分加熱完全溶解，177。，分裝錐形瓶，115℃高壓滅菌15min~20min。⒊BBL瓊脂培養(yǎng)基：成分：，酵母粉 ，，5%，吐溫80 ，肝提取液 ，瓊脂 。177。制法：⑴西紅柿浸出液的制備：將新鮮西紅柿洗凈稱重后切碎，加等量蒸餾水在100℃水浴中加熱，時時攪拌，約90min，然后用絨布過濾，分裝錐形瓶115℃高壓滅菌15min~20min。⑵肝提取液的制備：稱取新鮮豬肝1 000g，切成小塊，加蒸餾水至2 000mL，混勻，置冰箱中過夜。第二天煮沸15min~20min，絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補足原量。分裝錐形瓶。⑶按上述成分配制，分裝錐形瓶，115℃高壓滅菌15min~20min。附錄II 雙歧桿菌的糖代謝途徑雙歧桿菌體內(nèi)存在的糖代謝途徑是異型乳酸發(fā)酵的雙歧桿菌途徑，又稱HK途徑。這是一條僅存在于雙歧桿菌中特殊異性乳酸發(fā)酵途徑。其特點是2分子葡萄糖可產(chǎn)生3分子乙酸、2分子乳酸和5分子ATP，同時在途徑中存在著兩種磷酸轉酮酶，其一為6磷酸果糖磷酸轉酮酶催化6磷酸果糖生成4磷酸丁糖（4磷酸赤蘚糖）和乙酰磷酸；另一為5磷酸木糖磷酸轉酮酶，催化3磷酸木糖生成3磷酸甘油醛和乙酰磷酸。如附圖。附圖 異型乳酸發(fā)酵的雙歧桿菌途徑2葡萄糖①2ATP2ADP6磷酸果糖6磷酸果糖Pi4磷酸赤蘚糖乙酰磷酸3磷酸甘油醛②③7磷酸景天庚酮糖5磷酸木酮糖5磷酸核糖5磷酸核酮糖5磷酸木酮糖23磷酸甘油醛2乙酰磷酸2NAD2NADH24ADP4ATP2NADH22NAD2Pi2乳酸2Pi2乙酸2ADP2ATP乙酸ADPATP④⑤⑥⑦⑧⑧⑨①己糖激酶和6磷酸葡萄糖異構酶 ②6磷酸果糖磷酸轉酮酶 ③轉醛醇酶 ④轉羥乙醛酶（轉酮醇酶） ⑤5磷酸核糖異構酶 ⑥5磷酸核酮糖3表異構酶 ⑦5磷酸木酮糖磷酸轉酮酶 ⑧乙酸激酶 ⑨同EMP途徑相應酶（包括3磷酸甘油醛脫氫酶、磷酸甘油酸激酶、磷酸甘油酸變位酶、烯醇脢、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶）謝 辭歷經(jīng)幾個月的畢業(yè)論文結束了，大學四年的學習也即將隨之落幕?；叵胨哪陙碓诒本├砉ご髮W珠海學院的學習和生活，要衷心感謝這個學校為我們提供良好的學習和生活環(huán)境，感謝四年來教授我知識的老師們，感謝給予我?guī)椭耐瑢W們。因為這些，我在北京理工大學珠海學院，積累了豐富的知識，培養(yǎng)了嚴謹?shù)倪壿嬎伎寄芰?，為我今天的論文奠定了扎實的基礎。在這里我要特別感謝我的指導老師周新明老師，在他的悉心指導下，我的論文得到不斷完善。他嚴謹、求真、務實的求學態(tài)度給我留下了深刻的印象，是我今后工作，學習的榜樣！同時他淵博的學識和豐富的人生經(jīng)驗，讓我學到了很多我在書本上學不到的知識！另外要感謝廣州市微生物研究所梁淑娃高級工程師以及陳勉華師姐、趙培靜師姐。因為梁淑娃工程師的關愛，讓我有幸參與這次重要的研究。在研究的過程中，我在陳勉華師姐和趙培靜師姐兩位前輩的身上學到了對求真的執(zhí)著和對工作的熱情。本文在編寫過程終參考了大量寶貴的文獻資料，在此謹向文獻資料的作者表示誠摯的敬意和衷心的感謝!同時，論文的順利完成，離不開其它各位老師、同學和朋友的關心和幫助。在整個的論文寫作中，各位老師、前輩、同學和朋友積極的幫助我查找資料和提供有利于論文寫作的建議和意見，在他們的幫助下，論文得以不斷的完善，最終幫助我完整的寫完了整個論文。感謝這些老師、前輩、同學和朋友們！另外，要感謝在大學期間所有傳授我知識的老師，是您們的悉心的教導使我有了良好的專業(yè)課知識，這也是論文得以完成的基礎。感謝我的大學和所有幫助過我并給我鼓勵的老師，同學和朋友