pcr引物設(shè)計(jì)黃金原則-資料下載頁(yè)
2025-01-16 05:18本頁(yè)面
【正文】 與探針離得越近越好，但不能重疊。 6)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度： 引物的產(chǎn)物大小不要太大，一般在80250bp之間都可；80～150 bp最為合適（可以延長(zhǎng)至300 bp）。 7)引物的退火溫度要高，一般要在60度以上； 要特別注意避免引物二聚體和非特異性擴(kuò)增的存在。 而且引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)該考慮到引物要有不受基因組DNA污染影響的能力，即引物應(yīng)該跨外顯子，最好是引物能跨外顯子的接頭區(qū)，這樣可以更有效的不受基因組DNA污染的影響。 至于設(shè)計(jì)軟件，PRIMER3,PRIMER5,PRIMER EXPRESS都應(yīng)該可以的。 做染料法最關(guān)鍵的就是尋找到合適的引物和做污染的預(yù)防工作。對(duì)于引物，你要有從一大堆引物中挑出一兩個(gè)能用的引物的思想準(zhǔn)備尋找合適的引物非常不容易。 關(guān)于BLAST的作用應(yīng)該是通過(guò)比對(duì)，發(fā)現(xiàn)你所設(shè)計(jì)的這個(gè)引物，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并在GENEBANK中公開(kāi)的不物種基因序列當(dāng)中，除了和你的目標(biāo)基因之外，還有沒(méi)有和其他物種或其他序列當(dāng)中存在相同的序列，如和你的目標(biāo)序列之外的序列相同的序列，則可能擴(kuò)出其他序列的產(chǎn)物，那么這個(gè)引物的特異性就很差，從而不能用。
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