高中生物選修三基因工程的基本操作程序-資料下載頁
2025-01-09 13:17本頁面
【正文】 A分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合 ,在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收 DNA分子 ,完成轉化過程 . 第二步 目的基因在受體細胞內，隨其繁殖而 復制 ，由于細菌 繁殖的速度 非?？欤诤芏痰臅r間內就能獲得 大量 的目的基因。 四 目的基因的檢測與鑒定 導入過程完成后，全部受體細胞都能攝入重組 DNA分子嗎？ 真正能攝入重組 DNA分子的受體細胞很少。 目的基因進入受體細胞后，是否都能穩(wěn)定維持 和表達？ 不一定，需要檢測 ： 分子雜交技術： （ 1） DNA分子與 DNA分子的之間雜交 （ 2） DNA分子與 RNA分子的之間雜交 （ 3）蛋白質分子（抗原與抗體）之間雜交 ： 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 轉基因生 物的 DNA 探針 15N 15N 14N 14N （ 1）檢測轉基因生物染色體的 DNA上是否插入了 目的基因 基因探針： 放射性同位素等標記的 DNA分子 方法： DNA分子雜交技術 變性 變性 如果顯示出雜交帶，就表明待測樣品含有目的基因。 變性 方法： DNA分子雜交技術 （ 2）檢測目的基因是否轉錄出了 mRNA 探針 15N 15N 轉基因生物 的 mRNA 14N 14N 如果顯示出雜交帶，就表明待測樣品目的基因已經(jīng)轉錄。 提取 （ 3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質 方法 ： 抗原 抗體雜交 蘇云金桿菌 Bt毒素蛋白 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內 從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體 抗體 蛋白質 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 證明： 提取蛋白質與 Bt毒素蛋白質一樣 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。如蟲吃后中毒死亡，則說明攝入了抗蟲基因并得到表達。 —— 個體生物學水平的鑒定 （ 1）多細胞個體 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 不能，受體細胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了 表達 。 受體細胞攝入 DNA分子后就說明目的基因完成了表達嗎？ 若不能表達，要對抗蟲基因再進行 修飾 。 細菌的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。淘汰無表達產(chǎn)物的菌落，保留有表達產(chǎn)物的進一步培養(yǎng)、研究。 （ 2）單細胞生物 無表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 有表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 基因工程的基本操作程序 目的基因的獲取 基因表達載體的構建 將目的基因導入受體細胞 目的基因的檢測與鑒定 從基因文庫中獲取目的基因 利用 PCR技術擴增目的基因 化學方法人工合成 復制原點 + 目的基因 + 啟動子 + 終止子 + 標記基因 農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射法、 Ca2+處理法 DNA分子雜交技術、分子雜交技術、抗原 — 抗體雜交技術 分子檢測外的個體水平鑒定
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