【正文】 、固定化生長態(tài)細(xì)胞通常用包埋法。 29 迄今從生物界發(fā)現(xiàn)的酶的種類有 3， 000 多種 。 29 細(xì)胞的固定化方法有吸附法，包埋法，交聯(lián)法及共 價結(jié)合法。 29 用吸附法制備固定化酶時， 每克無機(jī)載體吸附的蛋白質(zhì)量為大于 1mg。 29 細(xì)胞因子的有效濃度常在 10101014mol∕ L 之間。 300、 細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的中心成分是 IL1。 30 細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵成份是 IL6。 30 IL— 1 的生物學(xué)活性表現(xiàn)于激活 T 或 B淋巴細(xì)胞。 30 IL— 3 由激括的 T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。 30 淋巴細(xì)胞生成素 I 是指 IL— 7。 30 細(xì)胞因子合成抑制因子是指 1L— 10。 30IL— 12 是由 B 淋巴細(xì)胞分泌的。 30 TNF 是指腫瘤壞死因子。 30TNF 抗腫瘤的重要機(jī)理 之 — 是直接的細(xì)胞毒作用。 30 IFN 是指干擾素。 3 EPO 的主要代謝器官是肝臟。 31 能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生 IFN 的一類物質(zhì)統(tǒng)稱干擾素誘生劑。 31 干擾素效價的國際單位數(shù)與蛋白含量的毫克數(shù)之比即活性。 31 低濃度的干擾素基本沒有療效的原因是 IFN 不易進(jìn)人組織間液。 31 干擾素的受體主要存在于細(xì)胞膜。 31 把干擾素直接導(dǎo)入“靶灶”內(nèi)即所謂的聚射。 31粒細(xì)胞集落刺激因子是 — 種糖蛋白。 31 CSF 中唯 —— 種沒有種間特異性的是巨噬細(xì)胞集落刺激因子 。 31 EPO 為穩(wěn)定的耐熱蛋白， 800c不變性 。 31 rhEPO 用于治療 CRF期間最常見的副作用是患者的血壓升高。 3 LT即淋巴細(xì)胞毒素。 32 TNFR是指腫瘤壞死因子受體。32 細(xì)胞因子所構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)的中心成份是 IL— 1。 32 根據(jù)等當(dāng)點的不同將 IL— 1分為 ab型。 32 聯(lián)合化療中， TNF 與 IFN— r 可發(fā)揮顯著協(xié)同作用。 32 IFN 主要在外周血單核細(xì)胞中誘生。 32 IFNa可抑制細(xì)胞生長，通常使細(xì)胞停止于細(xì)胞周期中的 G1 期。 32 集落刺激因子的縮寫是 CSF。 32 紅細(xì)胞生成素來源于腎臟。 32 血氧含量低，心肌功能不全．溶血性貧血 等原因均能導(dǎo)致紅細(xì)胞生成素的分泌量 增 加；而垂體功能低下本身并不能導(dǎo)致紅細(xì)胞生成素的分泌增加。 3 刺激紅細(xì)胞生成素生成的關(guān)鍵因素是機(jī)體的缺氧。 33 目前檢測白介素最敏感的方法是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。 33 干擾素屬于蛋白類。 33 2， — 5’ A 合成酶、蛋白激酶及磷酸二脂酶等均屬于干擾素誘生的抗病毒蛋白，而糖基化酶則與干擾素?zé)o關(guān)。 33 干擾素中，純化后最穩(wěn)定的是 IFNa。 33 干擾素的受體主要存在于細(xì)胞膜中。33 白介素 — 2 的生物學(xué)作用主要是刺激細(xì)胞增生。 33 酵母屬于真核生物，大腸肝菌，放線菌及蘭細(xì)菌 等屬于原核生物，但它們均為單細(xì)胞生物。 33 NK 細(xì)胞能耐受射線照射，而 CTL 細(xì)胞， K 細(xì)胞，LAK 細(xì)胞等均不能耐受射線的照射 。 33 CTL 細(xì)胞對射線照射最為敏感。 3 B 細(xì)胞具有表面球蛋白，而 T 細(xì)胞、 NK 細(xì)胞、 K細(xì)胞的表面則不具有表面球蛋白。 34 T 細(xì)胞具有形成玫瑰花結(jié)的能力。 34TNF 對蛋白酶最為敏感。 34 具有生物活性的腫瘤壞死因子為三聚體構(gòu)型。 34 細(xì)胞因子使用的最終效應(yīng)部位在細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。 34細(xì)胞因子多為單鏈分子，其基因多由多個外顯子和內(nèi)含子組成，但其基因均為單拷貝， 34 TL— 5對細(xì)胞的作用包括增強 B細(xì)胞的功能，促進(jìn)活性 B 細(xì)胞分泌，并可誘導(dǎo) B 細(xì)胞表達(dá) IL— 2 受體。 34 IL— 8可來源子單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、 T 細(xì)胞等。 34 IFN 的蛋白產(chǎn)物包括 IFN— a， IFN— B 及 IFN— r。 34IFN— B 在成纖維細(xì)胞中誘生。 350、 IFN— r由有絲分裂原誘生。 35TNF 也可誘生 IFN。 35 IFN 可抑制病毒的生活周期的許多階段，包括病毒的吸附和脫殼、早期病毒轉(zhuǎn)錄、病毒轉(zhuǎn)譯、蛋白合成及從細(xì)胞表面芽生。 35 EP0 的主要來源為腎小管，腎間質(zhì)細(xì)胞。 35 可導(dǎo)致 EPO 生成增加的因素包括高原氣候、冠心病、肺心病、溶血性貧血等。 35 細(xì)胞因子研究發(fā)展前景包括細(xì)胞因子的加工改造，細(xì)胞因子的受體及其免疫調(diào)節(jié)的信息傳遞，細(xì)胞因子基因表達(dá)的調(diào)控，分子水平上了解在疾病治療中的作用以及作為有效的免疫佐劑。 35 天然干擾素是 — 種糖蛋白。 35 干擾素對蛋白酶敏感。 35 干擾素可導(dǎo)致病毒繁殖中斷。 35 干擾素具有廣泛的抗病毒活性。 360、 干擾素基因在正常生理狀態(tài)下不表達(dá)。 36 IFN對免疫功能的調(diào)節(jié)作用包括增強巨噬細(xì)胞活力，使補體水平下降及延長同種移植物的排斥反應(yīng)。36 人白細(xì)胞干擾素制劑的半成品檢定包括比活性測定、無菌試驗、余毒試驗、安全試驗及硫氰酸鉀殘余量檢測。 36 干擾素制劑大劑量使用的最佳途徑是批注，皮下注射。 36 干擾素制劑的局部用藥多采用噴霧、貼敷、滴鼻。 36 干擾素臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥包括急性病毒性感染、慢性病毒性感染、惡性腫瘤、器官移植患者、乙型腦炎等。 36 T 細(xì)胞的激活與增殖包括三個時期，即細(xì)胞產(chǎn)生白介素 — 2及其受體表達(dá)，細(xì)胞進(jìn)入白介素 2 依賴期，進(jìn)入不依賴白介素 2的增殖期。 36 白介素 2 的臨床應(yīng)用包括抗病毒感染、抗細(xì)菌感染、抗腫瘤及艾滋病 的治療等。 36 關(guān)于集落刺激因子的特性，目前認(rèn)為四種集落刺激因子無序列同源性，均為糖蛋白分子，四種集落刺激因子各有特征的膜受體。 36 紅細(xì)胞生成素的臨床應(yīng)用包括慢性腎功能功能衰竭、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌性貧血、早產(chǎn)嬰兒自體輸血及用于外科手術(shù)的輔助治療等 。 370、 細(xì)胞因子大都是糖蛋白類物質(zhì) 。 37糖基成份對細(xì)胞因子活性影響不大 。 37 IL— 1a 與 IL— 1β 可識別相同的受體 。 37 LPS 可誘導(dǎo)單核細(xì)胞但不能誘導(dǎo)皮膚纖維母細(xì)胞產(chǎn)生 IL— 8。 37 去除糖鏈后 IL— 10 的抗原性不受影響。 37 TNF 發(fā)揮作用 有相對的細(xì)胞周期特異性。 37 TNF 直接注入是很有效的。 37體內(nèi) IFN通常在嚴(yán) 格的誘導(dǎo)控制下產(chǎn)生。 37 IFN 可以抑制正常細(xì)胞的生長。 37 對晚期癌癥 IFNr不優(yōu)于 IFNa。 380、 體外實驗表明 CSF可引起腫瘤細(xì)胞增殖。 38 高原居民的 EPO 生成增加。 38 EPO 并不能完全消除貧血。 38 細(xì)胞因子很難用常規(guī)方法純化。 38 TNF具有抗腫瘤作用。 38 誘導(dǎo) TNF 合成須經(jīng)過兩個階段：起動期．促發(fā)期。 38 TNF 經(jīng)鑒定有兩類： TNFa， TNFB。 38 TNF 分子量因來源不同，制備方法不同及 測定方法不同相差較大。 38 TNF 與其它細(xì)胞因子，化療藥物聯(lián)合作用可以降低 TNF 劑量及副作用，提高療效。 重點 1． 重組 DNA，技術(shù)通常包括： (1)基因重組載體的選擇和制備， (2)目的基因的分離純化；（ 3)目的基因與載體的重組； (4)重組克隆的轉(zhuǎn)化與感染；（ 5）重組克隆的篩選與鑒定；（ 6）目的基因的表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的分離與提純。 2． 載體的基本條件： (1)本身是 — 個復(fù)制子，能自我復(fù)制；（ 2）分子量要?。唬?3）帶選擇標(biāo)記，以便進(jìn)入宿主細(xì)胞后有可辨認(rèn)的表型特征；（ 4）對幾種限制性酶有單一切點；（ 5）有一定的非必要區(qū)，在這段插入外源基因不影響其復(fù)制。 3． 可作為載體的有： (1)質(zhì)粒；（ 2)入噬菌體； (3)Mi3噬菌體； (4)科斯質(zhì)粒； (5)動、植物病毒。 4． 選擇裂解細(xì)菌的方法取決于 ： (1)質(zhì)粒的大?。?(2)大腸桿菌菌株； (3)裂解后用于純化質(zhì)粒 DNA 的技術(shù)； 5． 選擇裂解細(xì)胞的一般準(zhǔn)則 ： (1)大質(zhì)粒 (大于 15Kb)易受損，故應(yīng)采用溫和裂解法 (SDS裂解法 )從細(xì)胞中釋放出來：（ 2)對于小質(zhì)粒，可加入 EDTA后樂用溶菌酶處理，再通過煮沸或堿處理使之裂解。 6． 入噬菌體作為克隆載體的特點是： (1)入噬菌體可在體外包裝成病 毒顆粒，高效地轉(zhuǎn)染大腸桿菌； (2)入 DNA 的長度只有在野生入噬菌體的 75％ 105％之間才能夠包裝； (3)入噬菌體適于克隆大片段 DNA 及組建基因文庫。 7． 科斯質(zhì)粒的特點是： （ 1）具有入噬菌體的特性能高效的轉(zhuǎn)染 宿主細(xì)胞，單它不含入噬菌體的全部必要基因，不能裂解生成噬菌斑； (2)具有質(zhì)粒載體的特性，帶有質(zhì)粒的抗性基因而易于篩選。 8． M13載體的優(yōu)點 ：(1)單鏈 DNA噬菌體的復(fù)制，是以雙鏈 DNA 為中間媒介；利于體外純化；(2)不論單鏈 DNA 還是雙鏈復(fù)制形式 DNA 均能夠感染大腸桿菌； (3)單鏈 DNA 噬菌體顆粒的大 小，是受其 DNA 多寡制約，而不