【正文】 6． 入噬菌體作為克隆載體的特點是： (1)入噬菌體可在體外包裝成病 毒顆粒，高效地轉(zhuǎn)染大腸桿菌； (2)入 DNA 的長度只有在野生入噬菌體的 75％ 105％之間才能夠包裝； (3)入噬菌體適于克隆大片段 DNA 及組建基因文庫。 重點 1． 重組 DNA，技術(shù)通常包括： (1)基因重組載體的選擇和制備， (2)目的基因的分離純化；（ 3)目的基因與載體的重組； (4)重組克隆的轉(zhuǎn)化與感染；（ 5）重組克隆的篩選與鑒定；（ 6）目的基因的表達及表達產(chǎn)物的分離與提純。 38 誘導(dǎo) TNF 合成須經(jīng)過兩個階段：起動期．促發(fā)期。 38 高原居民的 EPO 生成增加。 37體內(nèi) IFN通常在嚴(yán) 格的誘導(dǎo)控制下產(chǎn)生。 37 LPS 可誘導(dǎo)單核細(xì)胞但不能誘導(dǎo)皮膚纖維母細(xì)胞產(chǎn)生 IL— 8。 36 紅細(xì)胞生成素的臨床應(yīng)用包括慢性腎功能功能衰竭、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌性貧血、早產(chǎn)嬰兒自體輸血及用于外科手術(shù)的輔助治療等 。 36 干擾素臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥包括急性病毒性感染、慢性病毒性感染、惡性腫瘤、器官移植患者、乙型腦炎等。 36 IFN對免疫功能的調(diào)節(jié)作用包括增強巨噬細(xì)胞活力，使補體水平下降及延長同種移植物的排斥反應(yīng)。 35 干擾素對蛋白酶敏感。 35 EP0 的主要來源為腎小管，腎間質(zhì)細(xì)胞。 34IFN— B 在成纖維細(xì)胞中誘生。 34 細(xì)胞因子使用的最終效應(yīng)部位在細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。 3 B 細(xì)胞具有表面球蛋白，而 T 細(xì)胞、 NK 細(xì)胞、 K細(xì)胞的表面則不具有表面球蛋白。33 白介素 — 2 的生物學(xué)作用主要是刺激細(xì)胞增生。 33 干擾素屬于蛋白類。 32 紅細(xì)胞生成素來源于腎臟。 32 聯(lián)合化療中， TNF 與 IFN— r 可發(fā)揮顯著協(xié)同作用。 3 LT即淋巴細(xì)胞毒素。 31粒細(xì)胞集落刺激因子是 — 種糖蛋白。 31 干擾素效價的國際單位數(shù)與蛋白含量的毫克數(shù)之比即活性。 30TNF 抗腫瘤的重要機理 之 — 是直接的細(xì)胞毒作用。 30 淋巴細(xì)胞生成素 I 是指 IL— 7。 300、 細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的中心成分是 IL1。 29 迄今從生物界發(fā)現(xiàn)的酶的種類有 3， 000 多種 。 29 固定化酶半衰期達到一個月以上時，即具有工業(yè)應(yīng)用階值。 28 細(xì)胞固定化后其最適溫度通常與游離細(xì)胞相同。 28 在酶活力測定過程中，為確保可比性，必須控制反應(yīng)條件的一致性。 280、 天然酶使用后通常不回收，不能連續(xù)使用。 27固定化酶稱為第二代酶。 (1)無需進行酶的分離純化； (2)固定化過程酶回收率高； (3)細(xì)胞內(nèi)輔因子可以自生、再生；（ 4)可催化一系列反應(yīng)； (5)抗污 染能力強。26 用載體結(jié)合法固定酶的特點是操作簡單，不影響酶活性等。 26 現(xiàn)在固定化酶的物理形狀有酶膜、酶管、酶纖維、微囊、顆粒狀等。 26 酶固定化后其反應(yīng)最適 pH值可能變大，也可能變小。 25 酶珠、酶塊、酶片都屬于顆粒狀固定化酶。 25 1961 年 ，國際酶學(xué)會議規(guī)定， 1個酶活單位指特定條件下， 1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化 1umol底物的酶量 。 24 包埋法固定酶可利用的載體是硅膠等。24 當(dāng)酶固定化后，對于高分子底物的活性明顯下降。 21972年，國際酶學(xué)委員會提出新的酶活單位，稱為 Katal 單位 。 23 酶 在一定條件下僅能影響化學(xué)反應(yīng)速度，而不改變化學(xué)反應(yīng)平衡點。 23 檢出分泌特異抗體細(xì)胞后，應(yīng)即時進行克隆化篩選與鑒定，以免非必需細(xì)胞過分生長。 22組織纖維溶酶原激活劑是 — 種絲氨酸蛋白酶。 22 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法適用于培養(yǎng)確立細(xì)胞株、雜交瘤細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、血液細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。 2 骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)選擇不分泌瘤蛋白，體外能無限繁殖和連續(xù)移植繼代培養(yǎng)者，且為 HPRT~或 TK~的親本。 21 免疫反應(yīng)分體液免疫與細(xì)胞免疫。 21 HPRT即次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶。 20 兩種親本細(xì)胞融合混合物中至少含有雙核或多核異型融合子，雙核或多核同型親本融合子及親本五種類型細(xì)胞。 20 兩種完整細(xì)胞融合時，所轉(zhuǎn)移的遺傳物質(zhì)有整套染色體組，核外 DNA 及胞質(zhì)因子等。 20 DMSO 使用濃度一般為 5％ 12． 5％。 19 動物細(xì)胞種質(zhì)保存的形式有組織塊，細(xì)胞懸浮物及細(xì)胞單層培養(yǎng)物等。 19 二倍體細(xì)胞培養(yǎng)壽命是用群體倍數(shù) (PD)表 示，如二倍體細(xì)胞培養(yǎng)后，其總數(shù)增加一倍時，即稱為 1 個 PD。 190、 正常組織原代單層細(xì)胞不能無限期繁殖。 18 組織塊培養(yǎng)法又分為血漿凝固培養(yǎng)法，膠原固著培 養(yǎng)法及無基質(zhì)固著培養(yǎng)法。 18 以組織塊為材料的培養(yǎng)方法叫組織塊培養(yǎng)法。 17動物細(xì)胞所需營養(yǎng)要求高，其碳源不可為無機物。17 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的目的在于通過規(guī)模培養(yǎng)，獲得細(xì)胞，初級及次級代謝產(chǎn)物，為藥品、食品及化工行業(yè)提供服務(wù)。 16 誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基含有低濃度生長素，而不含有分裂素。 16 純化植物原生質(zhì)體的方法有離心法、飄浮法、界面法及滴洗法。 16 纖維素蝴時的 pH 值為 5． 4。 15 再培養(yǎng)法是檢查細(xì)胞活力的根本方法。 15 對于種子、花粉、球莖、塊莖等高度脫水材料可以采用快速降溫凍存。 14 目前已建立植物細(xì)胞種質(zhì)保存法有：干燥保存法，液體石蠟覆蓋法，低溫保存法，低壓低氧保存法及超低溫深凍保存法。14 篩選植物突變細(xì)胞的目的在于獲得某些藥物高產(chǎn)細(xì)胞株或某些物質(zhì)轉(zhuǎn)化的高產(chǎn)酶細(xì)胞株。 14 微室培養(yǎng)法的優(yōu)點是可直接觀察分裂繁殖及分化全過程，胞質(zhì)環(huán)流規(guī)律及線粒體生長與分裂活動，亦可進行連續(xù)觀察原生質(zhì)體融合，細(xì)胞壁再生及融合后細(xì)胞分 裂活動，同時可進行顯微攝像。 13 植物細(xì)胞實驗室培養(yǎng)法是懸浮、微室、平板、看護、懸滴及單花粉等多種培養(yǎng)方乒。 13 氫化可的松屬于糖皮質(zhì)激素，臨床上主要用于抗炎、抗過敏等。 12酵母原生質(zhì)體融合主要分為 原生質(zhì)體制備，原生質(zhì)體融合及融合子的選擇。 12 對于酵母菌和霉菌原生質(zhì)體的制備，則一般采用蝸牛酶和纖維素酶。 12 大多數(shù)細(xì)菌適于中性或微堿性環(huán)境，放線菌喜微堿性，而酵母菌和霉菌則喜酸性。 11 霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麥皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)晶為培養(yǎng)基。 11 在分批培養(yǎng)過程中，細(xì)胞生長大致有四個階段：遲滯期；對數(shù)生長期；平衡期；死亡期。 10 微生物細(xì)胞的液體表面培養(yǎng)方法都是氣體在基質(zhì)表面上進行交換。 10 砂土管保存菌種的方法僅適用于產(chǎn)孢子的放線菌、霉菌以及產(chǎn)芽孢的細(xì)菌。 10 誘變育種整個過程就是誘變和篩選的重復(fù)。 9 濕熱滅菌是直接采用蒸汽滅菌。 9化學(xué)物質(zhì)滅菌只適用于局部空間或某些器械消毒。 8 無機鹽和微量元素的主要生理功能是某些生理活性物質(zhì)和組成成分，參與細(xì)胞滲透壓，氫離子濃度，氧化還原電位的調(diào)節(jié)等 。 8 培養(yǎng)基的組成對菌體生長繁殖、產(chǎn)物生物合成、產(chǎn)品的分離精制以及產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量都有重要影響。 8 放線菌最大的經(jīng)濟價值是產(chǎn)生抗生素。 7 工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最多的細(xì)菌為桿菌。 7 hGH 可以治療侏儒癥，促進燒傷及骨折等創(chuàng)傷性組織恢復(fù)。 7 應(yīng)用大細(xì)胞系統(tǒng)檢測基因表達時，主要時利用質(zhì)粒或入載體擴增的途徑。 6 基因的高效表達必須依賴于一個強的啟動子。 6 基因表達合成功能蛋白的基本條件是依賴于基因的有效轉(zhuǎn)錄， mRNA的正確的轉(zhuǎn)譯和轉(zhuǎn)譯后的加工。 59 原核生物的 mRNA 在翻譯完畢后，隨即被水解掉。 5 動植物病毒也可作為外源基因的載體。 50、 大腸桿菌感受態(tài)的制作方法包括 Hanahan 法，氯化鈣法及電轉(zhuǎn)化法。 4 DNA 連接酶的最適溫度是 37℃。 4 大腸桿菌 DNA 連接酶以 DNA為輔因子。 3 酶促合成法主要應(yīng)用于真核生物。 3 M13 噬菌體形成渾濁斑。 2 入噬菌體適于克隆大片段 DNA．及組建原核基因文庫。 2 細(xì)菌裂解可采用：非離子型或離子型去污劑，有機溶 劑，堿處理及加熱處理。 2 分子量較小，不具自身傳遞性是松馳型質(zhì)粒的特點。 1 雄性大腸桿菌表面的性纖毛是 — 種接合質(zhì)粒形成的表面物質(zhì)。 1 質(zhì)粒是指能在細(xì)胞內(nèi)寄生和復(fù)制的復(fù)制子。 基因工程為現(xiàn)代生物工程主體，也為當(dāng)代生物科學(xué)的生長點。 近代生物工程是采用純種微生物的發(fā)酵工藝。 在現(xiàn)代生物工程中，基因工程是定向改造生物遺傳性的主導(dǎo)性技術(shù)。 8 集落刺激因子： CSF 為一組糖蛋白物質(zhì)，由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞自然產(chǎn)生，有刺激紅細(xì)胞系以外造血細(xì)胞增殖和分化作用。 8 IL10：由 TH2 細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制 TH1 細(xì)胞合成細(xì)胞因子的能力，是一種糖蛋白。 7 酶試劑盒： 將酶、反應(yīng)試劑、穩(wěn)定劑、激活劑、填充劑、及緩沖劑等配成檢測用的混合制劑稱酶試劑盒。 7 偶聯(lián)效率： 偶聯(lián)固定化反應(yīng)過程中載體結(jié)合蛋白質(zhì)的能力稱為偶聯(lián)效率。 7 固定化酶： 限制或定位于特定空間位置的酶稱為固定化酶。 6