【正文】 19 微量板細(xì)胞克隆法是分離混雜細(xì)胞的優(yōu)良方法。 18 動物細(xì)胞培養(yǎng)時通人 C02 以維持培養(yǎng)基的 p11值。187 動物細(xì)胞培養(yǎng)條件 — 般為 37℃， 5％ C02。 18人皮膚細(xì)胞分散較難，適宜于用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。 18 細(xì)胞培養(yǎng)包括細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)塊單層培養(yǎng)及單細(xì)胞克隆培養(yǎng) 18 細(xì)胞培養(yǎng)又分初代培養(yǎng)，二倍體細(xì)胞培養(yǎng)及確立細(xì)胞株培養(yǎng)。 180、 動物細(xì)胞培養(yǎng)基的維持液含低濃度或不含小牛血清，生長液含 5％ 20％的小牛血清。 17 開發(fā)動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，將促進(jìn)動物細(xì)胞 工程的發(fā)展。 17 原代動物培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖 50 代即退化死亡。 17 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)設(shè)備有漿式攪拌罐，多孔板式攪拌罐、卡普蘭式螺旋漿攪拌罐及空氣提升式培養(yǎng)罐。 17 PEG 誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合的， PEG 規(guī)格和純度影響結(jié)果。 170、 植物細(xì)胞融合實質(zhì)是其原生質(zhì)體融合。 16 大多數(shù)植物原生質(zhì)體通常在 12 周內(nèi)發(fā)生第一次分裂。 16 植物原生質(zhì)體活力甜定方法有：根據(jù)形態(tài)特征判斷其活力，活體染色法及熒光染料活體染色法。 16 脫壁酶液采用 0． 45um 微孔濾膜過濾除菌。 16 果膠酶最適． pH 值為 5． 8。 160、 植物原生質(zhì)體制備時的脛壁酶有纖維素酶，果膠酶，半纖維素酶，蝸牛酶及崩潰酶。 15 植物原生質(zhì)體制備的材料應(yīng)用較多的是葉片，愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。 15 深凍細(xì)胞活力及存活率測定的方法有再培養(yǎng)法、二醋酸熒光素染色法及氯化三苯四氮唑還原法。 15 對于不耐寒植物細(xì)胞需采用慢速冰凍法。 15 為提高存活力，凍存材料應(yīng)選用抗寒力強(qiáng)的幼齡培養(yǎng)細(xì)胞。 150、 超低溫深凍保存法系將植物種質(zhì)于 — 196℃的液氮中保存。 14 植物細(xì)胞培養(yǎng)物處于無組織及無器官分化的分散狀態(tài)時許多重要基因并不表達(dá)。 14 篩選細(xì)胞突變體主要依據(jù)細(xì)胞表型變化。 14 人工誘發(fā)植物細(xì)胞突變的化學(xué)因素主要有堿基類似物、烷化劑、抗生素等。 14 看護(hù)培養(yǎng)法培養(yǎng)時間較微室培養(yǎng)長。 1 植物細(xì)胞單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有平板培養(yǎng)法，微室培養(yǎng)法、看護(hù)培養(yǎng)法等。 13 懸浮培養(yǎng)特點是培養(yǎng)過程中，細(xì)胞總數(shù)不斷增加，一定時間后產(chǎn)量達(dá)最高點，生長趨于停止。 13 植物細(xì)胞生長的最適 pH通常為 5． 86． 0。 13 植物細(xì)胞工程包括植物細(xì)胞及其原生質(zhì)體的培養(yǎng)，植物原生質(zhì)體融合，細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及次生代謝物的生產(chǎn)。 13 7， 8— 二甲基— 10— (D— 11— 核糖基 )異咯嗪即維生素 B2。 1 放線菌原生質(zhì)體融合中相關(guān)培養(yǎng)基為 SI 培養(yǎng)基， GPYG培養(yǎng)基， P3培養(yǎng)基， PWP 液， P 培養(yǎng)基， R2 培養(yǎng)基及 R3 培養(yǎng)基。 12 影響原生質(zhì)體再生的因素主要有菌種的特性，原生質(zhì)體制備條件，再生培養(yǎng)基成份，再生培養(yǎng)條件等。 12 高滲培養(yǎng)基稱為原生質(zhì)體穩(wěn)定液。12 細(xì)菌和放線菌主要采用溶菌酶制備原生質(zhì)體。12 發(fā)酵液的需氧量 ，受菌體濃度，基質(zhì)的種類和濃度以及培養(yǎng)條件等因素的影響。 1 微生物培養(yǎng)的溫度應(yīng)略低于微生物生長的最適溫度。 11 細(xì)菌的斜面培養(yǎng)基多采用碳源限量而氮源豐富的配方。 11 一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)放線菌孢子形成。 11連續(xù)培養(yǎng)法的優(yōu)點是設(shè)備利用率高，缺點是易于染菌。 11 深 層通氣培養(yǎng)是在純種條件下，強(qiáng)制通人無菌空氣到密閉發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)的方式。 1 液體表面培養(yǎng)法的優(yōu)點就是簡單易行，投資少及適用于小型生產(chǎn)。 10 工業(yè)微生物細(xì)菌的培養(yǎng)方法有表面培養(yǎng)法、深層培養(yǎng)法、透析法和萃取培養(yǎng)法。 10 冷凍干燥保存法適用于各種菌種的保存。 10 液體石蠟封存法保存菌種不適用于能利用石蠟的微生物。 10 通過基因工程改造后的菌株稱為工程菌。100、 誘變育種的誘變因素主要分物理、化學(xué)和生物學(xué)三類。 9 工業(yè)微生物選育的目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)生產(chǎn)的要求。 9 干熱滅菌主要用于器械、容器的滅菌。 9 用于輻射滅菌的射線有 X 射線， y 射線和紫外線。9 培養(yǎng)基中的生長因素的主要功能是作為酶的重要組成成分。 90、 水常以游離狀態(tài)和結(jié)合狀態(tài)存在于生物體內(nèi)。 8 氮源的生理功能主要是作為合成細(xì)胞原生質(zhì)、生理活性物質(zhì)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)和某些代謝產(chǎn)物的原料。 8 培養(yǎng)基的原材料包括碳源、氮源、無機(jī)鹽、水和生長因子等五大類 。8 病毒的復(fù) 制包括吸附、侵入、脫殼、生物合成、裝配與釋放五個階段。 8 酵母菌的主要繁殖方式為芽殖。 80、 放線菌菌絲分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲。 7 螺旋菌根據(jù)其彎曲情況不同可分為弧菌及螺旋菌。 7 常用工業(yè)微生物主要有細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、大型真菌和病毒。 7 發(fā)酵工程包括天然微生物培養(yǎng)過程和人工控制培養(yǎng)過程兩種方法。 7 hGH 是指任生長激素。 7 微細(xì)胞不含有染色體 DNA。 70、 對未知目的基因功能的表達(dá)產(chǎn)物的檢測方法是在攜帶有重組體分子的細(xì)胞中尋找新合成的蛋白質(zhì)。 6 適當(dāng)?shù)膯幼?，只能保證目的基因的正確轉(zhuǎn)錄，而并不能保證基因的完全正確表達(dá)。 6 基因的表達(dá)受到啟動子等調(diào) 控元件的控制。 6 閱讀框架是由起始密碼子決定的。6 大腸桿菌，酵母與哺乳動物細(xì)胞三大基因表達(dá)體系已成為當(dāng)前基因工程工業(yè)性生產(chǎn) 的核心。 60、 真核生物轉(zhuǎn)錄成不均一 RNA 之后 ，還需加工，去掉內(nèi)含子，修飾、加工 5’末端和 3’末端。 5 原核生物細(xì)胞沒有核膜，因此表達(dá)過程中的轉(zhuǎn)錄與翻譯往往同時進(jìn)行。 5 目的基因重組克隆的篩選方法包括：根據(jù)重組體表型篩選，重組體結(jié)構(gòu)分析法，檢測目的基因法及檢測目的基因表達(dá)產(chǎn)生法。 5 B— 半乳糖基因插入失活法的重組質(zhì)粒產(chǎn)生白色菌落 .5 不帶 B— 半乳糖音酶活性蛋白的菌落中央也可出現(xiàn)淡藍(lán)色斑點。5 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)只能轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主染色體上少數(shù)基因。 4 關(guān)于感受態(tài)本質(zhì)的假說包括局部原生質(zhì)體化假說及酶受體假說。 4 連接反應(yīng)溫度應(yīng)介于催化反應(yīng)與末端粘合之間。 4 大腸桿菌 DNA 連接酶只能催化 DNA 雙鏈的單鏈缺口和帶粘性末端的雙鏈 、 TDT 即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶。 4 T4DNA連接酶以 ATP 為輔因子。 DNA 連接酶可催化 DNA 鏈的 5’ 磷酸基與另一條 DNA 鏈的 3’ 羥基生成磷酸二酯鍵。3 酶促合成法的前提是必須首先得到該目的基因的 mRNA。 3 構(gòu)建基因文庫法主要應(yīng)用于原核生物。 3 汞離子可以特異地與 dA、 dT結(jié)合。 3 M13 噬菌體只能感染雄性大腸肝菌。 科斯質(zhì)粒是 —種人工質(zhì)粒。 2 入噬菌體既可溶菌生長，又可溶源生長。 2 入噬菌體長約 48． 5kb。 2 細(xì)菌收獲可通過離心進(jìn)行 。 2 基因工程中使用的質(zhì)粒都是松馳型質(zhì)粒 。 分子量較大，自身傳遞是嚴(yán)緊型質(zhì)粒的特點。1 根據(jù)質(zhì)粒在細(xì)胞中拷貝數(shù)的不同，可把質(zhì)粒分為松馳型質(zhì)粒和嚴(yán)緊型質(zhì)粒。 1 質(zhì)?？煞譃樽陨韨鬟f性質(zhì)粒和非自身傳遞性質(zhì)粒。 1 質(zhì)粒的復(fù)制不受宿主染色體控制。目的基因與 載體的重組，重組體的轉(zhuǎn)化、重組克隆的篩選、基因表達(dá)與產(chǎn)物純化。 1 基因重組技術(shù)也稱重組 DNA 或分子克隆。 基因工程最大特點是打破生物種屬界限，進(jìn)行種屬內(nèi)外基因重組，遺傳信息交換和轉(zhuǎn)移。 基因工程是在發(fā)現(xiàn)細(xì)菌限制性核酸內(nèi)切酶、 DNA 重組及 DNA順序分析獲得成功基礎(chǔ) 發(fā)展和成熟的。 原始生物工程以非純種微生物自然發(fā)酵工藝為標(biāo)志。 現(xiàn)代生物工程根據(jù)操作對象及目的，可分為基因工程、微生物工程、細(xì)胞工程、酶工程等。 知識點 發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過程是微生物作用的結(jié)果的人巴斯德。 8 超誘導(dǎo)： 是指細(xì)胞在某種大分子合成抑制物的適當(dāng)作用下，誘生蛋白合成增加的現(xiàn)象。 8 干擾素： 是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)與控制，涉及 RNA 和蛋白質(zhì)的合成。 8 IL12： 是由 B 淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，分子量為 75KD 的糖蛋白，其主要作用是促進(jìn) PHA 活化的 PBMC 增殖以及 亞適劑量 IL2 協(xié)同促進(jìn)作用。 8 IL3：即白細(xì)胞介素 3，有激活的 T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能刺激多能造血干細(xì)胞和各系細(xì)胞的分化和增值，促進(jìn)和維持肥大細(xì)胞的增值，增值中性粒細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞的活性，促進(jìn) NK 細(xì)胞殺傷實體瘤的活性。 80、 細(xì)胞因子： 是人類或動物的各類細(xì)胞分泌的具有多樣生物活性因子，是可溶性物質(zhì)，是一組不均一的蛋 白質(zhì)能調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與分化。 7 固定化反應(yīng)的酶活力回收率： 固定酶所顯示的活力與加入偶聯(lián)液中酶總活力的比值稱為固定化反應(yīng)的酶活力回收率。 7 酶活力： 酶類催化