【正文】 摩乳房可適當(dāng)提高藥物在乳腺內(nèi)的分布量，在大乳房乳牛的乳腺炎治療中，首次量加倍很有好處，如同全身給藥一樣，乳腺內(nèi)使用抗生素也與該藥物乳腺內(nèi)分布水平有關(guān)，據(jù)資料顯示，乳腺內(nèi)用藥紅霉素、氨芐青霉素、慶大霉素、氟喹諾酮有較好分布、青霉素 G、頭孢菌素、四環(huán)素等分布較少。 全身給藥的抗生素：主要是抗革蘭氏陰性菌的抗生素，在體外，慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺嘧啶鈉、頭孢菌素、四環(huán)素 ，氨芐青霉素、新霉素、恩諾沙星、諾氟沙星能抗多數(shù)的病原菌。但嚴(yán)重的炎癥和奶的 pH 值向堿性變化達(dá)到血漿的 pH 值時，在某種程度上會改變?nèi)硎褂每股氐乃幋鷦恿W(xué)，因此，必須根據(jù)抗生素敏感性，對每種藥物的藥理學(xué)作用做出評估 .大環(huán)內(nèi)酯抗生素和強(qiáng)力磺胺類藥對健康牛群能建立高的奶血漿比，因?yàn)檫@些藥物呈弱堿性。四環(huán)素在全身給藥時維持中等的奶血漿比 .青霉素和氨芐青霉素是弱酸性，在健康母牛的牛奶中保持有限的比例。氨基糖甙在全身給藥時在患乳腺炎的病畜乳中只有很少的分布。乳房內(nèi)使用的抗生素：氨芐青霉素、先鋒霉素、慶大霉素、恩諾沙 星分布較好。炎癥、細(xì)胞碎片和藥物在乳區(qū)內(nèi)擴(kuò)散能力下降會降低抗生素的療效，特別是乳房內(nèi)注入抗生素時。 （ 2） 支持療法 頻繁的擠去感染乳區(qū)的奶汁是十分有效的護(hù)理措施 .經(jīng)常擠奶可去除微生物，內(nèi)毒素和炎癥的介質(zhì)，同時還有中性粒細(xì)胞和吞噬細(xì)胞，它們的產(chǎn)物會進(jìn)一步促進(jìn)炎癥。可以全身使用催產(chǎn)素 （ 20IU） 促進(jìn)放乳，并有助于在擠奶前使乳區(qū)漲滿奶汁。在最急性和急性發(fā)病乳區(qū)應(yīng)每 1~2h 擠一次奶，在慢性病例時，要每4~6h擠一次奶。 皮質(zhì)類固醇類藥物 盡量不用，低劑量、一次性治療是可以接受的，需補(bǔ)充復(fù)方 氯化鈉、硫酸氫鹽，對只能躺臥的牛緩慢靜脈注射鈣。 中藥在臨床治療試驗(yàn)可控制乳房炎進(jìn)一步惡化，但和抗生素聯(lián)合用藥效果極好，這和中藥活血化瘀，改善患病乳區(qū)局部血液循環(huán)，使抗生素更好地發(fā)揮藥效有關(guān)。同時，乳房的引經(jīng)藥又可引導(dǎo)中藥及抗生素更多地進(jìn)入乳區(qū)發(fā)揮療效。中草藥治療除可抑制病原生長，還可以提高機(jī)體免疫功能。選用當(dāng)歸、川芎、芍藥、黃芪、蒲公英、丹參、益母草等配伍組方，做飼料添加劑飼喂奶牛，可明顯提高奶牛淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)，提高中性粒細(xì)胞的吞噬能力。復(fù)方丹參液在 1： 16000倍稀釋濃度下對金黃色葡萄球 菌有抑菌作用 .對比治療試驗(yàn)顯示，復(fù)方丹參液乳室治愈率 ％ ，總有效率 ％ ，而抗菌素組 （ 使用青霉素 G鈉 80萬單位、硫酸鏈霉素 100萬單位 ） ，乳室治愈率 ％ ，總有效率 ％ ，差異顯著。 中藥內(nèi)服傳統(tǒng)方劑都有清熱解毒，活血化瘀，通經(jīng)下乳的作用，治療奶牛乳房炎具有良好效果。據(jù)報道，一些中草藥提取物，治療奶牛乳房炎，成為中藥研究開發(fā)的方向。 長期大量使用抗生素，病原體抗藥性會逐漸增強(qiáng)，導(dǎo)致藥物療效降低，美國和法國科學(xué)家合作，研制成能與葡萄球菌屬的金黃色葡萄球菌細(xì)菌膜上的一類分子結(jié)合的 單抗體，并用化學(xué)法把兩個單抗體輟連在一起，用其治療奶牛乳房炎。當(dāng)雙抗體被注入乳房，抗體一端與病原結(jié)合，另一端與中性粒細(xì)胞結(jié)合，同時釋放出抗菌消炎劑 h02 抑制和殺滅細(xì)菌。一種具有酶生物活性和溶菌素作用機(jī)制雙重特性高科技生化制品“乳炎?！?，對奶牛乳房炎治療，有效率可以達(dá)到 ％％ ，高于常規(guī)藥物。 金黃色葡萄球菌疫苗。金黃色葡萄球菌有莢膜多糖，具有抗吞噬的活性，蛋白偶聯(lián)莢膜多糖的疫苗，能誘導(dǎo)產(chǎn)生 IgG2 抗體，可有效預(yù)防金黃色葡萄球菌乳房炎。細(xì)菌在體外與纖維結(jié)合素偶聯(lián)，制成疫苗也可有效降 低感染率。莢膜多糖結(jié)合載體蛋白和可生物降解微球，制成微球疫苗，可較長時間地釋放抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生的 IgGl和 IgG2，抗體效價更高，更安全，具有廣闊的應(yīng)用前景。 大腸桿菌疫苗和鏈球菌疫苗。目前對大腸桿菌疫苗的研究較多，采用弗氏不完全佐劑 （ FIA） 疫苗，皮下三次免疫接種，可提高血清和牛奶中抗大腸桿菌抗 體的效價，能交叉抵抗其他血清型大腸桿菌的感染，產(chǎn)生抗其它腸桿菌原的抗體。也有使用費(fèi)氏佐劑與維生素 E組成的復(fù)合佐劑苗，減輕免疫接種時的局部腫脹反應(yīng)。對無乳鏈球苗和乳房鏈球菌研究， Mackie 等報道使用福爾馬林滅活菌對奶牛無保護(hù)力； Rairla 和 Poutrel報道蛋白 X（ 一種絕大多數(shù)鏈球菌乳房炎菌株都擁有 ） 與 B 族鏈球菌莢膜多糖偶聯(lián)組成的疫苗能誘導(dǎo)調(diào)理性抗體。 Nasher 等將福爾馬林滅活的乳房鏈球菌直接注入干奶期奶牛乳房內(nèi)，結(jié)果在產(chǎn)犢后兩個月奶中仍可檢測到 IgGI 和 IgGA抗體 。 第三章 奶牛乳房炎的流行病學(xué)調(diào)查 材料 調(diào)查對象 試驗(yàn)按季節(jié)分四個階段進(jìn)行：在 68 月份、 911 月份、 122 月份、 45 月份分別對患有乳房炎的奶牛乳樣進(jìn)行采集。 2022 年夏季 ， 采集牧區(qū)某集約化牛場臨床型乳腺炎、隱性乳房炎的乳樣 。相應(yīng)的環(huán)境樣品 65 份，分別取自牛舍產(chǎn)犢區(qū)（空氣中樣品 14份，土樣中樣品 8份）；飼養(yǎng)區(qū)（空氣中樣品 14 份，土壤中樣品 5 份）；牛舍臥床土樣 7 份；擠奶區(qū)空氣中樣品 17 份，分別取自牛產(chǎn)犢區(qū) 5 份、牛飼養(yǎng)區(qū) 8 份、牛舍臥床土樣份 8 份和擠奶區(qū)空氣中樣品 14 份。乳樣的采集按《動物疾病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊》進(jìn)行采集。空氣樣本的采集：將做好的營養(yǎng)瓊脂平板蓋子揭開放在采樣區(qū) 5分鐘，然后收集營養(yǎng)瓊脂平板并倒置。土樣：從采樣區(qū)多個位點(diǎn)、少量取樣放到滅菌容器中，然后與空氣樣品一同低溫下迅速送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。 主要儀器 電熱恒 溫培養(yǎng)箱 、 高壓滅菌器 、 雙人單面凈化工作臺 、 低速離心機(jī) 、 電熱恒溫水浴鍋 、 電子天平 、 手提式壓力蒸汽滅菌鍋 、 生物顯微鏡 等。 （ 1） 細(xì)菌生化微量鑒定管 葡萄球菌屬生化微量鑒定管：蔗糖、甘露醇、木糖、尿素、覃糖、蜜二糖、果糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、硝酸鹽還原、乙酰葡糖胺、 、山梨醇 。 腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管：含硫化氫、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、靛基質(zhì)、甲基紅、枸椽酸鹽、尿素、半固體、賴氨酸、鳥氨酸、棉子糖、山梨醇、側(cè)金盞花醇、木糖 。 （ 2） 細(xì)菌分離培養(yǎng)基和試劑 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培 養(yǎng)基和 5％兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基新生牛血清 (杭州四季青生物工程材料有限公司，批號 080131)抗菌藥物藥敏紙片。 （ 3） 藥敏紙片 選用氨芐青霉素、丁胺卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素、恩諾沙星、先鋒霉素Ⅳ、頭孢曲松鈉、環(huán)丙沙星、氟哌酸、利福平、強(qiáng)力霉素、潔霉素、多粘菌素 B、復(fù)方新諾明、新霉素等 15 種常用抗菌藥物和酮康唑、氟康唑、兩性霉素 B、制霉菌素、伊曲康唑等 5種抗真菌藥物的藥敏紙片。 試劑 及培養(yǎng)基 5％ 脫纖綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基、尿素 – 動力 – 吲哚、高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基等常規(guī)生化培養(yǎng)基均參考文 獻(xiàn)配制。普通瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基， SS 瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)肉湯，三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、西檬氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基、生化鑒定所用的微量發(fā)酵管 ， 牛血清。 方法和內(nèi)容 隱性乳房炎無臨床癥狀表現(xiàn)，其特征是乳房和乳汁無明顯肉眼可見異常，然而乳汁在理化性質(zhì)、細(xì)菌學(xué)上已發(fā)生變化。如乳中的白細(xì)胞增多，乳汁由正常的弱酸性變?yōu)槠珘A性，泌乳量減少等。由于隱性乳房炎沒有明顯的臨床癥狀，因此常被人們所忽視，但是，隱性乳房炎很容易轉(zhuǎn)變成臨床型乳房炎，而且乳房炎經(jīng)濟(jì)損失的 70％是由隱性乳房引起的。本次調(diào)查主要采用 LMT法與乳汁 pH檢驗(yàn)法相結(jié)合的診斷方法。 法 LMT 法（ LMT 試劑是蘭州乳腺炎診斷試劑）該方法在隱性乳房炎檢查方面具有快速、檢出率高、準(zhǔn)確、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。 采取現(xiàn)場檢查，清晨采樣前用溫水清洗乳房，然后用消毒液洗過的毛巾擦，再用 75％ 的酒精棉消毒乳房及手指，每個乳頭棄去最初三把乳，取四個乳室的乳汁各 2ml，分別加入檢驗(yàn)盤的四個區(qū)中，再分別加入 LMT 診斷液 2ml，輕搖混勻，在 1030 秒后判定并記錄結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)為（見表 9）：陰性（ ）、可疑（177。）、弱陽性（ +）、陽性（ ++）和強(qiáng)陽性（ +++） 5個等級。之后對可疑（177。） 的乳樣進(jìn)行乳汁 PH 檢驗(yàn)。發(fā)情期檢查為陽性的，發(fā)情后期應(yīng)做再次檢查，防止假陽性。 表 41LMT 法判定標(biāo)準(zhǔn) StandardofLMTjudgement 檢測 法 隱性乳房炎患牛用美國加州乳房炎檢驗(yàn)（ CMT）法檢測，判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)測試盤中凝集物的性狀及量的多少，詳見表 22，采集陽性及強(qiáng)陽性乳樣。采集時，首先將患牛乳房進(jìn)行消毒處理，用溫水清洗乳房，然后用 ％ 新潔爾滅擦洗乳房，再用 75％ 酒精棉球擦拭乳頭，然后帶上滅菌手套進(jìn)行人工榨乳，每個乳室棄掉前三把奶，為的是排除一些污染的雜菌，然后用滅菌的 7ml離心管接住，大約采集 5ml左右迅速將滅菌試管口在酒精燈上火焰消毒，旋緊蓋子，標(biāo)明牛號、乳室、 日期后放入冰桶，送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)，如當(dāng)天不能檢驗(yàn)，則放入 4℃保存，一般不應(yīng)超過 24h。 表 42CMT 法判定標(biāo)準(zhǔn) ThejudgingstandardofCMT 被檢乳樣 乳汁反應(yīng) 判斷符號 相當(dāng)于體細(xì)胞數(shù) (萬個 /ml) 陰性 無變化，不出現(xiàn)凝塊 ﹣ 0～ 20 可疑 有微量沉淀，但不久即消失 177。 15～ 50 反應(yīng) 符號 乳汁反應(yīng) 強(qiáng)陽性 +++ 全部呈凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動時凝塊向中央集中，停止攪動則回復(fù)原狀，并附著于皿底 陽性 ++ 全部形成凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動時凝塊向中央集中，停止攪動則凝塊呈凹凸?fàn)罡街诿蟮? 弱陽性 + 部分形成凝膠狀 可疑 177。 有微量沉淀，但不久就消失 陰性 － 無變化，不出現(xiàn)凝塊 酸性 乳汁變黃色， 以下 堿性 乳汁變黃紫色， 以下 弱陽性 部分形成凝膠狀 ﹢ 40～ 150 陽性 全部形成凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動時凝塊向中央集中，停止攪動則凝塊呈凹凸?fàn)罡街诿蟮? ﹢ 100～ 500 強(qiáng)陽性 全部呈凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動時膠塊向中央 集中，停止則攪動則回復(fù)原狀，并附著于皿底 ﹢﹢ 500 奶樣的檢測 蘭州乳房炎試驗(yàn) 取被檢乳樣 2ml 加到診斷盤上，加蘭州乳房炎診斷液(LMT)2ml，緩緩作同心圓狀混合均勻， 15 秒鐘至 2 分鐘內(nèi)進(jìn)行判定：“一”無變化，不出現(xiàn)凝塊；“ +”有少量沉淀清晰可見；“ ++”部分形成凝膠狀；“卅”全部形成 凝膠狀，回轉(zhuǎn)時向心集中，停止回轉(zhuǎn)時仍保持原樣，并固著于皿底。 奶樣的體細(xì)胞數(shù)計數(shù)、乳臘率和蛋白率測定 按 Breed法，充分振蕩乳 樣，用 ]吸管吸取中部乳汁 ，在裁玻片上涂布成 l平方公 分的均勻乳膜，置恒溫箱內(nèi)使干燥，經(jīng)脫脂、染色、鏡檢后計算出體細(xì)胞數(shù)／ ml。為了比較手工體細(xì)胞計數(shù)與機(jī)器體細(xì)胞計數(shù)的符合率，同時將樣品加防腐劑后送西安奶牛研究所進(jìn) 行了體細(xì)胞計數(shù)，乳脂率和蛋白率測定。 奶樣的采集 奶樣來源 奶樣采自成都 (64頭 )、蘭州 (24頭 )、鄭州 (12頭 )、濟(jì)南 (4頭 )、哈爾濱 (72頭 )、南昌 (92頭 )共 6個城市 105 個個體奶牛場，總共 280 頭份 (340個乳室 )奶樣，桶奶 152份。所有送檢奶樣首先用 LMT診斷液進(jìn)行檢查， 其中臨床型乳房炎奶樣 128頭份 (120個乳室 )，隱性乳房炎奶樣 (LMT “ +”“ ++”“ +++” )140頭份 (176個乳室 )，健康奶樣 (LMT反應(yīng)“一”“177?！?)8頭份 (8個乳室 )。詳見表12。 取樣方法先用溫水洗凈乳房再用 75％酒精棉球擦拭乳頭及術(shù)者手指，擠出前二把奶廢棄，然后用滅菌塑料血斜面試管，接取奶樣 lml左右，旋緊蓋子，并注明戶主、牛號、采樣的乳室及日期待檢。桶奶采集方法為，先將桶奶搖勻，用帶有長針頭的滅菌注射器從桶奶液面下 20cm 左右處吸取奶樣 lml 左右，置滅菌塑料血斜面試管中，旋緊蓋子，并注明戶主日期待檢。用于體細(xì)胞計數(shù)、蛋白率、乳脂率 測定的桶奶乳樣采取方法為，先將桶奶搖勻，用帶有長針頭的滅菌注射器從桶奶液面下 20cm 左右處吸取奶樣 6ml左右，置加有防腐劑的滅菌塑料試管中， 旋緊蓋 子，并注明戶主日期待測。 用于綜合防治試驗(yàn)的乳房炎多聯(lián)苗的制備 制苗菌種毒力復(fù)壯將凍干保存的三種 9 株制苗菌種開啟后分別接種于普通牛肉湯中， 3712培養(yǎng) 20h鏡檢純粹后，按資料‘刪方法將三種菌分別稀釋成 (無乳 鏈球菌含 106CFU／腺、停乳鏈球菌含 106CFU，腺、金黃色葡萄球菌含 3 105CFU／腺 )不同菌數(shù)的菌液，分別接種泌 乳奶山羊的乳房內(nèi)，造成人工感染發(fā)病，采集人工感染發(fā)病后 的病乳經(jīng)分離檢定，挑選典型菌落接種血斜面 4℃冰箱保存，作為制苗菌種。 （ 1） 制苗菌株抗原的制備 將復(fù)壯后的無乳鏈球菌和停乳鏈球菌從血斜面洗下后接種于中試管肉湯中，37℃培養(yǎng) 20h后，經(jīng)鏡檢純粹后，按 5％的接種量接種于 200ml三角瓶中，將三角瓶置搖床 37*(2 培養(yǎng) 16— 18h，涂片鏡檢純粹后，將菌液 5000r／ min 離心，棄上清液，沉淀用 PBS 混懸到一定的體積，同時取樣稀釋計數(shù)， 菌液按 ％濃度加入福爾馬林進(jìn)行震蕩滅活，活檢合格后即可置冰箱中備 用。將復(fù)壯后的金黃色葡萄球菌從血斜面洗下后接種于中