【正文】 （ 1） 制苗菌株抗原的制備 將復(fù)壯后的無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌從血斜面洗下后接種于中試管肉湯中，37℃培養(yǎng) 20h后，經(jīng)鏡檢純粹后，按 5％的接種量接種于 200ml三角瓶中，將三角瓶置搖床 37*(2 培養(yǎng) 16— 18h，涂片鏡檢純粹后，將菌液 5000r／ min 離心，棄上清液，沉淀用 PBS 混懸到一定的體積，同時(shí)取樣稀釋計(jì)數(shù)， 菌液按 ％濃度加入福爾馬林進(jìn)行震蕩滅活，活檢合格后即可置冰箱中備 用。 取樣方法先用溫水洗凈乳房再用 75％酒精棉球擦拭乳頭及術(shù)者手指，擠出前二把奶廢棄，然后用滅菌塑料血斜面試管，接取奶樣 lml左右，旋緊蓋子，并注明戶主、牛號(hào)、采樣的乳室及日期待檢。 奶樣的采集 奶樣來(lái)源 奶樣采自成都 (64頭 )、蘭州 (24頭 )、鄭州 (12頭 )、濟(jì)南 (4頭 )、哈爾濱 (72頭 )、南昌 (92頭 )共 6個(gè)城市 105 個(gè)個(gè)體奶牛場(chǎng)，總共 280 頭份 (340個(gè)乳室 )奶樣，桶奶 152份。 15～ 50 反應(yīng) 符號(hào) 乳汁反應(yīng) 強(qiáng)陽(yáng)性 +++ 全部呈凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動(dòng)時(shí)凝塊向中央集中，停止攪動(dòng)則回復(fù)原狀，并附著于皿底 陽(yáng)性 ++ 全部形成凝膠狀，回轉(zhuǎn)攪動(dòng)時(shí)凝塊向中央集中，停止攪動(dòng)則凝塊呈凹凸?fàn)罡街诿蟮? 弱陽(yáng)性 + 部分形成凝膠狀 可疑 177。發(fā)情期檢查為陽(yáng)性的，發(fā)情后期應(yīng)做再次檢查，防止假陽(yáng)性。判定標(biāo)準(zhǔn)為（見(jiàn)表 9）：陰性（ ）、可疑（177。由于隱性乳房炎沒(méi)有明顯的臨床癥狀，因此常被人們所忽視，但是，隱性乳房炎很容易轉(zhuǎn)變成臨床型乳房炎，而且乳房炎經(jīng)濟(jì)損失的 70％是由隱性乳房引起的。 試劑 及培養(yǎng)基 5％ 脫纖綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基、尿素 – 動(dòng)力 – 吲哚、高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基等常規(guī)生化培養(yǎng)基均參考文 獻(xiàn)配制。 （ 1） 細(xì)菌生化微量鑒定管 葡萄球菌屬生化微量鑒定管：蔗糖、甘露醇、木糖、尿素、覃糖、蜜二糖、果糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、硝酸鹽還原、乙酰葡糖胺、 、山梨醇 。乳樣的采集按《動(dòng)物疾病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊(cè)》進(jìn)行采集。 Nasher 等將福爾馬林滅活的乳房鏈球菌直接注入干奶期奶牛乳房?jī)?nèi)，結(jié)果在產(chǎn)犢后兩個(gè)月奶中仍可檢測(cè)到 IgGI 和 IgGA抗體 。 大腸桿菌疫苗和鏈球菌疫苗。 金黃色葡萄球菌疫苗。據(jù)報(bào)道，一些中草藥提取物，治療奶牛乳房炎，成為中藥研究開(kāi)發(fā)的方向。中草藥治療除可抑制病原生長(zhǎng)，還可以提高機(jī)體免疫功能。在最急性和急性發(fā)病乳區(qū)應(yīng)每 1~2h 擠一次奶，在慢性病例時(shí)，要每4~6h擠一次奶。乳房?jī)?nèi)使用的抗生素：氨芐青霉素、先鋒霉素、慶大霉素、恩諾沙 星分布較好。 全身給藥的抗生素：主要是抗革蘭氏陰性菌的抗生素，在體外，慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺嘧啶鈉、頭孢菌素、四環(huán)素 ，氨芐青霉素、新霉素、恩諾沙星、諾氟沙星能抗多數(shù)的病原菌。合適的全身抗生素治療必須達(dá)到有效劑量、頻 率及足夠長(zhǎng)的給藥時(shí)間，才能成功地消滅細(xì)菌。黃利權(quán)等側(cè) J 指出宮炎凈對(duì)奶牛臨床型乳房炎的治療效果明顯，其治愈率可達(dá) %。、采用蜂膠合劑治療乳牛隱性乳房炎有效率和治愈率分別為 %和 %。干奶期保護(hù)劑很多，如北京市奶牛研究所的一次性 6A 一 1 型緩釋藥物，內(nèi)含青霉素和新霉素，藥效可維持?jǐn)?shù)周。 發(fā)生過(guò)乳腺炎的奶牛在下一個(gè)泌乳期更容易感染隱性乳腺炎，主要是因?yàn)楦? 乳期治療不徹底的原因，所以加強(qiáng)干乳期的治療非常重要。使用性能良好的擠乳機(jī)，無(wú)論如何，擠乳機(jī)性能必須達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，以下幾點(diǎn)非常重要 :在出乳高峰 期，集乳座必須維持負(fù)壓擠好時(shí)防止乳杯下滑。可見(jiàn)，科學(xué)的飼養(yǎng)方式，能在一定程度上減少奶牛乳房炎的發(fā)生率。產(chǎn)前能量過(guò)剩容易造成產(chǎn)前奶牛肥胖綜合征，進(jìn)而影 響奶牛繁殖率，導(dǎo)致難產(chǎn)、胎衣不下、子宮內(nèi)膜炎、乳房炎及酮病等。 牛舍不整潔，或運(yùn)動(dòng)場(chǎng)低洼不平，大量積蓄糞尿和泥濘，導(dǎo)致牛體不清潔；牛舍及運(yùn)動(dòng)場(chǎng)未定期消毒或不消毒；奶?；顒?dòng)受到限制以及環(huán)境性病原菌在牛體外環(huán)境的繁殖等，都促進(jìn)了乳房炎的發(fā)生。病原侵入乳房后，不僅會(huì)激活機(jī)體非特異性抵抗因子，而且會(huì)激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使特異性抗體在血液和乳汁中的濃度增加。 乳鐵蛋白是一種乳清蛋白，在有碳酸氫鹽的條件下可與鐵離子結(jié)合，從而使需鐵生長(zhǎng)的細(xì)菌不能獲得足夠的鐵，而起到抑菌的作用。高 濃度的溶菌酶能使菌落的菌體數(shù)較快的降低，有明顯的抑菌作用。 奶牛乳房?jī)?nèi)有許多防御細(xì)胞和機(jī)體產(chǎn)生的天然抗菌因子，這些細(xì)胞和抗菌因子可殺滅和抑制病原微生物生 長(zhǎng)。此外，鐵對(duì)于預(yù)防乳房炎的發(fā)生也是非常重要的，因?yàn)殍F與乳鐵蛋白的含量有密切的關(guān)系。硒可以通過(guò)增加白細(xì)胞的釋放和其吞噬力來(lái)增強(qiáng)奶牛的免疫系統(tǒng)。研究顯示，提高日糧中苜蓿的量可加得慢性乳房炎的感染。當(dāng)給予大劑量 （ 超出每天氮需求 180g以上 ） 脈時(shí)，對(duì)免疫系統(tǒng)的影響特別顯著。 營(yíng)養(yǎng)因素 飼料成分突然改變以及飼料各成分之問(wèn)配比不合理都會(huì)增加乳房炎的發(fā)病率。牛只經(jīng)過(guò)的門(mén)要有足夠的寬度，地面和牛床不應(yīng)光滑，且哄趕時(shí)要慢，避免擁擠和滑倒。育成牛中如有偷吮乳頭惡癖的，應(yīng)從牛群中挑出或帶籠頭。 產(chǎn)犢期護(hù)理 :奶牛產(chǎn)前要適時(shí)停乳，徹底干乳，對(duì)乳房劇烈膨脹的應(yīng)減少多汁飼料及精料給量 ； 產(chǎn)后要及時(shí)清除從陰道內(nèi)排出的惡露，清毒尾根及外陰部，同時(shí)還要及時(shí)擠出初乳。此外，乳房的結(jié)構(gòu)和形態(tài)對(duì)乳房炎發(fā)生有很大的影響，如盆碗型乳房的發(fā)病率低于圓筒型乳房，乳頭管緊的乳牛發(fā)病率 低。畜群不同感染的支原體種群類型存在很大差異 ，如牛無(wú)乳支原體（ ）、殊異支原體（ ）、牛鼻炎支原體（ ），牛生殖器支原體（ ）、加拿大支原體（ ）、微堿支原體（ ）和加利福尼亞支原體等。 能夠感染乳腺的病毒有 :口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、牛瘟病毒、牛疤疹乳頭炎病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒等等，由病毒引起的乳房炎，一般多是由于全身感染病毒后，在乳房繼發(fā)炎癥。李氏桿菌性乳房炎 ， 患牛的全身癥狀除具有敗血癥狀外 ， 尚有劇烈的神經(jīng)癥狀 ，兩眼直視 ， 前沖 ， 后退 ， 并出現(xiàn)向一側(cè)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng) ， 口流白沫 ， 面神經(jīng)和咽神經(jīng)麻痹 ， 臥地后 ， 四肢伸直 ， 呈游泳狀 。 由于表面摩擦 、 皮膚擦傷 、 擠奶時(shí)負(fù)壓過(guò)大 、 過(guò)度擠奶 、 外傷 、 感染及刺激造成的乳頭末端損傷 ， 都可造成環(huán) 境微生物的定植 。 管理的問(wèn)題使腸桿菌群擴(kuò)大 ， 增加了發(fā)病機(jī)會(huì) 。包括大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌、凝固酶陰性葡萄球菌、環(huán)境鏈球菌、酵母菌、真菌、原藻屬類、化膿性放線菌及牛棒狀桿菌，還有疤疹病毒 和口蹄疫病毒。這些微生物定植于乳腺并經(jīng)過(guò)擠奶工或擠奶機(jī)傳達(dá)，包含無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌和支原體。因此，為了查明奶牛乳房的發(fā)生原因，以利于提出合理的防治措施，對(duì)奶牛的病因做如下調(diào)查： 奶牛乳房炎的病因調(diào)查 病原微生物 在奶牛的健康 乳房 上或 乳房 內(nèi)，有很多的微生物 寄 居。由于奶牛乳房炎的發(fā)病率及淘汰率之高，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，全球每年由乳房炎造成的直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá) 350億美元，美國(guó)每頭母牛每年因乳房炎的花費(fèi)為 182 美元（（ Schutz1994 年），美國(guó)奶牛業(yè)每年因乳房炎引起的直接損失超過(guò) 20 億美元。 90年代后，劉智喜等（ 1985）調(diào)查奶牛乳房炎約為 ，孫富先等（ 1996）、單志貴等（ 1996），蕭乾慶等（ 1997）、楊章平等（ 1998）李國(guó)江等（ 1998）和雙金等（ 2022）報(bào)道我國(guó)奶牛隱性乳房炎頭數(shù)陽(yáng)性率分別為 ％， ％，％， ％， ％和 ％。 2022 年?yáng)|北農(nóng)業(yè)大學(xué)在哈爾濱市郊進(jìn)行了隱性 乳房炎 的查詢，發(fā)病率高達(dá) 75，形成的丟失每頭患病牛每年 元。隨著奶牛業(yè)和乳制品工業(yè)的發(fā)展及人類對(duì)公共衛(wèi)生的重視，它的危害已引起人們的高度重視。如出現(xiàn)體溫升高 ， 脈搏增速 ， 患畜抑郁 、 衰弱 、 食欲喪失等全身癥狀 。 乳房炎的分類是了解乳 房炎的性質(zhì)以便對(duì)其進(jìn)行處理或治療的依據(jù)之一 ， 特別是對(duì)確定治療方案具有重要的指導(dǎo)價(jià)值 ， 同時(shí) ， 也有利于控制乳房炎的傳播 。 奶牛乳房炎的分類 和臨床表現(xiàn) 研究結(jié)果 (Mastitis)是乳腺遭到物理、化學(xué)、微生物刺激所發(fā)生的一種炎癥改變。朱國(guó)良等淵于 1990年至 1991 年對(duì)南疆墾區(qū)四個(gè)奶牛場(chǎng) 144頭奶牛 566個(gè)乳區(qū)進(jìn)行隱性 乳房炎 的查詢， 研究結(jié)果 頭患 病率和乳區(qū)患病率均勻別離為 ％和 ％。林志權(quán)等。魏南等 (2022)對(duì)四川區(qū)域 4 個(gè)奶牛場(chǎng)的 80 頭泌乳牛進(jìn)行了 乳房炎 的檢查。戴鼎震等 (2022)。如趙宗智等(1989)對(duì)內(nèi)蒙古三個(gè)郊區(qū)的奶牛場(chǎng) 82 頭奶牛進(jìn)行乳房炎調(diào)查，結(jié)果表明，臨床 型乳房炎發(fā)病率為 ％，隱性乳房炎頭陽(yáng)性率為 ％，乳區(qū)陽(yáng)性率為％。據(jù)報(bào)道，西歐有些經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家奶牛隱性 乳房炎 發(fā)病率也高達(dá) 25％。中國(guó)現(xiàn)有奶牛 800萬(wàn)頭，每年因 乳房炎 所 造成 的經(jīng)濟(jì) 損失 超過(guò)了 。當(dāng)前，全世界約有 億頭奶牛，其間約有 1／ 3的奶牛患有各種類型 乳房炎 ， 每年因 乳房炎 形成的丟失高達(dá) 350億美元，僅美國(guó)的丟失就達(dá) 20億美元。隱性 乳房炎 又稱亞 l腦床型 乳房炎 (Subclinical mastitls)，因?yàn)椴±碜兓?xì)微，無(wú)顯著的臨床表現(xiàn)，并可在必定條件下轉(zhuǎn)變?yōu)榕R床型，其損害更為嚴(yán)峻?？偟膩?lái)看，我國(guó)大多數(shù)國(guó)營(yíng)奶牛場(chǎng)主要病原菌主要以傳染性鏈球菌 (乳房鏈球菌除外 )和葡萄球菌感染為主。從以上調(diào)查結(jié)果可以 看出，引起奶牛乳房炎的病原菌主要有 20多種，主要以無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等為主。李宏勝等 (2022)對(duì)我國(guó)六個(gè)城市 (成都、蘭州、鄭州、濟(jì)南、哈爾濱、南昌 )105個(gè)個(gè)體奶牛場(chǎng)采集的 280頭份 (340 個(gè)乳區(qū) )各種類型乳房炎奶樣，進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，結(jié)果分離鑒定出 12 種 316 株菌，牛只和乳室出菌率分別為 ％和 8096。劉剛等 (1992)報(bào)道，在對(duì)江西省畜牧良種場(chǎng)奶牛場(chǎng)的 27 頭奶牛 (HMT檢驗(yàn)陽(yáng)性 )的乳樣作了細(xì)菌學(xué)分離簽定，結(jié)果各類病原的檢出率主要為：表皮葡萄球菌 ％；金黃色葡萄球菌 ％；停乳鏈球菌 ％；無(wú)乳鏈球菌 ％；乳房鏈球菌 ％；其它細(xì)菌 ％。葡萄球菌屬細(xì)菌以表皮葡萄球菌為主，而鏈球菌屬細(xì)菌則以停乳和無(wú)乳鏈球菌為主。陳坤永等 (1999)n33 對(duì)深圳市某奶牛場(chǎng)采集的 98 份 l 臨床型乳房炎奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，結(jié)果共分離出 19 種 102 株病原菌，病原菌檢出率為 ％，其主要致病菌依次為：無(wú)乳鏈球菌 ％、停乳鏈球菌 ％、乳房鏈球菌 ％、大腸桿菌 ％、金黃色葡萄球菌 、克雷伯氏菌 ％、變形桿菌 、綠膿桿菌 ％等。分離鑒定出致病菌 12種，其中細(xì)菌性病原菌 2161 頭，占 ％； 真菌性病原菌 154 頭，占 ％：放線菌 7頭，占 ％。各種病原菌檢出率依次為；無(wú)乳鏈球菌 ％；停乳鏈球菌 ％；金黃色葡萄球菌 ％；大腸桿菌％；乳房鏈球菌 ％：克雷伯氏菌 ％；變形桿菌 ％；綠膿桿菌％；星狀諾卡氏菌 ％；化膿棒狀桿菌 ％；白色念珠菌 ％；化膿鏈球菌 ％。 Filer F(1977)刪對(duì) 89 個(gè)奶牛場(chǎng) 16571 頭奶牛隱性乳房炎乳樣進(jìn)行病菌分離檢測(cè)，結(jié)果表明，其主要病原菌為無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、金黃色葡萄球菌等。 Dego OK等 (2022)。大量研究結(jié)果表明，各種病原微生物的感染因地區(qū)及衛(wèi)生管理狀況的不同而異。傳染性病原體主要包括無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)停乳鏈球菌 (Streptococcus dysgalactiae)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus arueus)和支原體 (Mycoplasma)等 ，它們可在乳區(qū)和牛群中傳播流行。 奶牛乳房炎病原菌區(qū)系分布及相關(guān)因素分析 引起奶牛乳房炎的病原體 奶牛乳房炎作為一種多因素性疾病，除了易感牛、病原微生 物與環(huán)境衛(wèi)生這三者之間的相互影響外，其復(fù)雜性還表現(xiàn)在致病菌的多樣性。 因而，本研究課題對(duì)于錫林浩特市周邊區(qū)域奶牛養(yǎng)殖辦理現(xiàn)狀、防治辦法和防治效 果，對(duì)奶牛發(fā)生 乳房炎 的調(diào)查研究和防治。全內(nèi)蒙有錫市伊利、藍(lán)旗圣元、多倫伊利、錫市晶源、西烏金鷹等 8個(gè)銷售 收入在百萬(wàn)元以上的乳制品加工公司，主要 生產(chǎn) 液態(tài)奶、奶粉、稀奶油等。 2022 年，發(fā)達(dá)國(guó)家人均占有奶量為312kg，國(guó)際人均 103kg，而中國(guó)只要 7kg，居國(guó)際第 148位。 Incidence of milk area around by chisquare test， the P = o. 798 ， clinical mastitis incidence shows four milk area. Recessive mastitis in accordance with the left front， left， right， right rear incidence after respectively %， %， % and l %. Milk area before and after the incidence by chisquare test， P o. 05. Incidence of milk area around by chisquare test， the P o. 05， recessive mastitis incidence shows four milk area. After the total incidence of mastitis in acc