抗癌的吲哚酚類通過(guò)抑制硫氧還原蛋白酶和活化信號(hào)的氧化還原來(lái)誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞的凋亡論-資料下載頁(yè)
2025-01-08 08:23本頁(yè)面
【正文】 身并不影響這些條件下 TR1活性）。 當(dāng) NADPH還原的 TR1被 NQO2/ NRH還原的 IQ1或 2孵育后，觀測(cè)到 TR1的活性的劑量依賴性抑制的 （圖 3A）。 抑制是 NADPH依賴的（數(shù)據(jù) 未顯示），這表明酶的硒代的活性位點(diǎn)參與了 IQs的抑制 ；抑制也 NQO2/ NRH依賴性（數(shù)據(jù)未示出），這表明與 TR1抑制有關(guān)的毒性物質(zhì)的合成是在氧化還原和基團(tuán)脫去之后。 TR1的抑制似乎是不可逆的，因?yàn)?TR1的酶的使用 Millipore公司的分子截留設(shè)備脫鹽后并沒(méi)有導(dǎo)致恢復(fù)酶的活性（數(shù)據(jù)未顯示）。 TR1的 C末端硒代半胱氨酸作為 IQ修飾位點(diǎn)的鑒定 LCMS/ MS法被用來(lái)確定 IQs的修飾位點(diǎn)。純化的 TR1由 IQs孵化，消化， 并進(jìn)行MS / MS分析。如圖 3C 中所示， 肽信號(hào)表現(xiàn)出 Se同位素分布格局特點(diǎn)被檢測(cè)出，分子質(zhì)量是 ，其對(duì)應(yīng)于該分子 TR1的 C末端的胰蛋白酶片段加上了 IQ1衍生的亞胺中間體和一種碘代乙酰胺的修飾的分子質(zhì)量。所觀察到的同位素分布也與理論分布格局一至，理論的是用 ProteinProspector方案合成的（圖 3B）。為了確定 IQs內(nèi)收的確切部位，這種肽被 MS / MS碎裂，產(chǎn)生的光譜（圖 3D）表明位點(diǎn)是硒代半胱氨酸而不是半胱氨酸殘基。這些結(jié)果確定了 TR1是被 IQ 衍生的亞胺物質(zhì)烷基化，從而導(dǎo)致了酶的抑制。 IQs處理 TR1的選擇性抑制人胰腺癌 癌細(xì)胞 IQs 1和 2的對(duì)細(xì)胞內(nèi) TR1的抑制能力在 MIA PACA2細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。 TR1活性是使用端點(diǎn)胰島素還原活性的測(cè)定的。方法在材料和方法中已經(jīng)描述。 在 MIA PACA2細(xì)胞中的 TR1活性抑制作用是劑量依賴，在 1小時(shí)處理后可以被觀測(cè)到（圖4， A觀察到兩種化合物和 B）。 IQ1的 TR1抑制的 IC50值是 146nM， IQ2 的 IC50是 82nM。 TR1的抑制作用也時(shí)間依賴性的，并最大地抑制在 1小時(shí)處理后出現(xiàn)（圖 4中， C和 D）。最活躍 TR1的抑制劑，是金諾芬（ Urig和 2022貝克爾）。圖 4E表 明， IQs 在細(xì)胞中對(duì)于TR1的抑制明顯高于金諾芬（高達(dá) 11 倍的效力）。 為了測(cè)試 IQs選測(cè)性的抑制 TR1， ,與兩個(gè)密切相關(guān)的酶的活性， GR和 GPX，在 IQ 處理的 Mia PaCa2 cells被測(cè)定。 GR有類似與 TR1的蛋白結(jié)構(gòu)，但是缺乏缺乏 C末端硒代半胱氨酸殘基（ Sandalova等人， 2022）。 GPx的是另一種含硒蛋白質(zhì)，但硒代殘基不暴露出來(lái)。這兩種酶的活性都不受到 IQ 處理不酶的活性受到 IQ 治療濃度的影響，從而成為了，有效的抑制 TR1（圖 4， A和 B）。 IQs對(duì) GR和 GPx的物抑制活 性表明， TR1的 C末端硒代半胱氨酸，它是 10個(gè)殘基暴露鏈中的倒數(shù)第二個(gè) 氨基酸（ Cheng等， 2022），成為了 IQs的靶點(diǎn)。這些數(shù)據(jù)還表明，在人體胰腺細(xì)胞中， IQ化合物是 TR1的相對(duì)特異性抑制劑。 智商處理對(duì)自由基介導(dǎo)的氧化作用 壓力， GSH / GSSG比率和非蛋白巰基的 人胰腺癌細(xì)胞。為了測(cè)試是否智商 治療導(dǎo)致在細(xì)胞的任何一般的氧化應(yīng)激，我們 活性氧測(cè)定的細(xì)胞水平（ ROS）的 通過(guò)使用熒光探針二氫乙的指示 及 239。， 739。dichlorofluorescein二乙酸酯，并沒(méi)有增加 可檢測(cè) 到熒光（數(shù)據(jù)未顯示）。作為間接 氧化應(yīng)激的指示，細(xì)胞總非蛋白 硫醇水平和 GSH / GSSG比例（參考圖 1），分別為 還確定，并且觀察到在任一指標(biāo)沒(méi)有改變 經(jīng)過(guò)藥物治療。此外，智商的到能力 在細(xì)胞中誘導(dǎo)氧化還原循環(huán)是通過(guò)測(cè)量評(píng)估 氧量（克拉克電極）。智商治療引起的不 增加氧氣吸收在細(xì)胞中的速率（數(shù)據(jù)未 示出）。這些數(shù)據(jù)表明，在智商沒(méi)有誘導(dǎo) 顯著氧化還原循環(huán)和氧化應(yīng)激在胰腺癌 癌細(xì)胞。 IQ 處理對(duì) Thioredoxin的氧化還原狀態(tài)的影響 1人胰腺癌細(xì)胞。該 thioredoxin 在 MIA中 PACA2細(xì)胞 1的氧化還原狀態(tài)后進(jìn)行了評(píng)估 1小時(shí) IQ治療。如根據(jù)材料和方法所述， 還原和氧化的硫氧還蛋白 1的形式進(jìn)行分離 通過(guò)后，碘天然蛋白質(zhì)凝膠電泳 酸處理的細(xì)胞的蛋白質(zhì)。如該圖所示。 5， 無(wú)論是與智商 1或 2的智商引起劑量依賴性的治療 增加氧化的硫氧還蛋白 1伴隨著下降 在濃度低至 100納米的還原形式（ 1） 與 75納米（ 2）。 智商處理對(duì) MAPK信號(hào)通路的影響 在胰腺癌細(xì)胞。智商誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 信號(hào)被審查 MIA PACA2細(xì)胞后 1小時(shí)的藥物 治療。治療用的 IQ1或 2導(dǎo)致的活化 雙方 P38和 JNK的 MAPK的通過(guò)增加指示 以劑量依賴性方式磷酸化的 p38和 JNK的 （圖 6， A和 B）。預(yù)處理與 P38抑制劑？米），熱火顯著降低智商誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡 PACA2細(xì)胞（圖 6， C和 D）。這個(gè)建議，智商 通過(guò)機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡在胰腺癌細(xì)胞中 涉及兩個(gè)激活的 p38和 JNK。
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