細(xì)菌的耐藥機理及檢測方法-資料下載頁
2025-01-06 07:22本頁面
【正文】 （ 3） 雙紙片協(xié)同確認(rèn)試驗： 頭孢他啶 （ 30μg/片 ） 與頭孢他啶 （ 30μg） /克位維酸 （ 10μg） 頭孢噻肟 （ 30μg/片 ） 與頭孢噻肟 （ 30μg） /克拉維酸 （ 10μg） 兩紙片抑菌圈相比 ≥5mm即為 ESBLS。 （ 4） Etest法 （ 濃度梯度法 ） ：由瑞典 AB Biodisk公司研究生產(chǎn) ， 廣洲貝肯公司經(jīng)銷 。 試條中的三代頭孢菌素或氨曲南的 MIC≥2μg/ml即可疑為 ESBLS。 （ 5 ） 儀 器 測 定 法 ： Vitek,microscan 和 BDPHOEMXTM微生物分析儀均可測試 ESBLS。 （ 6） 利用分子生物學(xué)技術(shù) （ PCR、 DNA探針等 ）及分析酶底物譜及抑制物譜 、 生物化學(xué)技術(shù)等檢測技術(shù)可對 ESBLS做出確診 。 Ampc酶檢測： （ 1） 初篩： ① 頭孢西汀 （ 30μg/片 ） 與頭孢西汀 （ 30μg） /鄰氯西林（ 200μg） 。 后者比前者的抑菌圈 ≥5mm即疑為 Ampc。 ② 5種紙片篩選：馬斯平 、 泰能 、 頭孢西汀 、 頭孢他啶與頭孢他啶 /克拉維酸 。 如頭孢西汀 ≤18mm， 對馬斯平 、 泰能敏感即疑為產(chǎn) Ampc， 如頭孢他啶與其酶抑制劑的抑菌圈 ≥5mm可能產(chǎn) ESBLS。 （ 2） 確認(rèn)試驗 （ 頭孢西汀三維水相試驗法 ） 一．金屬 β內(nèi)酰胺酶的表型檢測方法 (一 )頭孢他啶 +2巰基丙酸法 (CAZ+NCA) KB法操作均勻涂布于 MH平板上。 MH平板上分別貼兩片頭孢他啶 (30ug/片 )紙片，紙片中心相距 ,將其中一片頭孢他啶紙片上加 3ul 2巰基丙酸， 35℃ 孵育 1824h。 ：若加有 2巰基乙酸的頭孢他啶紙片抑菌圈大于單個頭孢他啶的抑菌圈（ ≧ 4mm），則為陽性，即產(chǎn)金屬 β內(nèi)酰胺酶。 一．金屬 β內(nèi)酰胺酶的表型檢測方法 (二 )亞胺培南 +EDTA法 (IMP+EDTA) KB法操作均勻涂布于 MH平板上。 MH平板上貼一片亞胺培南 (10ug/片 ) 紙片，在距亞胺培南紙片中心 ，將 EDTA 10ul 均勻浸注于空白紙片上， 35℃ 孵育 1824h。 ：若兩片紙片抑菌圈有協(xié)同作用，則為陽性，即產(chǎn)金屬 β內(nèi)酰胺酶。 二． AmpC酶新的檢測方法 (一 )三維水相試驗方法的改進 ATCC 25922按常規(guī)藥敏紙片 KB法操作均勻涂布于 MH平板上。 MH平板中心貼一片頭孢西汀 (30ug/片 ) 紙片，在距紙片邊緣 1cm處，用無菌手術(shù)刀片切 3cm長度的小槽，將待測菌株的 6個菌落接種于槽內(nèi) (勿溢出槽外 )， 35℃ 孵育1824h。 3. 結(jié)果觀察：若抑菌圈向內(nèi)凹陷，即 AmpC酶陽性。 (二 )三維水相試驗方法的改進 (MH平板打孔 [2mm]擴散法 ). 二． AmpC酶新的檢測方法 (二 )質(zhì)粒型 AmpC酶三聯(lián)紙片方法的檢測 1．將標(biāo)準(zhǔn)菌株 ATCC 25922按常規(guī)藥敏紙片 KB法操作均勻涂布于 MH平板上。 2．在 MH平板中心貼一片頭孢西汀 (30ug/片 ) 紙片，在紙片邊緣貼有待測菌的紙片（紙片上含20ul， ， 1M ）。 3．另一側(cè)邊緣貼有產(chǎn) AmpC酶菌的紙片（同上）。 4． 35℃ 孵育 1824h，如待檢菌出現(xiàn)扁平或凹陷的抑菌環(huán)為陽性。 三．鑒定卡他球菌方法 (一 )40%KNO3浸濕濾紙條，貼于羊 (馬 )血平板上，周圍點種待測菌，如果菌落周圍出現(xiàn)大的綠色環(huán) ，即為陽性。 (二 )丁酸酯酶檢測法：購買丁酸酯酶檢測紙片 (梅里埃公司生產(chǎn) )，涂細(xì)菌于紙片上，如幾分鐘內(nèi)出現(xiàn)綠色為陽性。 四． DTest試驗 1．將待檢菌按常規(guī)藥敏紙片 KB法操作均勻涂布于MH平板上。 2．在 MH平上板貼一片紅霉素 (15ug/片 ) 紙片，在距紙片邊緣 (2ug/片 ) 紙片。 3． 35℃ 孵育 1824h，如克林霉素出現(xiàn)扁平或凹陷的抑菌環(huán)為陽性。 四． DTest試驗 耐藥機制 紅霉素 克林霉素 基因型 ――――――――――――――――――――――― 泵出 (MS) R S MSRA 核糖體基因誘導(dǎo)變異 (iMls) R DTest(+) （ ermC為主） 核糖體基因結(jié)構(gòu)變異 (cMLS) R R （ ermA為主） ――――――――――――――――――――― －－ 謝 謝！ 雅 丹 地 貌
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