生化藥物和基因工程藥物分析概念-資料下載頁(yè)
2025-01-06 05:57本頁(yè)面
【正文】 而分離 。 類型 酶活力測(cè)定法 ：以酶為分析對(duì)象，測(cè)定樣品中某種酶的活力或活性，并用活力單位和比活性表示 。 酶分析法 ：以酶為分析工具或分析試劑，測(cè)定樣品中酶以外的其它物質(zhì)的含量。 二、酶法 （ 一 ） 酶活力測(cè)定法 定義： 酶活力 是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力 。 酶活力的測(cè)定 實(shí)際上是測(cè)定一個(gè)被酶所催化的化學(xué)反應(yīng)的 速度 ─ 可以用單位時(shí)間反應(yīng)底物的減少或產(chǎn)物的增加來表示 。 方法 （ 1） 終點(diǎn)法：在適當(dāng)?shù)臈l件下 ， 把酶和底物混合 ， 測(cè)定生成一定量產(chǎn)物所需的時(shí)間 。 （ 2） 將酶和底物混合后隔一定時(shí)間 ，間斷地或連續(xù)地測(cè)定反應(yīng)的連續(xù)變化 。 （ 3） 將酶與底物混合后 ， 讓其反應(yīng)一定時(shí)間 ， 然后停止反應(yīng) ， 定量測(cè)定底物減少或產(chǎn)物生成的量 。 （ 二 ） 酶分析法 動(dòng)力學(xué)分析法： 通過條件控制 ， 分別使 底物 、 輔酶活化劑或抑制劑 的濃度在酶反應(yīng)中起決定反應(yīng)速度的主導(dǎo)作用 。 則酶的反應(yīng)速度和上述相應(yīng)因素的濃度間將具有確定的比例關(guān)系 ， 通過測(cè)定酶反應(yīng)速度即可求出它們的濃度 。 總變量分析法 （ 平衡法或終點(diǎn)法 ） ： 根據(jù)被測(cè)物質(zhì) （ 底物 ） 的性質(zhì) ， 選擇適宜的分析工具酶對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行作用 ，在反應(yīng)完成后 ， 借助理化方法測(cè)出其總變化量 ， 并參考反應(yīng)的平衡點(diǎn) ， 計(jì)算出被測(cè)物的實(shí)際含量或濃度 。 三、電泳法 （ 一 ） 基本原理 電泳法 是指帶電微粒如蛋白質(zhì) 、 核苷酸 、 其他微粒分子或離子在電場(chǎng)的作用下 ， 向其對(duì)應(yīng)的電極方向按各自的速度泳動(dòng)而使組分分離 ， 再進(jìn)行檢測(cè)或計(jì)算百分含量的方法 。 （二）電泳法的分類 自由界面電泳：在一根 U形管里的溶液中，同種分子的構(gòu)型及荷電情況基本一致，在電場(chǎng)影響下，它們逐漸密集而與其他電泳遷移率不同的物質(zhì)之間形成明顯的界面。 高效毛細(xì)管電泳法（ HPCE） 區(qū)帶電泳：在電泳過程中 ， 應(yīng)用各種不同的惰性支持介質(zhì) ， 在電場(chǎng)作用下 ，使具有不同泳動(dòng)速度的組分形成各自區(qū)帶的電泳 。 常用的支持物有：濾紙 、 醋酸纖維素薄膜 、 聚丙烯酰胺凝膠（ PAGE） 、 十二烷基硫酸納 聚丙烯酰胺凝膠 （ SDS PAGE ） 。 四、生物檢定法 （一）基本原理 生物檢定法是利用藥物對(duì)生物體（ 整體動(dòng)物 、 離體組織 、 微生物等 ）的作用以測(cè)定其效價(jià)或生物活性的一種方法 。 （ 二 ） 應(yīng)用范圍 藥物的效價(jià)：測(cè)定對(duì)一些采用理化方法不能測(cè)定含量或理化測(cè)定不能反映臨床生物活性的藥物可用生物檢定法來控制藥物質(zhì)量 。 如洋地黃 、 胰島素 、 肝素及各種抗生素 。 大分子結(jié)構(gòu)的測(cè)定 某些生物制品因結(jié)構(gòu)復(fù)雜 、 分子量大 ， 而且由結(jié)構(gòu)類似 、 比例不定的多種成分組成 ， 很難用理化方法反映其生物活性；某些藥物雖可用理化方法測(cè)定含量 ， 但不能完全反映效價(jià) 。 以上藥物均采用生物檢定 。 微量生理活性物質(zhì)的測(cè)定 一些神經(jīng)介質(zhì) ， 激素等微量生理活性物質(zhì) ， 由于其很強(qiáng)的生理活性 ， 在體內(nèi)濃度很低 ， 加上體液中各種物質(zhì)的干擾 ， 很難用理化方法測(cè)定 。 而不少活性物質(zhì)的生物測(cè)定法因靈敏度高 、 專一性強(qiáng) ， 對(duì)供試品稍作處理即可直接測(cè)定 。
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