【正文】 第六節(jié) 含量測(cè)定 高效液相色譜法 非水溶液滴定法 鈰量法 比色法 紫外分光光度法 氣相色譜法 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 非水溶液滴定法 ?原理 ? 一般方法 冰醋酸作為溶劑，若滴定氫鹵酸鹽，則加 5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸 ()滴定，并用空白試驗(yàn)校正。 ? 問(wèn)題討論 ? 適用范圍： Kb＜ 108的有機(jī)堿鹽 ? 酸根影響：高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸 ? 滴定劑穩(wěn)定性：溫度、貯藏條件都有影響 ? 終點(diǎn)指示方法：結(jié)晶紫指示劑，電位法 B H + A + H C l O 4 B H + C l O 4 + H ALOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 非水溶液滴定法 ?應(yīng)用實(shí)例 ? 游離弱堿性藥物：地西泮、尼克剎米或氯氮卓，基于氮原子的弱堿性可以結(jié)晶紫為指示劑，非水溶液直接滴定，終點(diǎn)顏色綠色～藍(lán)綠色～藍(lán)色不等。 ? 氫鹵酸鹽類藥物：加入過(guò)量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難電離的鹵化汞，再用高氯酸滴定，可用結(jié)晶紫、橙黃 Ⅳ 作為指示劑，或用電位法指示終點(diǎn)。 ? 硫酸鹽類藥物：硫酸為二元酸，但在非水介質(zhì)中只顯示一元酸解離為 HSO4 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 硫酸奎寧的非水滴定 NNH 3 C OHHHC H = C H 2H ONNH 3 C OHHHC H = C H 2H OS O42 + H C l O43 H+ H+ NNH 3 C OHHHC H = C H 2H ONNH 3 C OHHHC H = C H 2H O+H+ ++H+HSO4 ClO4ClO4 ClO4LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 ( Q H + ) 2 2 + S O 4 2 + 3 H C l O 4( Q 2 H ) 2 + H S O 4 C l O 4 + ( Q 2 H ) 2 + 2 C l O 4 硫酸奎寧的非水滴定 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 非水溶液滴定法 應(yīng)用實(shí)例 ? 硝酸鹽的滴定：由于硝酸的氧化性破壞指示劑變色，用電位法指示終點(diǎn) ? 磷酸鹽與有機(jī)酸鹽：直接滴定 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 鈰量法 ?原理：氧化－還原 ?適用范圍： 硝苯地平－鄰二氮菲指示劑 N NF e ( C 1 2 H 8 N 2 ) 3 2 + F e ( C 1 2 H 8 N 2 ) 3 3 +(還原型 ) 紅色 (氧化型 ) 淺藍(lán)色 C12H8N2溶于亞鐵鹽溶液 吩噻嗪類藥物－自身顏色的變化 NSRNSRNSR e滴 定 開(kāi) 始C e 4 ++ + + Free radical 紅色自由基 Bivalent cation 二價(jià)陽(yáng)離子，無(wú)色 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 比色法 一、酸性染料比色法 ? 原理：在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中，堿性藥物 (B) 可與氫離子結(jié)合成(BH+)， 而一些酸性染料可解離為 (In)， 兩者定量結(jié)合成有色絡(luò)合物 (BH+ In)離子對(duì)，可被有機(jī)溶劑定量提取，在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收，即可算出堿性藥物的含量。 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在 120℃ 干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品25mg， 置 25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml，置 100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。 供試品溶液的制備 取本品 20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品 ）， 置 50ml量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過(guò)，收集續(xù)濾液，即得。 測(cè)定方法 精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各 2ml， 分別置預(yù)先精密加入氯仿 10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液〔取溴甲酚綠 50mg與鄰苯二甲酸氫鉀 ， 加 ，再加水稀釋至 100ml， 搖勻，必要時(shí)濾過(guò)〕 ， 振搖提取 2min后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附錄 Ⅳ B）， 在 420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與 相乘，即得供試量中含有 (C17H23N O3)2H2SO4H2O的重量。 例：硫酸阿托品片的含量測(cè)定 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 比色法 一、酸性染料比色法 ? 影響因素 ? 水性最佳 pH值：使得 BH+和 In最多 ? 酸性染料及其濃度：定量結(jié)合，產(chǎn)物溶解性好；可稍過(guò)量 ? 有機(jī)溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想 ? 水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或?yàn)V紙除去水分 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 比色法 二、鈀離子比色法 ? 原理：吩噻嗪類藥物的二價(jià)硫在 pH2177。 離子 (Pb2+)形成紅色絡(luò)合物， 10min呈色完全，可穩(wěn)定2hour， 在 500nm波長(zhǎng)附近有最大吸收，最適宜范圍50μg~ 250μg LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 紫外分光光度法 ?直接分光光度法 ? 對(duì)照品溶液同時(shí)測(cè)定 ? 百分吸收系數(shù)（ ） 例： 奧沙西泮含量測(cè)定 取本品約 15mg， 精密稱定，置 200ml 量瓶中，加乙醇 150ml， 于溫水浴中加熱，并時(shí)時(shí)振搖，使奧沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml ， 置 100ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄 Ⅳ A）， 在 229nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度；另精密稱取奧沙西泮對(duì)照品約 15mg， 同法操作并測(cè)定；計(jì)算，即得。 %11cmELOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 紫外分光光度法 ?萃取后分光光度法 堿化，有機(jī)溶劑萃取游離型堿，使其與制劑輔料分離，再用分光光度法測(cè)定 ?萃取－雙波長(zhǎng)分光光度法 堿化，有機(jī)溶劑萃取，在 254nm、 277nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收，用吸收度之差計(jì)算含量，以消除抗氧劑的干擾。 ?二階導(dǎo)數(shù)分光光度法 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 氣相色譜法 氣相色譜法 ? 分離效能好、靈敏度高、選擇性好、用量少、分析速度快 ? 有機(jī)堿或其鹽類均可直接 GC分析，但鹽解離的酸對(duì)色譜柱和檢測(cè)器會(huì)損害，因此一般將生物堿鹽的水溶液先堿化，用有機(jī)溶劑提取游離堿后再分析。 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 高效液相色譜法 反相高效液相色譜法 ? 用于雜環(huán)類藥物分析一般加入掃尾劑二乙胺或三乙胺 例：鹽酸環(huán)丙沙星滴眼液 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 酸溶液 乙腈 (82:18)用三乙胺調(diào)節(jié) pH值至 ；檢測(cè)波長(zhǎng)為 277nm。 理論板數(shù)按鹽酸環(huán)丙沙星峰計(jì)算應(yīng)不低于 2022，鹽酸環(huán)丙沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。 測(cè)定法 精密量取本品 2ml(約相當(dāng)于環(huán)丙沙星 6mg)， 置 50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml， 置 50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取在 105℃ 干燥至恒重的鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品適量 (約相當(dāng)于環(huán)丙沙星 20mg)， 置 50ml量瓶中，加水適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml， 置 50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液與對(duì)照品溶液各 10μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。 LOGO 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物分析教研室 高效液相色譜法 ?離子對(duì)色譜法 ? 原理： p H 3 . 5 [ B H + C 7 H 1 5 S O 2 O ]B H + + C 7 H 1 5 S O 2 O 將待測(cè)組份的反離子加入流動(dòng)相中，與呈離解狀態(tài)的藥物作用，生成可逆的離子對(duì)化合物。 測(cè)定雜環(huán)類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時(shí)，主要采用烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。 ? 影響條件： 流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)（十二烷基磺酸鈉＞庚烷磺酸鈉＞戊烷磺酸鈉）。