分析試樣的采取和預(yù)處理-資料下載頁(yè)
2025-05-12 15:42本頁(yè)面
【正文】 。 三、生物試樣的預(yù)處理 生物試樣的預(yù)處理方法與測(cè)定對(duì)象有關(guān)。 如果測(cè)定生物試樣中的無(wú)機(jī)成分（如金屬元素及微量元素等）的含量，處理方法與有機(jī)試樣的分解相同，通常采用干式灰化法或濕式消化，除去生物試樣中的有機(jī)基質(zhì)，使待測(cè)元素以離子態(tài)存在，然后再測(cè)定。 如果測(cè)定的是生物試樣中的生物或有機(jī)小分子以及生物大分子組分，就不能采用消化法處理樣品。 有些生化成分存在于動(dòng)物或植物細(xì)胞外的體液中，如淀粉酶、蛋白酶和多肽激素等，可選用適當(dāng)溶劑直接提取。 （一）生物組織細(xì)胞的破碎方法 機(jī)械法： 通過(guò)機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切力的作用使組織細(xì)胞破 碎的方法。 常用的方法： 組織搗碎法 （動(dòng)物內(nèi)臟或植物葉芽等比較脆嫩的組織細(xì)胞破碎，也 可用于微生物，特別是細(xì)菌細(xì)胞的破碎） 研磨法 （常用于微生物和植物組織細(xì)胞的破碎） 物理法： 通過(guò)各種物理因素使組織細(xì)胞破碎。 常用的方法： 反復(fù)凍融法 急熱驟冷法 超聲波破碎法 化學(xué)破碎法： 通過(guò)各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用使細(xì)胞破碎的方法。 酶解破碎法： 利用酶的作用將細(xì)胞壁分解，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)的方法。 常用的化學(xué)試劑有：氯仿、甲苯、丙酮或丁醇等有機(jī)溶劑，以及十二烷基硫酸鈉與氯化十二烷基吡啶等表面活性劑。 為了防止蛋白質(zhì)變性失活，化學(xué)破碎操作應(yīng)該在低溫 條件下進(jìn)行。 （二）蛋白質(zhì)的除去 在含蛋白質(zhì)的試樣中加入適當(dāng)?shù)某恋韯ㄈ缬袡C(jī)溶劑或中性鹽），使蛋白質(zhì)脫水而沉淀，離心后取上清液用于分析。 沉淀蛋白質(zhì)常用的有機(jī)溶劑： 甲醇、乙腈、丙酮、乙醇等。 中性鹽：氯化銨或硫酸銨的飽和溶液 透析法和超濾法也可以除去試樣中的蛋白質(zhì)。 高氯酸：也是一種常用的蛋白質(zhì)沉淀劑，沉淀效 率高，過(guò)量的高氯酸可加鉀鹽除去。 無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)是可逆的，即將蛋白質(zhì)稀釋后仍具有生理活性，而有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)是不可逆的。 在分離純化之前，將經(jīng)過(guò)破碎的細(xì)胞置于溶劑中， 使目標(biāo)生物大分子與其他成分分離，并盡可能保持其生 物活性的過(guò)程。 （三）生物大分子的提取 影響提取的因素 ： 目標(biāo)物在提取溶劑中的溶解度的大??； 由固相擴(kuò)散到液相的難易； 溶劑的 pH和提取時(shí)間； 稀鹽溶液和緩沖溶液對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好且溶解度大，是最常用的蛋白質(zhì)和酶的提取液。 絕大多數(shù)蛋白質(zhì)和酶，在低鹽濃度溶液中都有較大的溶解度，如在純水中加入少量中性鹽，蛋白質(zhì)的溶解度將比在純水中大大增加，稱為“鹽溶”現(xiàn)象。但中性鹽的濃度增加至一定時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度又逐漸下降，直至有沉淀析出，稱為“鹽析”現(xiàn)象。 提取蛋白質(zhì)和酶常用： ～ 和 ～ 。 溶液的 pH對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性影響很大，應(yīng)盡量避免酸、堿度過(guò)高。 一般控制在 pH =6~8范圍內(nèi)。 提取的溫度 對(duì)提取效果有明顯的影響。一般來(lái)說(shuō)，適當(dāng) 提高溫度可以提高蛋白質(zhì)的溶解度；但溫度過(guò)高又會(huì)引 起蛋白質(zhì)的變性失活。預(yù)制備具有活性的蛋白質(zhì)和酶， 提取操作一般要求在 5℃ 以下的低溫進(jìn)行。 常用的有機(jī)溶劑有：乙醇、丙酮、異丙酮或丁醇等。 四、利用微波法預(yù)處理試樣 1. 微波的特點(diǎn)： ① 容易被某些極性物質(zhì)（水、酸、堿及含水分的物 質(zhì)等）吸收； ② 可以穿透玻璃、石英、陶瓷、塑料及紙張等； ③ 金屬（如銅、鐵、鋁等）、 ④ 合金只能反射微波 2. 微波法預(yù)處理試樣的特點(diǎn)： ① 加熱速度快，消解能力強(qiáng)，縮短熔樣時(shí)間 ② 試劑用量少，空白值低 ③ 可避免揮發(fā)損失和試樣的污染，提高分析結(jié)果 的準(zhǔn)確度和精密度 ④ 環(huán)境友好 ⑤ 有利于實(shí)現(xiàn)試樣預(yù)處理自動(dòng)化
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