生物樣品的預(yù)處理ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 13:36本頁(yè)面
【正文】 只需用溫和方法 – 植物細(xì)胞較難破碎，須用中等或強(qiáng)度大的方法 – 微生物細(xì)胞較復(fù)雜，一般用較強(qiáng)的方法 BioPharm ? 目的物的特性 ⑴．細(xì)胞中的位置 ? 游離狀：只需溫和破碎，除去不溶部分。 ? 結(jié)合狀：可能結(jié)合在膜或細(xì)胞器內(nèi)，需先收集膜或細(xì)胞器，再破碎 ⑵．敏感性 ? 溫度、 pH、氧、剪切力、雜酶等影響 ⑶．處理量 ? 有些處理量大，如組織搗碎機(jī)、勻漿器等。 ? 有些處理量少，如超聲波破碎等。 BioPharm 提取劑 組成 ? 要求：目的物溶于其中，?；钚裕瑴p雜質(zhì)。 考慮因素如下： （ 1） ．離子強(qiáng)度 影響物質(zhì)溶解度的主要因素，適當(dāng)?shù)牡碗x子強(qiáng)度溶液（ ～ ）除增加溶解度，還對(duì)活性有穩(wěn)定作用。 BioPharm （ 2） ． pH 影響目的物的溶解度及穩(wěn)定性。 一般控制在 pI附近的穩(wěn)定性范圍內(nèi)。 （ 3） ．添加劑 抑制劑（主要水解酶抑制劑），如提取核酸時(shí)，添加核酸酶抑制劑防目的物被分解。 保護(hù)劑（穩(wěn)定性），如對(duì)含巰基的酶添加谷胱甘肽等巰基保護(hù)劑 BioPharm 用量 ? 目標(biāo) 收率（ 80%以上）且目的物濃度大 ? 動(dòng)物、微生物 —加 ～ 3體積的提取劑； ? 植物 —加入 ～ 1體積的提取劑。 BioPharm 提取液的澄清 ? 動(dòng)物、微生物提取液往往較混濁，需澄清 沉降速度： V=d2(σ ρ )ω2γ /18η 顯然：加大 ω或 d或減小 η 都可增加 V 方法： ㈠．粒子聚結(jié)（增大 d） ? 25% (NH4)2SO4處理 ? 酸化法 ? 適用于動(dòng)物細(xì)胞 BioPharm ㈡．降低提取液粘度 ? NA（ DNA、 RNA），類樹(shù)膠等易造成粘度大。 ? 適合于微生物細(xì)胞 ㈢．其他方法 – ⑴ 80%硫銨或 55%丙酮，使 Pr沉淀而類樹(shù)膠不沉淀； – ⑵ 吸附法； – ⑶ 改善破碎方法。 BioPharm 濃縮 ㈠ . 沉淀法 ? 提取液沉淀目的物溶于小體積提取劑 ? 要求：目的物原始濃度 1mg/ml ㈡ . 吸附法 ? 目的物濃度 1mg/ml時(shí)可用此法 ㈢ . 減壓透析或超濾 ? 1. 減壓透析 – 原理：在滲出液外抽真空，使膜兩邊形成壓差，加速膜內(nèi)物質(zhì)透出。 ? 2. 超濾 —— 屬加壓膜分離技術(shù)之一 BioPharm ㈣ . 干膠溶漲法 ? 加入具一定孔徑微孔能吸水的凝膠，如葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺 ? 方式：直接加入或在半透膜外吸收 ㈤ . 多聚物吸水法 ? PEG、 PVP、 CMC等具強(qiáng)大吸水力，可在半透膜外吸收。 ㈥ . 減壓蒸餾（真空旋轉(zhuǎn)濃縮） BioPharm 細(xì)胞破碎技術(shù)研究的發(fā)展方向 ? 多種破碎方法相結(jié)合 ? 與上游過(guò)程相結(jié)合 – 上游過(guò)程中培養(yǎng)基、生長(zhǎng)期、操作參數(shù)等都對(duì)細(xì)胞破碎有影響 – 采用基因工程方法改造菌種 – 包含體的形成 – 克隆噬菌體溶解基因 – 耐高溫產(chǎn)品的基因表達(dá) ? 與下游過(guò)程相結(jié)合 – 細(xì)胞破碎與固液分離緊密相關(guān) – 要從后分離過(guò)程的整體角度來(lái)看待細(xì)胞破碎操作 BioPharm 作業(yè) ? 為什么在提取植物組織中的酶時(shí)需要除去所含的酚類化合物？一般的去除酚類化合物方法及原理是什么？ ? 請(qǐng)對(duì)以高壓勻漿和珠磨法為代表的機(jī)械法與以化學(xué)滲透和酶溶法為代表的非機(jī)械法進(jìn)行特點(diǎn)比較（比較內(nèi)容包括破碎機(jī)理、碎片大小、粘度、時(shí)間及效率、通用性、內(nèi)含物釋放、經(jīng)濟(jì)性、應(yīng)用范圍等）。
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