guan6外源基因在真核細胞中的表達-資料下載頁
2025-05-10 15:53本頁面
【正文】 毒載體為自身復(fù)制缺陷型。 腺病毒載體、牛痘痘苗病毒載體、單純性皰疹病毒載體 優(yōu)點：效率高 缺點：操作復(fù)雜 非病毒哺乳動物表達載體 : 質(zhì)粒（ pCDNA3等） 三、篩選標志基因 很少通過細胞的形態(tài)來鑒定和篩選被轉(zhuǎn)染的細胞，利用 篩選標志 基因的表達產(chǎn)物賦予細胞的特性而區(qū)分細胞。 四、外源基因在哺乳動物細胞中的表達方式 瞬時轉(zhuǎn)染：外源基因?qū)氲讲溉閯游锛毎?1～ 4天，就可以檢測到基因的表達情況。表達完全由導(dǎo)入的質(zhì)粒來執(zhí)行，絕大多數(shù)質(zhì)粒沒有整合到染色體上而被降解或隨細胞分裂而丟失。 永久轉(zhuǎn)染：導(dǎo)入的基因整合到細胞的染色體 DNA中。 五、外源 DNA導(dǎo)入哺乳動物細胞的方法 病毒感染 ：借用病毒的感染方式，將外源基因事先插入到病毒的基因組中，并用適當?shù)姆绞桨b成有感染活性的重組病毒顆粒，用于感染細胞，從而將外源病毒導(dǎo)入到相應(yīng)的細胞中。 常用：逆轉(zhuǎn)錄病毒，腺病毒；皰疹病毒等。 優(yōu)點：效率高 缺點：重組病毒建立有一定難度；安全性；抗體影響； 轉(zhuǎn)染： 外源核酸導(dǎo)入到細胞中的非病毒方法，通常稱為轉(zhuǎn)染。分化學(xué)方法和物理方法。 理想的轉(zhuǎn)染方法：操作簡單、高效、低毒、對細胞正常生理狀況影響小、重復(fù)性好、成本低。 磷酸鈣共沉淀法 DEAE葡聚糖法 陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 顯微注射法 電轉(zhuǎn)移 基因槍 Transfection of DNA by calcium phosphate coprecipitation A typical mammalian expression vector for highlevel protein expression Liposomemediated gene transfer (lipofection) Gene transfer by electroporation SV40 viral vectors 綠螢光眼睛的基因轉(zhuǎn)殖魚 魚類受光蛋白基因控制視網(wǎng)膜專一性表現(xiàn)的上游序列與綠色螢光基因相接，然後利用顯微注射將這段 DNA 打到魚卵內(nèi)，幾天後即可以觀察到只有眼睛才會有綠螢光出現(xiàn) (箭頭所指 ) 的基因轉(zhuǎn)殖魚。 有綠螢光肌肉條紋的基因轉(zhuǎn)殖魚 魚類控制肌肉專一性表現(xiàn)的上游序列與綠螢光基因相接，然後利用顯微注射將這段 DNA 打到魚卵內(nèi)，在胚胎發(fā)育過程中即可觀察到只有肌肉纖維才會有的綠螢光出現(xiàn)的基因轉(zhuǎn)殖魚。 全身性綠螢光的基因轉(zhuǎn)殖魚 將沒有專一性表現(xiàn)之基因的上游序列與綠螢光基因相接，然後利用顯微注射將這段 DNA 打到魚卵，結(jié)果出現(xiàn)全身都會發(fā)綠光的基因轉(zhuǎn)殖魚。 第四節(jié)基因表達產(chǎn)物的檢測 基因轉(zhuǎn)錄水平檢測 Northern Blot、 RNA雜交保護和 RTPCR 蛋白翻譯水平檢測 免疫方法 ELISA、 Western Blot 生物活性檢測 根據(jù)表達產(chǎn)物特性進行設(shè)計
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