guan6外源基因在真核細胞中的表達-展示頁
2025-05-22 15:53本頁面
【正文】 外，許多高A+T含量的基因常會由于提前終止而不能有效轉(zhuǎn)錄 。 不同的培養(yǎng)基配方、發(fā)酵參數(shù)和飼養(yǎng)方案主要是通過提高細胞絕對總數(shù)而并非單個細胞產(chǎn)率來提高外源蛋白的產(chǎn)量。 優(yōu)點：成長快，易培養(yǎng)，成本低，遺傳操作方便，能進行翻譯后加工和修飾 巴氏畢赤酵母（ Pichia pastoris） 用于基因工程表達外源蛋白的優(yōu)點：發(fā)酵密度高；外源基因表達量高； 可以建立有效的分泌型表達； （分泌型表達？） 減輕宿主的代謝壓力，減少受蛋白酶降解的危險，方便產(chǎn)物的純化，也利于二硫鍵的正確折疊。 ②在真核宿主細胞中表達重組基因所需要的元件，包括啟動子、增強子、轉(zhuǎn)錄終止和加 polyA信號序列、mRNA剪接信號序列、能在宿主細胞中復(fù)制或增殖的序列，能用在宿主細胞中篩選的標(biāo)志基因、以及供外源基因插入的單一限制性內(nèi)切酶識別位點等。原核表達具有 操作方便、快捷，需時較短，表達量大，適合工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。 ? 隨著內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)用各種不同的載體在原核、真核系統(tǒng)中進行蛋白表達更為行之有效。外源基因在真核細胞中的表達 Expression In Eukaryotic Host Cells DNA RNA protein Biological activity Gene copy number Promoter activity mRNA stability Ribosome binding site Codon usage Protein stability Many hostdependent factors ? 人們合成與生物相關(guān)的物質(zhì)是從尿素開始的， 1828年，德國化學(xué)家維勒人工合成了存在于生物體的這種有機物。 ? 在 1960年我國科學(xué)家采用化學(xué)方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白質(zhì) —— 胰島素。 ? 而這其中大腸桿菌表達系統(tǒng)發(fā)展得最為迅速、成熟。 原核表達系統(tǒng)： 大腸桿菌表達系統(tǒng)、枯草桿菌表達系統(tǒng) 優(yōu)勢：高產(chǎn)量，操作簡便 缺陷：較多哺乳動物蛋白基因很難在此系統(tǒng)表達產(chǎn)生有功能的蛋白 原因 —— 蛋白表達后的正確折疊和修飾 真核表達系統(tǒng)： 酵母表達系統(tǒng) yeast expression system Pichia pastoris 昆蟲表達系統(tǒng) Insect expression systemBaculoviruses 哺乳動物細胞表達系統(tǒng) Mammalian expression system 外源基因在真核表達系統(tǒng)中表達的 3環(huán)節(jié)： 載體的構(gòu)建； 構(gòu)建的載體 DNA在真核細胞中的導(dǎo)入； 表達產(chǎn)物的鑒定 ?真核表達載體至少要含兩類序列： ①原核質(zhì)粒的序列，包括在大腸桿菌中起作用的 復(fù)制起始序列 、能用在細菌中篩選克隆的 抗藥性基因標(biāo)志 等，以便插入真核基因后能先在很方便操作的大腸桿菌系統(tǒng)中篩選獲得目的重組 DNA克隆、并 復(fù)制繁殖 得到足夠使用的數(shù)量。 第一節(jié)外源基因在畢
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1