外源基因的表達(dá)ppt課件-展示頁
2025-01-26 17:10本頁面
【正文】 質(zhì) 中的 核糖體 上 轉(zhuǎn)譯 成多肽或蛋白質(zhì)，再經(jīng)過加工、糖化，形成高級結(jié)構(gòu)。 ?與此同時(shí)， mRNA立即與核糖體結(jié)合轉(zhuǎn)譯出相應(yīng)的多肽或蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)錄完畢時(shí)轉(zhuǎn)譯也完成，隨之 mRNA也被水解掉。 基因表達(dá)在原核生物與真核生物中的差別 （ 1） 原核生物表達(dá)系統(tǒng) ?基因表達(dá)是以 操縱子 的形式進(jìn)行的。 基因表達(dá) —— 是指 結(jié)構(gòu)基因 在調(diào)控序列的作用下轉(zhuǎn)錄成 mRNA，經(jīng)加工后在核糖體的協(xié)助下又轉(zhuǎn)譯出相應(yīng)的基因產(chǎn)物 —— 蛋白質(zhì) ，再在受體細(xì)胞環(huán)境中經(jīng) 修飾 而顯示出相應(yīng)的功能。第六章 外源基因的表達(dá) 基因重組的 主要目的 使目的基因在某一細(xì)胞中能得到高效表達(dá)，即 產(chǎn)生人們所需要的高產(chǎn)的目的基因產(chǎn)物 ，如蛋白質(zhì)、多肽類生物藥物。 基因工程技術(shù)的 核心 —— 基因表達(dá)技術(shù) 。 從基因到有功能的產(chǎn)物這整個 轉(zhuǎn)錄 、 轉(zhuǎn)譯 及所有的 加工 過程就是基因表達(dá)的過程，它是在一系列 酶和調(diào)控序列 的共同作用下完成的。 ?當(dāng)操縱子的調(diào)節(jié)基因與 RNA聚合酶作用時(shí)，結(jié)構(gòu)基因則開始轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的 mRNA。 基因操縱子調(diào)節(jié)系統(tǒng)示意圖 調(diào)節(jié)基因 啟動基因 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 DNA 轉(zhuǎn)錄 （ ） RNA聚合酶 （ +） 轉(zhuǎn)錄 翻譯 mRNA 翻譯 阻遏蛋白 蛋白質(zhì) 誘導(dǎo)劑 控制區(qū) 信息區(qū) 操縱子 （ 2） 真核生物基因表達(dá)系統(tǒng) ?轉(zhuǎn)錄 是在 核內(nèi) 進(jìn)行的，先生成 hnRNA，再加工去掉內(nèi)含子，外顯子相連接，并修飾 5′和 3′末端后才形成成熟的、有功能的 mRNA。 第三節(jié) 外源基因表達(dá)系統(tǒng) 外源基因表達(dá)系統(tǒng)： 泛指目的基因與表達(dá)載體重組后，導(dǎo)入合適的受體細(xì)胞，并能在其中有效表達(dá)，產(chǎn)生目的基因產(chǎn)物（目的蛋白）。 真核生物基因表達(dá)系統(tǒng)： 如酵母表達(dá)系統(tǒng)、植物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。 基因組結(jié)構(gòu)簡單，便于基因操作和分析。 生理代謝途徑及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚。 內(nèi)源蛋白酶會降解表達(dá)的外源蛋白，造成表達(dá)產(chǎn)物的不穩(wěn)定。 目前大多數(shù)外源基因都是以大腸桿菌為受體系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)的，是目前應(yīng)用最廣泛的基因表達(dá)系統(tǒng)。 大腸桿菌基因表達(dá)載體可分為 3個系統(tǒng)： DNA復(fù)制及 重組載體的 選擇 系統(tǒng)（復(fù)制子、選擇標(biāo)記） 外源目的基因的 轉(zhuǎn)錄 系統(tǒng) 蛋白質(zhì)的 翻譯 系統(tǒng) 大腸桿菌基因表達(dá)載體 （ 1） DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng) ① 復(fù)制子 復(fù)制子 ：是一段包含復(fù)制起始位點(diǎn)（ ori）和反式因子作用區(qū)在內(nèi)的 DNA片段。 常見的復(fù)制子 pMB p15A、 ColE1： 松弛復(fù)制型 ，每細(xì)胞質(zhì)?？截悢?shù)10～ 20個。 在同一大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)， 含 同一類型復(fù)制子 的不同質(zhì)粒載體不能共存 含 不同類型復(fù)制子 的不同質(zhì)粒載體可以共存 ② 選擇標(biāo)記 目的 ：使轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生新的表型，將轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞從大量的菌群中分離出來。 其原因一方面是由于許多質(zhì)粒本身就是帶有抗菌素抗性基因的抗藥性 R因子；另一方面則是因?yàn)榭咕乜剐杂浱柧哂斜阌诓僮?、易于選擇等優(yōu)點(diǎn)。表達(dá)載體上的抗藥性基因賦予宿主特定的抗藥性，使其能在抗生素的培養(yǎng)條件下正常生長。 在構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)載體的過程中，選擇何種抗生素抗性基因，還必須考慮到是否會對特定宿主細(xì)胞的代謝活動產(chǎn)生影響。 啟動子和終止子 因宿主的不同而有差別，往往在不同的宿
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1