guan細胞融合ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 18:05本頁面
【正文】 利用單個細胞培養(yǎng)技術(shù)選育出遺傳穩(wěn)定的分泌特異抗體的細胞系。 ? 在培養(yǎng)過程中，一般要加能釋放某些生長因子促進雜交瘤生長的飼養(yǎng)細胞，如小鼠的腹腔巨噬細胞、脾細胞或胸腺細胞等。 ? 方法有有限稀釋法、軟瓊脂培養(yǎng)法、顯微操作法、應(yīng)用熒光激活分選儀等。 通過適當?shù)南♂屵_到分離單個細胞進行培養(yǎng)的目的 1）取出陽性孔內(nèi)的細胞進行計數(shù) 2）用培液將其稀釋到例如每毫升內(nèi) 10個細胞。 3）如果在 96孔板內(nèi)每孔加 ，每孔內(nèi)將為一個細胞 4）加入一定數(shù)量的飼養(yǎng)細胞，經(jīng)過 8~12天后， 可觀察到有集落生長的孔。 5）根據(jù)檢測的陽性結(jié)果再次進行克隆化。 有限稀釋法 在加入飼養(yǎng)細胞的無菌平皿內(nèi)鋪上一層 ％的瓊脂，待凝固后再鋪上一層混有雜交瘤細胞的％的軟瓊脂。待細胞長成集落后，用毛細管吸出移種于含飼養(yǎng)細胞的 96孔板內(nèi)。 軟瓊脂培養(yǎng)法 第四節(jié) 雜種細胞在細胞生物學研究中的應(yīng)用 ? 1） 基因定位 不同種屬的細胞融合時，常會出現(xiàn)一個親本細胞的染色體被優(yōu)先排除，而另一個親本的染色體被選擇性留下，即 染色體分離 的現(xiàn)象。由此，可根據(jù)表型和與表型特征相對應(yīng)的基因在特定染色體上。 例如 ： HGPRT－ 人細胞與 TK－ 的小鼠細胞融合后，可用 HAT培養(yǎng)基分離得到一種僅含一條人 E組染色體的雜種細胞，具有 TK活性，由此得到人的 TK基因是在 E組染色體上的。 ? 2） 體細胞雜種的致瘤性分析 通過正常二倍體細胞和致瘤性或病毒轉(zhuǎn)化細胞的融合來進行致瘤性的遺傳分析。 ? 3） 遺傳缺陷的基因互補 基于雜種細胞的基因互補作用，可分為基因間和基因內(nèi)的互補作用，即雜種細胞可以具有兩種親本在遺傳上缺陷的基因表型。通過這種基因互補，可以用正?；騺碇委熡捎诨蛲蛔兓蚧蛉笔У募膊 ? ?4） 分化功能表達調(diào)控的研究 ? 通過細胞融合可將不同分化狀態(tài)或組織類型的細胞構(gòu)建成為能夠存活的種內(nèi)或種間雜種，同時對雜種細胞內(nèi)的基因組和胞質(zhì)觀察和分析，了解如何通過相互作用而最終導致原先表達的分化性狀熄滅或保留。 思考題 ? 1 什么是細胞融合？有怎樣的意義？ ? 2 細胞融合的主要方法有哪些？各有什么特點？ ? 3 HAT的選擇原理是什麼？ 本章結(jié)束 謝謝！
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