【導(dǎo)讀】該方法基于甲硅烷基化生育酚可以通過毛細(xì)管氣相色譜進(jìn)行分。將樣本進(jìn)行甲硅烷基化處理，SylonBFT作為硅烷化試劑，吡啶作為溶劑。酸鹽是內(nèi)標(biāo)物，α-生育酚是基準(zhǔn)物。β-、γ-和δ-生育酚的響應(yīng)因數(shù)同α-生育酚取同一個。數(shù)值（注解1）。酸鹽，將其溶解在三氯甲烷里，最終的濃度近似為。注入器溫度為240℃。準(zhǔn)確稱量20～30mg的α-生育酚，倒入容量為50mL的錐形燒瓶中。加熱10分鐘左右，至50℃，偶爾進(jìn)行攪拌，或直到固體完全融解為止。加入的內(nèi)標(biāo)溶液（試劑3）和15mL的三氯甲烷。的生育酚總含量的變異系數(shù)為±％。吡啶易燃，容易引起火災(zāi)。吸入即可引起中毒，有麻醉作用。焰，或高溫會引起藥品燃燒。使用吡啶、SylonBFT和三氯甲烷時要佩戴手套，保持良好的通風(fēng)。樣品未能妥善保藏時，可能會造成生育酚中毒，如此帶來偏低的結(jié)果。杯中，置于150℃的電熱板上，進(jìn)行融化，直到恒重。

　　

【正文】 3. 加入一定數(shù)量的熱中和乙醇和 2mL 的指示劑。 4. 使用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定，劇烈搖動直到第一縷不變的粉色出現(xiàn)。顏色的強度同未加入樣品的中和乙醇溶液一樣。該粉色必須保持 30 秒。 計算 1. 椰子油，以及棕櫚仁油的游離脂肪酸百分含量通常以月桂酸的百分含量表示；棕櫚油是按棕櫚酸，盡管如此，大多數(shù)油脂都是按照油酸的百 分含量表示。 （ a） ? ? ? ?樣品的重量堿體積％＝油酸游離脂肪酸 ?? （ b） ? ? ? ?樣品的重量堿體積％＝月桂酸游離脂肪酸 ?? （ c） ? ? ? ?樣品的重量堿體積％＝棕櫚酸游離脂肪酸 ?? 商用油脂的取樣和分析 2. 游離脂肪酸的含量通常以酸值表示，而不是以百分比表示。酸值被定義為，中和 1g樣品所需要的 KOH毫克數(shù)。將游離脂肪酸（油酸）的百分含量乘以 ，就可以得到對應(yīng)的酸值。 精度 表 2 中列出了經(jīng)過精制、脫色和除臭處理的油品的精度數(shù)據(jù)。未提純油品的精度數(shù)據(jù)參見表 3。 表 2 經(jīng)過精制、脫色和除臭處理的油品中游離脂肪酸含量測定的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SR） a 近似的 FFA 含量（％） － － － － SR RSD（ CV，％） R（ 95％）＝ SR a數(shù)值來源于 AOCS Smalley Laboratory Proficiency Program 表 3 未提純油品中游離脂肪酸含量測定的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SR） a 近似的 FFA含量（％） － － SR RSD（ CV，％） R（ 95％）＝ SR a數(shù)值來源于 AOCS Smalley Laboratory Proficiency Program 注解 1. 99％異丙醇，可以作為替代溶劑，溶解未提純的和精制的植物油。 2. 如果油品被二氧化碳?xì)飧采w，需蓋上瓶塞，劇烈搖動 1 分鐘。 參考資料 參見 J. Assoc. Off, Anal. Chem 59:658 （ 1976） regarding the ruggedness of this method. P23 不溶性雜質(zhì) 定義：該方法用來測定不溶于煤油和石油醚的雜質(zhì)的含量。 范圍：適用于所有的普通油脂。 裝置 1. 古氏坩堝－配有一個未裝有機填料的玻璃纖維過濾器（ Reeve Angel 934 AH，或是Whatman GF/C）。用水、乙醇和醚清洗過濾器。 101177。 1℃下，干燥至恒重。在干燥器中冷卻至室溫，稱重。 2. 規(guī)格適當(dāng)?shù)倪^濾瓶，以及古氏坩堝接管。 試劑 1. 石油醚－ AOCS 說明書 H 241。 商用油脂的取樣和分析 2. 煤油－精煉石油餾出物，通過美國材料實驗協(xié)會 D56標(biāo)準(zhǔn)方法測定，閃點不低于 23℃（ 75℉）。貼上標(biāo)簽。 在實驗開始以前，應(yīng)使用古氏坩堝（裝置 1）過濾煤油。 樣品的制備 1. 樣品必須充分混合。如果需要，緩慢加熱，使之軟化（不能融解），用高效混合器進(jìn)行充分混合。 步驟 1. 利用這種含水揮發(fā)性物質(zhì)的殘余物進(jìn)行測定（ AOCS Official Methods Ca 2b38，或 Ca 2d25），或者使用以同樣方法制備的樣品進(jìn)行測定（注解 1）。 2. 向殘余物中添加 50mL 煤油，在水浴中加熱，以溶解該脂肪樣品。 3. 安裝一個真空裝置，使用備好的古氏坩堝過濾溶液。使用 10mL 的煤油進(jìn)行清洗，重復(fù) 5 次，在每次添加煤油以前，先排干上一 次加入的煤油。 4. 使用石油醚徹底清洗，以除去所有的煤油。 101177。 1℃下，將坩堝和過濾物干燥至恒重。在干燥器中冷卻至室溫，稱重。 計算 1. 100?樣品的重量過濾物的重量不溶性雜質(zhì)％＝ 注解 警告 石油醚和煤油都是易燃性的溶劑。應(yīng)在通風(fēng)櫥中使用。 編號注解 1. 不溶性雜質(zhì)含量過高的樣品（例如，一些確定的原料）可能難以過濾。一個有 5所實驗室參與的研究表明：可以在這些樣品中加入 2g子樣品（而不是 AOCS Official Methods Ca 2b38，或 Ca 2d25 中規(guī)定的 5g），而且對精度不會產(chǎn)生太大的影 響。 P24 用電熱板測定含水揮發(fā)性物質(zhì)的含量 定義：該方法用來測定實驗條件下，含水揮發(fā)性物質(zhì)的含量。 范圍：適用于所有的普通油脂。包括乳狀液，例如，黃油、人造黃油和酸性椰子油等。不適用于那些異常樣品，例如，用溶劑萃取的油脂，可能含有沸點稍高的溶劑殘余物；還有含有甘油一酸酯雜質(zhì)的樣品。 裝置 1. 電熱板－表明經(jīng)過高度拋光；或者覆上耐熱墊板，以防止器皿的磨損。 2. 玻璃燒杯－規(guī)格為 100～ 150mL，或是其它一些相似的通用盤子。 3. 干燥器－配有高效干燥劑。氯化鈣不能滿足要求。參見 AOCS 說明書 H 987。 商用油脂的取樣和分析 樣 品的制備 1. 軟化了的，或溶化了的樣品容易在水中沉淀，所以過程中必須仔細(xì)攪拌樣品，以使水溶液均勻分布。緩慢加熱，使樣品軟化，用高效混合器進(jìn)行充分混合。 步驟 1. 將一個配衡燒杯放入干燥器中進(jìn)行干燥和冷卻。準(zhǔn)確稱量 5～ 20g 混合均勻的樣品，將其倒入燒杯中。 2. 在電熱板上加熱樣品。用手緩慢旋轉(zhuǎn)燒杯，以避免噴灑，否則會導(dǎo)致水分快速的沸騰。 3. 終點法的判斷依據(jù)是：上升氣泡消失，泡沫出現(xiàn)。另外一個好的判斷方法是：在燒杯上放置一個清潔、干燥的表面皿。除實驗的最后階段以外，樣品溫度不能超過 130℃。 4. 當(dāng)表觀終點出現(xiàn)時，加熱，使煙霧 在一瞬間內(nèi)產(chǎn)生，但需注意，不能過熱。 5. 在干燥器中冷卻至室溫，稱重。 計算 1. 100?樣品的重量失去的重量含水揮發(fā)性物質(zhì)％＝ P25 用滴定法測定油脂中的脂肪酸鹽含量 定義：使用滴定法測定樣品中油酸鈉的含量，以計算樣品的堿度。 范圍：只適用于精制植物油（參考資料 1）。 裝置 1. 試管－硼鈦酸鹽玻璃（規(guī)格為 150 40mm），使用磨砂玻璃塞，平底。 2. 微量滴定管－容量為 5mL。 3. 蒸汽?。部梢杂盟?。 試劑 1. 丙酮－含 2％的水。按下面的方法制備：向 980mL 實際級別的丙酮中加入 20mL的蒸餾水（注解，警告）。 2. 鹽酸（ HCl）－近似 ，進(jìn)行準(zhǔn)確標(biāo)定。參見 AOCS 的說明書 H14－ 52。 3. 藍(lán)色指示劑溶液－用水稀釋至溴苯酚的含量為 ％。 4. 氫氧化鈉（ NaOH）－近似 。 步驟 1. 試液要現(xiàn)配現(xiàn)用。按下面的方法配制：向每 100mL含水丙酮溶液（試劑 1）中加入 的溴苯酚藍(lán)色指示劑溶液（試劑 3），使用 的 HCl（試劑 2），或 的 NaOH（試劑 4）進(jìn)行滴定，直到試液顏色恰好變?yōu)辄S色為止。 2. 稱量 40g（注解 1）待測油脂，放入用試液（步驟 1）仔細(xì)漂洗過的試管中（裝置 1）。 商用油脂的取樣和分析 3. 向試樣中加入 1mL的 水，用蒸汽浴（或水?。┘訜幔瑒×覔u動。加入 50mL 的試液（步驟 1），加熱，充分搖動試管。兩個清晰的層形成后，分離過程就結(jié)束了。 注解－如果油脂中含有脂肪酸鹽，上層溶液的顏色會從綠色變?yōu)樗{(lán)色。 4. 用微量滴定管緩慢滴加 的 HCl（試劑 2），直到溶液的顏色剛好由綠色 /藍(lán)色變?yōu)辄S色。加熱，搖動，滴加 的 HCl，重復(fù)操作，直至上層溶液的黃色不再發(fā)生變化。記下所用 HCl的總體積數(shù) mLs。 5. 按照步驟 1～ 4，對不含脂肪酸鹽的油脂進(jìn)行空白校正。記下所用 HCl的總體積數(shù) mLb。 計算 1. ? ? ? ?g bs 樣品質(zhì)量，－＝油酸鈉脂肪酸鹽 ?? Nppm 式中： mLs＝步驟 4 中所用 HCl的體積 mLb＝步驟 5 中所用 HCl的體積 N＝ HCl的當(dāng)量濃度 注解 警告 丙酮，易燃。與氧化劑反應(yīng)可以生成具有爆炸性的過氧化物。在性能良好的通風(fēng)櫥中使用。避免與三氯甲烷混合。 編號注解 1. 該方法適用于油脂中脂肪酸鹽的含量在 ％以上的情況。濃度較高時，樣品的分析數(shù)量最好為 4g，仍使用 的 HCl滴定。 參考資料 1. A study among seven industrial organizations indicated that this method is suitable only for refined oils Yukagaku（ Japan） 39:1056（ 1990） . 2. This method is identical with Codex Alimentarius method CAC/RM 131969 and similar to British Standard 648:1958. 3. Wolff, . Oleagineux p. 197（ April, 1948） . P26～ P27 通過氣液色譜法（ GLC）測定脂肪酸的組分：順－順異構(gòu)體、反式異構(gòu)體 定義：該方法使用配有 SP2340色譜柱的毛細(xì)氣液色譜儀，測定氫化了的，以及未氫化了的植物油脂中脂肪酸的組分。 范圍：該方法的設(shè)計思想是，只通過一次毛細(xì)氣液層析，就可以估計出植物油脂的三個性質(zhì)：（ a）脂肪酸的組成；（ b）反式異構(gòu)體的不飽和度；（ c）順－順甲叉中斷異構(gòu)體的不飽和度。該方法通過計算反式異構(gòu)體的面積百分比，以得到其在所有成分（具有一個，或多個反式雙鍵）中的含量。順－順異構(gòu)體的含量等于亞油酸甲酸和 次亞麻酸甲酯 含量的總和 。參考資料1 是關(guān)于該方法和傳統(tǒng)的脂肪氧合酶方法之間一致性的討論。該方法測得的反式異構(gòu)體的含商用油脂的取樣和分析 量與紅外記錄分光光度計法測得的不一致（ AOCS Official Methods Cd 1461）。一個報道過的觀察結(jié)果顯示：該方法對于氫化植物油中的順式異構(gòu)體十分敏感，造成了反式 十八烯酸甲酯 含量的測定值偏低（注解 1 和參考 2）。 裝置 1. 氣相色譜儀－裝有毛細(xì)管注射系統(tǒng)（分流式、操作時的分流比為 1:100）和火焰電離檢測器（ FID），至少可以滿足以下的要求（注解 1）： 注射口 210℃ 檢測器 210℃ 烘箱的溫度分布： 初始溫度 150℃ 初始停留時間 0 分 方案速率 ℃ /min 終點溫度 200℃ 終點停留時間 10 分 2. 毛細(xì) GLC柱－ 60m ，涂有 SP2340（ Supelco ＃ 24023, Supelco, Inc., Bellefonte, PA, USA），參考注解 1， 2。 試劑 1. 載氣－氦，最小純度為 ％，進(jìn)行干燥，每公斤的最大含氧量為 10mg。 2. 參考樣品－組分已知的順式甲酯和反式甲酯的混合物。例如， No. K110（＃ 19050, Alltech Associates, Inc, Deerfield, IL, USA），或者 GLC67（ NuChekPrep, Inc, Elysian, MN, USA）的定量混合物。 步 驟 1. 按照裝置部分的描述，搭建氣相色譜儀。在分流率為 100:1 時，載氣的平均線速度為15cm/sec。在室溫下，用載氣通宵吹掃新柱，使之得到要求的狀態(tài)。然后，逐步將溫度升高（ 1～ 2℃ /min）至比正常操作溫度高出 10～ 20℃，但不能超過色譜柱的建議界限。 2. 根據(jù)官方分析化學(xué)家協(xié)會（ AOAC）的 過程，使用甘油三酸酯制備甲酯（見注解 3 和參考資料 3）。融解樣品，并充分混合。然后，用管形瓶取樣，脫除甘油三酸酯，進(jìn)行甲基化反應(yīng)。用己烷，或庚烷稀釋溶液，至甲酯的含量近似達(dá)到 1％。 3. 將 1μ g 甲酯溶液注入氣相色譜儀 中，該甲酯是使用參考樣品制得的。確定每一個組分（見注解 4），并與圖 1 做比較。選擇操作條件，以實現(xiàn)全部分離，或者順式 C18： 1和反式 C18： 1的更好分離（見注解 5）。 4. 將 1μ g 甲酯溶液注入氣相色譜儀中，該甲酯是使用試樣制得的。使用面積歸一化法計算每一個組分的含量，所有組分都使用同一個相應(yīng)因子。 5. 用圖 1 中的色譜圖作為導(dǎo)向圖表，通過停留時間的對比，將所得的色譜峰進(jìn)行合理的分配。 H . Heckers, et al撰寫的論文同樣可以為這個分配工作提供幫助。 6. 測定樣品的組分。報道的 C18： 1 含量是所有 C18： 1 順式和 反式組分含量的總和。 C18： 2和 C18： 3同樣如此，都是其所有組分的總和?？偟姆词胶渴?C18： C18： 2和 C18： 3反式組分含量的總和。圖 1中的色譜圖顯示了這些組分的流出順序。 C18： 1的反式組分早于其順式組分流出。 C18： 2 的反式組分由三