【導(dǎo)讀】醫(yī)學(xué)研究需要進(jìn)行大量的基礎(chǔ)實驗和臨床試驗，實驗動物學(xué)是醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究的重要組成部分，段，直接影響著許多領(lǐng)域的研究水平。學(xué)生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。用于醫(yī)學(xué)實驗的動物種類很多，但哪種動物最。一般來說，理想的實驗動物應(yīng)具備以下基本條件。動物實驗的目的是利用實驗動物所得的數(shù)據(jù)和。資料，來推測和判斷人類的有關(guān)數(shù)據(jù)和資料。據(jù)此而論，哺乳動物中與人。除靈長類動物外，其他哺乳類動物在解。不同種系的動物存在著較大的差異，而。在25℃左右，冬季保持在20℃左右。目前，大多數(shù)飼養(yǎng)室均采用盒式飼養(yǎng)，并排在。目前各動物中心均有飼料加工機(jī)械裝置，良影響，并防止研究人員被動物咬傷。2．小鼠小鼠一般不會咬人，保定方法與大鼠相同。雙耳和腹部，以免損傷耳部血管和腹部臟器。手術(shù)的進(jìn)行，需要在麻醉狀態(tài)下保定動物。比較安全，很少因麻醉過量而使動物死亡。手術(shù)時間較長時可適當(dāng)追加麻醉劑量。

　　

【正文】 或右 3mm（ R3mm） 。 ? （ 3） 冠狀面 （ coronal plane） ： 以經(jīng)過前囟和耳間線的冠狀面為前后兩個標(biāo)志冠狀面 ，并以此定位某一結(jié)構(gòu)的前后 （ anteriorposterior， AP） 方位 ， 前為 （ +） ， 后為（ － ） 。 如 前 囟 或 耳 間 線 前 2 mm（ AP+2mm） ， 前囟或耳間線后 3mm（ AP－ 3mm） ， ? 二 、 操作步驟 ? 1． 儀器校驗 校驗?zāi)X立體定向儀 （ 以江灣 I型 C腦立體定向儀為例 ） 、 電極 、 移動架各滑尺是否保持直角 ， 螺絲是否松動 ，頭部固定裝置是否與立框平行 ， 兩側(cè)對稱程度如何等 。 ? 2． 動物麻醉 Wistar大鼠 250g左右 ，用 10%水合氯醛按 300mg/kg體重經(jīng)腹腔注射麻醉 。 ? 3． 固定 將鼠固定于腦立體定向儀上 ， 按鼠腦圖譜所提供的坐標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行操作 。 ? （ 1） 插入耳棒：正常耳棒鉤尖方向為朝前下方 ， 刻度側(cè)朝上 。 將耳棒放入兩側(cè)外耳道 ， 朝前下方輕輕插入（ 一般能聽到聲音 ） ， 然后固定耳棒 。 檢查鼠頭是否偏抖或松動 ， 調(diào)節(jié)兩側(cè)耳棒刻度 ， 并互相朝對側(cè)壓緊 ， 使鼠頭完全居中被牢牢固定 。 ? （ 2） 固定上頜：調(diào)整上頜固定器的螺絲 ， 將鼠上門齒塞進(jìn)上頜齒固定扳的槽內(nèi) ， 裝好兩側(cè)眼眶固定桿 ， 收緊全部螺絲 。 這時從各個方向推壓鼠頭 ， 均不會出現(xiàn)移動 。 ? （ 3）開顱：剪去頭部毛，沿矢狀縫作 2~3cm長切口，剝離筋膜及肌肉，推開骨膜，暴露骨縫，并用 3%雙氧水洗凈。顱骨上若有出血點須用骨蠟及時止血。 ? 4． 定位鉆孔 按實驗要求 ， 在指定位置鉆孔后安置電極或?qū)Ч?， 進(jìn)行各項實驗 。 ? 5． 定位標(biāo)記 利用插入腦內(nèi)的電極或?qū)Ч茉诩舛俗鞫ㄎ粯?biāo)記 。 刺激電極可用普魯士蘭標(biāo)記法 ，記錄電極可用微電泳方法導(dǎo)入染料滂胺天蘭 ， 導(dǎo)管則可直接注入染料氨黑 10B。 ? 6． 組織學(xué)鑒定 利用立體定向儀進(jìn)行定位的結(jié)果是否準(zhǔn)確 ， 須在實驗結(jié)束后進(jìn)行組織學(xué)鑒定 。處死動物 ， 從一側(cè)頸動脈插管進(jìn)行灌注沖洗 ， 取腦固定 。 冰凍連續(xù)切片 ， 或切片作蘇木素 伊紅染色 ， 以確定電極或?qū)Ч艿募舛宋恢檬欠駵?zhǔn)確 。按鑒定結(jié)果 ， 標(biāo)出尖端位置的坐標(biāo) ， 并繪在鼠腦圖譜上 ， 逐步測量統(tǒng)計備用 。 第九節(jié) 腦內(nèi)微量注射術(shù) ? 利用腦內(nèi)微量注射技術(shù) （ Microinjection into brain areas） ， 可在腦內(nèi)各核團(tuán)或腦室中注入少量藥物 （ 如各種受體的激動劑 、 拮抗劑 、 藥物等 ） 。 通過觀察給藥前后機(jī)體行為或電生理指標(biāo)的變化 ， 可分析這些藥物的作用 ，并推測有關(guān)核團(tuán)的功能 。 ? 運用腦立體定位術(shù)準(zhǔn)確地按指定部位埋入微量注射管 。腦內(nèi)微量注射比系統(tǒng)給藥 （ 靜脈 、 腹腔給藥 ） 及腦室內(nèi)注射 ， 雖同屬外源性給藥的方法 ， 但具有給藥量小 、 直接入腦和腦內(nèi)區(qū)域相對集中的優(yōu)點 ， 在急性或慢性生理實驗中均可應(yīng)用 ， 也可用于形態(tài)學(xué)研究 （ 如注射辣根過氧化物酶等 ） 。 本節(jié)以鼠為例進(jìn)行介紹 。 ? 一 、 器材和藥品 ? 腦立體定向儀，常規(guī)手術(shù)器械，微量注射套管 2副，不同規(guī)格的微量注射管、微量注射操縱器等。 10%水合氯醛20ml， 生理鹽水 20ml， 普魯卡因青霉素鈉鹽 40ml 3瓶，氨黑 10B溶液 1ml，牙托粉和牙托水， 502膠水 1瓶。 ? 二 、 操作步驟 ? 現(xiàn) 以 基 底 外 側(cè) 杏 仁 核 （ basolateral amygdaloid nucleus） 為例進(jìn)行介紹 。 若以耳間線平面定位 ， 其坐標(biāo)為耳間線前 （ AP+） 、 零 平 面 背 側(cè) 1 . 5 mm（ DV+） 、 正中矢狀面外側(cè) 5 . 0mm（ ） 。 若以前囟定位 ， 其坐標(biāo)為前囟后 （ ） 、 水平面腹 （ ） 、 正中矢狀面外側(cè)（ ） 。 ? 1． 確定注射部位 根據(jù)實驗要求，明確注射部位，按鼠腦圖譜立體定位，如中央灰質(zhì)、海馬、杏仁核、側(cè)腦室等 ,現(xiàn)以基底外側(cè)杏仁核為例進(jìn)行介紹。 ? 2． 埋置注射套管 成年健康 Wistar大鼠 ， 用 10%水合氯醛 （ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉 ， 腦立體定向儀固定鼠頭 。 切開皮膚 ， 按基底外側(cè)杏仁核的坐標(biāo)位置 ，先在顱骨上鉆孔 ， 埋置不銹鋼注射套管（ 套管外徑 ， 內(nèi)置直徑 的不銹鋼絲內(nèi)芯 ， 其下端比套管長） ， 然后用牙托水調(diào)牙托粉粘合固定套管 。 術(shù)中注意無菌操作 ， 術(shù)后注射青霉素 20萬 U/d， 共 3d， 以防感染 。 術(shù)后 3d開始進(jìn)行實驗 。 ? 3． 微量注射 取羥戊甲嗎啡 1mg， 溶于 1ml生理鹽水 ， 將帶有微量注射管的塑料管灌滿 ， 接上已裝有生理鹽水的 2181。l微量注射管 ， 并將注射管安置在微量注射操縱器上 。 拔出注射套管內(nèi)芯 ， 接上注射套管內(nèi)管 ， 均勻地轉(zhuǎn)動操縱器 ， 在 2min內(nèi)將2181。g/20181。l溶液注入腦內(nèi) 。 ? 4．組織學(xué)鑒定 實驗結(jié)束，在注射管內(nèi)注入 2181。l染料氨黑 10B溶液作標(biāo)記，處死動物取腦浸入 10%甲醛溶液固定，一周后切片，檢查微量注射點是否在基底外側(cè)杏仁核內(nèi)。 ?第十節(jié) 心臟灌注固定術(shù) ? ? 在免疫組織化學(xué)實驗中 ， 組織標(biāo)本中的殘留血液成分會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果 ， 所以 ，應(yīng)對組織進(jìn)行充分地沖洗 ， 其中最簡便有效的方法是在動物處死時經(jīng)心臟灌注 。 大多數(shù)實驗標(biāo)本 ， 在灌注后可緊接著進(jìn)行固定 ， 所以也稱為經(jīng)心臟灌注固定術(shù) 。 ? 一 、 灌注準(zhǔn)備 ? 1． 器械準(zhǔn)備 術(shù)前準(zhǔn)備好心臟灌注裝置 ， 可用輸液器自制簡易心臟灌注裝置 。 鹽水瓶（ 500ml） 2個 ， 玻璃插管或灌注針數(shù)個 （ 口徑大小按動物主動脈粗細(xì)而定 ） 。 脫脂棉 、 絲線 、止血鉗 、 剪子 、 鑷子 、 解剖刀 、 骨鉗等 。 ? 2． 灌注液和固定液 根據(jù)實驗要求配制灌注液 （ 常用生理鹽水或等滲磷酸鹽緩沖液 PBS） 和固定液 （ 常用 4%多聚甲醛 ） 。 生理鹽水內(nèi)可加1%亞硝酸鈉 ， 使血管擴(kuò)張 ， 有利于灌注 。 將灌注器調(diào)試到備用狀態(tài) 。 ? 二 、 灌注方法 ? 將預(yù)熱 （ 37℃ ） 好的灌注液和固定液分別倒入相應(yīng)的鹽水瓶 。 灌注固定前 ， 先將輸液管內(nèi)灌入生理鹽水 ， 使輸液管內(nèi)水流通暢 ， 切忌管內(nèi)有氣泡 ， 如有氣泡可堵在血管 ， 影響灌注效果 。 ? 將動物用 10%水合氯醛麻醉 ， 仰臥位固定于手術(shù)臺 。 用左手持鑷子夾起腹部皮膚 ， 右手持剪刀自腹部剪一小口 ， 由此沿腹中線向前將皮膚剪至下頜 ， 分離皮下結(jié)締組織 ， 將皮膚翻向兩側(cè) 。沿胸骨劍突中線縱行切開 ， 沿膈或肋緣向兩側(cè)剪開 ， 打開胸腔暴露心臟 。 小心用鑷子將心包打開 ，滴少許生理鹽水保持濕潤 。 ? 分離主動脈 ， 穿過二根絲線 ， 一根準(zhǔn)備扎玻璃插管 ， 另一根待灌注完畢時結(jié)扎血管 。 在左心室尖剪開一小孔 ， 迅速將連接鹽水瓶的玻璃管從小孔插入左心室直至升主動脈內(nèi) ， 用絲線牢固地扎在玻璃插管頭上 ， 使插管不能退出心臟 ， 然后開放生理鹽水進(jìn)行灌注 。 待見到右心房逐漸膨脹起來時 ， 用小剪刀將右心耳剪開一小孔 ， 使血液排出 。 如此沖洗直到肝臟或舌尖 、 瞬膜變白 ， 表明灌注效果良好 ， 停止灌注 。 如需要固定 ， 可接著灌注固定液 ， 固定液進(jìn)入血管后動物逐漸出現(xiàn)肌肉抽動 ， 待全身器官組織變硬時 ， 說明固定效果良好 。 結(jié)扎主動脈 ， 拔出插管 ， 停止灌注固定 ，即可取材或?qū)游锢^續(xù)放入固定液中保存 。 ? 對于熟練操作者 ， 左手以無齒鑷子捏住心尖部 ， 右手用眼科剪刀在心尖部剪開左心室 ， 迅速將灌注針插入左心室直至升主動脈 ， 用止血鉗夾住灌注針 ， 調(diào)整灌注針角度使灌注液順利灌入 ，然后將右心耳剪破 ， 放出體內(nèi)血液 。 待右心耳流出清流液體后 ， 即表明動物經(jīng)灌注后體內(nèi)已無殘留血液 。 一般大鼠灌注 200~300ml、 小鼠100ml、 家兔 500~600ml即可達(dá)到良好的灌注效果 。 如需進(jìn)行固定 ， 則在灌注后繼續(xù)灌注固定液 ， 一般大鼠灌注 200~300ml、 小鼠 100ml、家兔 500~600ml即可達(dá)到良好的固定效果 ， 此時動物的四肢 、 尾 、 頸部均已僵硬 ， 停止灌注固定 ， 然后即可根據(jù)需要取材 。