物理圖譜的構建策略研究(ppt39)-經營管理-資料下載頁
2025-08-05 20:07本頁面
【導讀】定單個基因或某些感興趣的基因片段，為人類基因組30億個堿基測序打下基礎。構建物理圖譜是人類基因組計劃的重要組成。由于到目前為止末能發(fā)明直接對基因。組DNA整體水平進行分析檢測的技術，所以，凡來源于質粒、噬菌體、細菌等可插入或克。隆DNA片段的DNA分子統(tǒng)稱為載體。經過載體重組的外源DNA比其單獨進入。受體細胞的效率提高幾個數(shù)量級。胞內準確復制、大量擴增和明確表達。即含有粘性位點的質。復制起始點ori；AmpR為抗性標記基。因；CEN為著絲?；?；切斷染色體臂。。YAC的主要用途是：YAC克隆重疊群。嵌入及轉基因技術都采用了YAC克隆系統(tǒng)。BAC是F因子與大腸桿菌構建的DNA單拷。DNA(包括HindⅢ和BamHI切點、因此，BAC克隆庫適于創(chuàng)建DNA資。的菌落培養(yǎng)和雜交的BAC克隆DNA文庫的篩選；DNA樣品容易通過相同的電泳。cDNA圖譜也是一種細胞學圖譜，但構成圖譜?；蚪M中的許多表達序列區(qū)域可轉錄mRNA，域，分離出相應的特異性基因。標之間的距離和在染色體上的排列順序。
【正文】 (marker) ? 界標是繪制圖譜的標記工具。構圖方法不同，界標的種類、界 標間的 距離、圖譜的分辨率也不同。圖譜中的界標包括采用家系分析法構建的遺傳圖譜中的基 因。 DNA原位雜交法構建的遺傳圖譜中的 DNA探針，用 RFLP、 MS、SNP等作為標記構建遺傳圖譜中的 DNA多態(tài)性。低分辨率的物理圖譜界標有 STS和 cDNA(EST) 。高分辨 率的 物理圖譜界標：一是基于 STS構圖法 STSs界標；二是限制性酶切指紋法構圖中的限制性酶切 位點界標。 中國最龐大的下載資料庫 ? (2)作圖單位 ? 根據(jù)構圖方法確定。限制性內切酶的酶切片段是物理圖譜的基本單位。以 STS 為路標構建圖譜是以 STS作為基本單位；以堿基構成的終極物理圖譜則以堿基對為基本單位 中國最龐大的下載資料庫 ? (3)確定標記順序 ? 確定標記位點相互之間的銜接關系是制作圖譜的主要目的。將全基因組 的 不同界標單位進行排序的方法包括：限制性酶切指紋排序、重疊連續(xù)克隆序列(STC)排序、 計算機軟件排序、染色體步查和跳查填補間隙排序等。 中國最龐大的下載資料庫 ? (4)具有 DNA可復制系統(tǒng) ? 除可見圖譜外，其他圖譜的構建均需DNA復制系統(tǒng)。包括 YAC、 BAC 、粘粒、福斯粘粒、 M13 和 P1等載體系統(tǒng)。上述復制系統(tǒng)在組裝 DNA片段的容量、插入外源 DNA后的穩(wěn)定性、克隆嵌合體以及構建基因文庫所需的克隆數(shù)量上均不 中國最龐大的下載資料庫 二、完整圖譜構建的步驟 ? 分離大片段 DNA ? 從染色體顯帶的低分辨率細胞學作圖到限制酶切指紋、重疊克隆群的高分辨率物理圖譜，分 離到的 DNA片段的大小差異很大，可介于 10Mb到 100Kb之間。 中國最龐大的下載資料庫 大片段 DNA和 DNA ? 把覆蓋一條染色體的 50— 500個大 DNA片段進行排序以構建低分辨率圖譜的排序方法有兩種： 一是用兩種不同的限制性內切酶分別切割基因組 DNA，可以產生兩套彼此重疊的 DNA片段，再 用適當?shù)奶结槍⑾噜彽闹丿B片段鑒定出來。二是只用一種限制性內切酶產生大片段，再用一 套連點探針 (linking probe)與兩個不同的大 DNA片段雜交，由于探針是由酶切大片段產生的 小片段制成，含有特定酶切位點順序，所以可確定大段 DNA在基因組中 中國最龐大的下載資料庫 ? 克隆間隙的填補方法 — 染色體步查 ? 染色體步查和跳查 (chromosome walking和 chromosome jumping)是尋找重疊克隆和填補克隆 群間隙的有效方法。從染色體上的某一位置 (或某一克隆片段 )出發(fā)，設法分離得到與其鄰接 的 (一側或兩側 )片段，一步一步地或跳過一定序列，根據(jù)末端重疊序列將鄰近片段連接起來
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