物理圖譜的構(gòu)建策略研究(ppt39)-經(jīng)營管理-展示頁
2024-08-26 20:07本頁面
【正文】 程包括： ? DNA(包括 HindⅢ 和 Bam HI切點(diǎn)、位點(diǎn)兩側(cè) T 7和 Sp 6 序列及 6個(gè)限制酶稀有切點(diǎn) )插入 pMBO 131 的 Sal I位點(diǎn)； cosN位點(diǎn)的 400bp的 Sa lI插入質(zhì)粒 SacI； cosN和克隆片段之間的 SacI位點(diǎn)插入 P 1loxP,構(gòu)成pBAC 108L質(zhì)粒 。 (3)在基因功能研究中，基因嵌入及轉(zhuǎn)基因技術(shù)都采用了 YAC克隆系統(tǒng)。它不僅可容納大片段的外源 D NA ，而且在構(gòu)建基因組文庫時(shí)需要較少的克隆。 中國最龐大的下載資料庫 中國最龐大的下載資料庫 中國最龐大的下載資料庫 YAC ? （ 1 ） YAC克隆結(jié)構(gòu) ? 復(fù)制起始點(diǎn) ori； Amp R為抗性標(biāo)記基因； CEN(centromere)為著絲粒基因 ；ARS為自由復(fù)制序列； TEL(telomere)為端粒，位于染色體每條臂的末端，參與染色體末端 復(fù)制以及防止核酸外切酶切斷染色體臂。即含有粘性位點(diǎn)的質(zhì)粒重組體。另外，載體可將外源 DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確復(fù)制、大 量擴(kuò)增和明確表達(dá)。載體的功能是 為外源 DNA進(jìn)入受體細(xì)胞提供運(yùn)載工具。物理圖譜的終極圖譜是 DNA序列圖譜。 中國最龐大的下載資料庫 ? 構(gòu)建物理圖譜是人類基因組計(jì)劃的重要組成部分。 中國最龐大的下載資料庫 ? 第三章 中國最龐大的下載資料庫 ? 物理圖譜 (physical map)是在 DNA分子水平上描述染色體中界標(biāo)間順序和距離 的 圖 譜。構(gòu)建物理圖譜的目的是分離和鑒定單個(gè)基因或某些感興趣的基因片段，為人類基因組 30 億個(gè)堿基測(cè)序打下基礎(chǔ)。由于到目前為止末能發(fā)明直接對(duì)基因組 DN A整體水平進(jìn)行分析檢測(cè)的技術(shù)，所以，只有將基因組 DNA切割成小片段后插入不同的生物載 體再轉(zhuǎn)染到一些生物體中使其穩(wěn)定復(fù)制，分析其基因片段拷貝，對(duì)克隆群插入DNA片段按其 在原始基因組上線性順序進(jìn)行排序，構(gòu)建物理圖譜。 中國最龐大的下載資料庫 第一節(jié)構(gòu)建物理圖譜的重要工具 —— 克隆載體 ? 凡來源于質(zhì)粒、噬菌體、細(xì)菌等可插入或克隆 DNA片段的 DNA分子統(tǒng)稱為載體。經(jīng)過載體重組的外源 DNA比其單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞的效 率提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。載體除具備上述功能外，必須具有從一個(gè)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)宿主細(xì) 中國最龐大的下載資料庫 一、 ? 粘粒 (cosmid)又稱柯斯質(zhì)粒，是Collins J 和 Hohn B 等于 1978年為克隆真核 DNA 大區(qū)段構(gòu)建的帶有粘性末端的 cos位點(diǎn)質(zhì)粒。 cosmid來源于噬菌體和質(zhì)粒DNA的整 合，所能克隆的最大外源片段的 DNA為 。 中國最龐大的下載資料庫 中國最龐大的下載資料庫 ? （ 2） YAC克
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