重組人干擾素生產(chǎn)工藝(精品ppt)(編輯修改稿)
2024-11-19 22:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 擾素生產(chǎn)工藝路線(l249。xi224。n)〔2〕,人源轉(zhuǎn)化細胞系培養(yǎng)生產(chǎn)工藝： 1999年：IFN αn1/Wellferon, 批準用于臨床。 優(yōu)點：首次實現(xiàn)大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。 缺點(quēdiǎn)： 活性低，退出臨床應(yīng)用。,第十四頁，共四十五頁。,干擾素生產(chǎn)工藝路線(l249。xi224。n)〔3〕,上市(sh224。ng sh236。)產(chǎn)品：重組人干擾素rhuIFN 1986，rhuIFNα2a， rhuIFNα2b； 1990，rhuIFNγ1b；1993，rhuIFNβ1b； 2001－2002： PEG化IFN，PEGIntron, Pegasys 表達產(chǎn)物：無糖基化，Nmet，無活性包涵體 工藝特點：發(fā)酵過程，隨后變性、復(fù)性過程。,基因工程(jīyīn gōngch233。ng)大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝:,第十五頁，共四十五頁。,干擾素生產(chǎn)工藝路線(l249。xi224。n)〔4〕,上市產(chǎn)品：rhuIFN β1a 1996， Avonex(Biogen)； 2002， Rebif(Serono) 表達產(chǎn)物：166 aa 糖基化蛋白，22.5 ku 工藝特點：分泌表達，產(chǎn)量低，本錢(běn qi225。n)高,過程嚴格,動物(d242。ngw249。)無限細胞系培養(yǎng)生產(chǎn)工藝：,第十六頁，共四十五頁。,干擾素生產(chǎn)工藝路線(l249。xi224。n)〔5〕,?宿主：腐生型假單胞桿菌(gǎnjūn)〔Pseudomonas putida〕 ?上市產(chǎn)品：IFN α2b/安福隆 ?表達產(chǎn)物：無糖基化可溶性蛋白質(zhì)，具有天然分子 結(jié)構(gòu)和生物活性 ?工藝特點： 發(fā)酵周期短：幾個小時 無需變性、復(fù)性過程，獲得有活性產(chǎn)品 純化過程：淘汰抗體親和層析,基因工程(jīyīn gōngch233。ng)假單胞桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝,第十七頁，共四十五頁。,2. 基因工程假單胞桿菌的構(gòu)建(ɡ242。u ji224。n)與保藏,基因工程(jīyīn gōngch233。ng)假單胞桿菌菌種建立 基因工程假單胞桿菌菌種特性 菌種庫的建立與保藏,第十八頁，共四十五頁。,、基因工程(jīyīn gōngch233。ng)假單胞桿菌菌種建立,第一步：干擾素α2b基因的克隆 第二步：表達(biǎod225。)載體的構(gòu)建 第三步：工程菌的構(gòu)建,第十九頁，共四十五頁。,第一步：干擾素基因(jīyīn)的克隆(RTPCR),制備白細胞，病毒誘導(dǎo)，別離mRNA,反錄酶合成cDNA,PCR， 基因連接質(zhì)粒, 轉(zhuǎn)化E.coli,篩選鑒定克隆。 測序：編碼(biān mǎ)人IFNα2b基因序列,501bp，165aa。,第二十頁，共四十五頁。,第二步：表達(biǎod225。)載體構(gòu)建,? IFN基因與表達載體連接 ? 轉(zhuǎn)化(zhuǎnhu224。)大腸桿菌 ? 篩選陽性克隆 ? 獲得序列正確表達載體,第二十一頁，共四十五頁。,第三步：工程菌構(gòu)建(ɡ242。u ji224。n),轉(zhuǎn)化假單胞桿 篩選高表達、穩(wěn)定遺傳(y237。chu225。n)的工程菌 獲得原始菌種,第二十二頁，共四十五頁。,基因工程(jīyīn gōngch233。ng)菌的特性,〔1〕具有宿主菌的特征： 細菌：革蘭氏陰性菌，有莢膜，無芽孢(y225。 bāo)，桿狀。 菌落：
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