t-rflp精講(編輯修改稿)
2024-11-19 06:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 道菌群的影響，得到這一方面的研究成果。,第五頁，共十八頁。,具體的實驗步驟,一、提取樣本的基因組,我提取的是小鼠糞便的基因組，用自己實驗室配制的糞便基因組提取試劑盒來抽提，基因組提取的結(jié)果良好。,第六頁，共十八頁。,二、PCR,PCR條件： 95℃，5 min 變性95℃，30 S 退火55℃，30 S 37個循環(huán) 延伸72℃，2min 72℃，10 min，4℃保存。 然后用DNA凝膠回收試劑盒（上海中亞）對PCR產(chǎn)物做一個回收，以去掉PCR反應(yīng)中的雜帶，保證只有800bp大小的DNA片段，去掉雜帶。,第七頁，共十八頁。,下面是一次實驗十六個樣本PCR后的電泳圖，我們PCR得到的DNA片段一定要是800bp位置的，不可出現(xiàn)雜帶，而且對于PCR的污染要求很嚴(yán)格，因為這個實驗用的引物是通用引物，基本上所有的生物基因組都可以P出這樣的條帶，所以對于所用試劑、耗材、環(huán)境要求很高，否則最后結(jié)果沒有說服性。,750bp,第八頁，共十八頁。,三、酶切,選用HhaⅠ作為實驗的限制性內(nèi)切酶，酶切位點是GCG^C酶切體系采用40 μL, PCR 產(chǎn)物為6 μL,在37 176。C 酶切6 h, 反應(yīng)完成后, HhaⅠ在65 176。C 水浴中20 min失活。酶切時間一定要控制好，不能太短，酶切沒有
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