血紅蛋白的提取和分離(編輯修改稿)
2024-11-19 04:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 橡皮塞2個、打孔器、小刀、移液管、尼龍紗、尼龍網(wǎng)、玻璃管、尼龍管等。色譜柱的制作過程：準備材料→加工橡皮塞→安裝色譜柱下面進行第二步――凝膠色譜柱的裝填。請閱讀教材：色譜柱的裝填過程。步驟操作要求①操作要求色譜柱垂直固定在支架上②計算稱量凝膠根據(jù)色譜柱體積計算凝膠用量③配制懸浮液凝膠顆粒＋蒸餾水→充分溶脹凝膠顆粒＋洗脫液→沸水?、苎b填懸浮液一次性緩慢倒入；輕輕敲打⑤緩沖液洗滌平衡立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡12h樣品加入和洗脫。其基本過程是：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)至此，血紅蛋白即可得到粗分離。在整個操作過程中，應當注意以下事項：（1）紅細胞的洗滌：洗滌次數(shù)不能過少；低速、短時離心。（2）凝膠的預處理：沸水浴法時間短，還能除去微生物和氣泡（3）色譜柱的裝填：裝填盡量緊密，降低顆粒間隙；無氣泡；洗脫液不能斷流。（4）色譜柱成功標志：紅色區(qū)帶均勻一致地移動。（三）課堂總結(jié)、點評血紅蛋白的取和分離凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定血紅蛋白的提取和離蛋白質(zhì)分子的差異性蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定（四）實例探究例1 利用凝膠色譜法，什么樣的蛋白質(zhì)先洗脫出來（ ）A. 相對分子質(zhì)量大的B. 溶解度高的C. 相對分子量小的D. 所代電荷多的解析：凝集色譜法使根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)能進入凝膠內(nèi)部通道，路程較長，移動速度較慢；相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動速度較快，首先洗脫出來。答案：A例2 蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步（ ）A. 樣品處理、凝膠色譜操作、SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳B. 樣品處理、凝膠色譜操作、純化C. 樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定D. 樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定解析：蛋白質(zhì)
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