血紅蛋白的提取與分離(優(yōu)質(zhì)課)(編輯修改稿)
2024-11-04 06:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ,(3)別離血紅蛋白溶液：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移(zhuǎny237。)到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min ，試管中的溶液分為4層:,原血液,甲苯,磁力攪拌器,蒸餾水,第二十三頁，共五十四頁。,第1層〔最上層〕： 〔 〕甲苯(jiǎ běn)層,第2層〔中上層〕： 〔 〕的沉淀層， 〔 〕色薄層(b225。o c233。nɡ)固體,第3層〔中下層〕： 〔 〕的水溶液層 〔 〕的液體(y232。tǐ),第4層〔最下層〕： 其它雜質(zhì)〔 〕的沉淀層,無色透明,脂溶性物質(zhì),白,血紅蛋白,紅色透明,暗紅色,第二十四頁，共五十四頁。,用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明(t242。um237。ng)液體。,第二十五頁，共五十四頁。,取( )ml的血紅蛋白溶液裝入〔 〕中，將透析袋放入盛有300ml的物質(zhì)(w249。zh236。)的量濃度為20mmol/L的〔 〕中，pH為〔 〕，透析12小時，目的是〔 〕或用于更換樣品中的〔 〕。透析袋一般用硝酸纖維素制成，又稱玻璃紙。,除去樣品(y224。ngpǐn)中分子量較小的雜質(zhì),透析袋,磷酸(l237。n suān)緩沖液,7.0,緩沖液,(4)透析,1,第二十六頁，共五十四頁。,第二十七頁，共五十四頁。,2.凝膠色譜(s232。 pǔ)制作,1〕凝膠色譜(s232。 pǔ)柱的制作,①取長40厘米，內(nèi)徑1.6厘米的玻璃管，兩端需用(xū y242。nɡ)砂紙磨平。,②底塞的制作：打孔 挖出凹穴 安裝移液管頭部 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好。a、選擇適宜的的橡皮塞，中間打孔；b、在橡皮塞頂部切出鍋底狀的〔 〕，在0.5ml的〔 〕頭部切下〔 〕長的一段，插入橡皮塞孔內(nèi)，上部不得超過橡皮塞的凹穴底面。,凹穴,移液管,5cm,第二十八頁，共五十四頁。,底塞中插入的玻璃管的上部不得(bu de)超出橡皮塞的凹穴底面，否那么難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)別離不徹底。,c.剪尼龍(n237。l243。ng)網(wǎng)小圓片覆蓋在〔 〕上，用〔 〕的尼龍(n237。l243。ng)紗將橡皮塞〔 〕包好，插到玻璃管一端。 d、色譜柱下端用移液頭部做〔 〕，連接一細(xì)的〔 〕，并用螺旋夾控制尼龍管的〔 〕，另一端放入收集〔 〕的收集器內(nèi),橡皮塞的凹面,100目,上部,出口(chū kǒu)部位,尼龍管,翻開與關(guān)閉,色譜流出液,第二十九頁，共五十四頁。,⑤安裝(ānzhuāng)其他附屬結(jié)構(gòu)。,③頂塞的制作(zh236。zu242。)：,插入(chā r249。)安裝了玻璃管的橡皮塞,④組裝：將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個整體。,第三十頁，共五十四頁。,2〕凝膠色譜柱填料(ti225。nli224。o)的處理,〔1〕凝膠的選擇： 〔 〕〔G75〕 “G〞表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度 及別離(fēnl237。)范圍。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠 膨脹時吸水7.5克。,〔2〕方法： 配置凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡(j236。np224。o)于〔 〕中充分溶脹后，配成〔 〕。,蒸餾水,凝膠懸浮液,交聯(lián)葡聚糖凝膠,第三十一頁，共五十四頁。,①固定：將色譜(s232。 pǔ)柱處置固定在支架上,②裝填： 將〔 〕一次性的緩慢(huǎnm224。n)倒入〔 〕內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。,〔3〕凝膠色譜柱的裝填(zhuānɡ ti225。n)方法,凝膠懸浮液,色譜柱,注意：凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。裝填凝膠柱時不能有氣泡存在：因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低別離效果。,第三十二頁，共五十四頁。,③洗滌平衡 裝填完畢后，立即(l236。j237。)用緩沖液洗脫瓶，在( )高的操作壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液〔pH為7.0〕充分〔 〕12小時。,洗滌(xǐd237。)平衡,注意液面不要低于凝膠外表，否那么(fǒuz233。
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