20xx年醫(yī)學(xué)專題—常用蛋白標(biāo)簽(編輯修改稿)
2024-11-17 22:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 這11個氨基酸作為抗原表位表達在不同的蛋白質(zhì)框架中仍可識別其相應(yīng)抗體。CMyc tag已成功應(yīng)用在 Westernblot雜交技術(shù)、免疫沉淀和流式細胞計量術(shù)中, 可用于檢測重組蛋白質(zhì)在靶細胞中的表達。eGFP/eCFP/eYFP/mCherry分別是增強型綠色熒光蛋白/增強型黃綠色熒光蛋白/增強型黃綠色熒光蛋白/單體紅色熒光蛋白,具有不同的激發(fā)波長發(fā)射波長為，均由野生型熒光蛋白通過氨基酸突變和密碼子優(yōu)化而來。就eGFP而言，相對于GFP，其熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。同時載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。mCherry是從DsRed演化來的性能最好的一個單體紅色熒光蛋白，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實現(xiàn)多色標(biāo)記體內(nèi)、外實驗表明，mCherry在N端和C端融合外源蛋白時，熒光蛋白活性和被融合的目標(biāo)蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標(biāo)簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽為活細胞探針。，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。、高靈敏度檢測，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP 表達標(biāo)簽被廣泛地應(yīng)用于基團表達調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。，研究病毒和宿主細胞之間更有得天獨厚的優(yōu)勢。如用mRFP或mCherry標(biāo)記HIV病毒顆粒，研究H1V和宿主細胞問的相互作用以及HIV侵染宿主細胞的過程．用mRFP標(biāo)記慢病毒顆粒，研究慢病毒在小鼠體內(nèi)的復(fù)制過程等。熒光素酶來源于生物體內(nèi)的熒光素，常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶。這些熒光素酶作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，這種技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（Luciferase Assay）。跟普通融合蛋白標(biāo)簽不同，使用熒光素酶構(gòu)建的報告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究啟動子、miRNA 339。UTR克隆的功能與調(diào)控，因為它們對目的基因的調(diào)控可以是漸變的，而不是簡單的開和關(guān)兩種狀態(tài)。優(yōu)點：靈敏度高，檢測幅度寬；不是哺乳動物細胞內(nèi)源性基因
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