20xx年醫(yī)學專題—常用蛋白標簽(編輯修改稿)
2024-11-17 22:22 本頁面
【文章內容簡介】 這11個氨基酸作為抗原表位表達在不同的蛋白質框架中仍可識別其相應抗體。CMyc tag已成功應用在 Westernblot雜交技術、免疫沉淀和流式細胞計量術中, 可用于檢測重組蛋白質在靶細胞中的表達。eGFP/eCFP/eYFP/mCherry分別是增強型綠色熒光蛋白/增強型黃綠色熒光蛋白/增強型黃綠色熒光蛋白/單體紅色熒光蛋白,具有不同的激發(fā)波長發(fā)射波長為，均由野生型熒光蛋白通過氨基酸突變和密碼子優(yōu)化而來。就eGFP而言，相對于GFP，其熒光強度更強、熒光性質更穩(wěn)定。同時載體中構建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。mCherry是從DsRed演化來的性能最好的一個單體紅色熒光蛋白，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實現(xiàn)多色標記體內、外實驗表明，mCherry在N端和C端融合外源蛋白時，熒光蛋白活性和被融合的目標蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質穩(wěn)定，被譽為活細胞探針。，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。、高靈敏度檢測，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP 表達標簽被廣泛地應用于基團表達調控、轉基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。，研究病毒和宿主細胞之間更有得天獨厚的優(yōu)勢。如用mRFP或mCherry標記HIV病毒顆粒，研究H1V和宿主細胞問的相互作用以及HIV侵染宿主細胞的過程．用mRFP標記慢病毒顆粒，研究慢病毒在小鼠體內的復制過程等。熒光素酶來源于生物體內的熒光素，常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶。這些熒光素酶作為“報告蛋白”被用于分子生物學研究中，這種技術被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（Luciferase Assay）。跟普通融合蛋白標簽不同，使用熒光素酶構建的報告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究啟動子、miRNA 339。UTR克隆的功能與調控，因為它們對目的基因的調控可以是漸變的，而不是簡單的開和關兩種狀態(tài)。優(yōu)點：靈敏度高，檢測幅度寬；不是哺乳動物細胞內源性基因
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