20xx年醫(yī)學(xué)專題—實(shí)體瘤組織單細(xì)胞懸液制備(編輯修改稿)
2024-11-17 22:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 瘤細(xì)胞培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞多為貼壁細(xì)胞，將剛分散的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶后，待45 h后觀察細(xì)胞貼壁情況，此時可更換新的培養(yǎng)基，除去未能貼壁的細(xì)胞碎片及死細(xì)胞。2. 每日觀察細(xì)胞生長增殖情況，待細(xì)胞貼壁密度大于90%時，可用胰酶消化，按1:5比例進(jìn)行傳代到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板上，可根據(jù)需要適當(dāng)調(diào)整接種比例，或者取適量消化后進(jìn)行其他細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。(二) 成纖維細(xì)胞的排除成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細(xì)胞。而且成纖維細(xì)胞常比腫瘤細(xì)胞生長得快，最終能壓制腫瘤細(xì)胞的生長。因此排除成纖維細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。1. 機(jī)械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序?yàn)椋?) 標(biāo)記：鏡下觀察，用記號筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細(xì)胞的部位；2) 刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間；3) 用Hanks液/PBS緩沖液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞；4) 注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至完全除掉為止2. 反復(fù)貼壁法：根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢的特點(diǎn)，并結(jié)合使用不加血清的營養(yǎng)液，把含有兩類細(xì)胞的細(xì)胞懸液反復(fù)貼壁，使兩類細(xì)胞相互分離，操作方法與傳代相同。1) 待細(xì)胞生長達(dá)一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后，Hanks /
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