20xx年醫(yī)學專題—實體瘤組織單細胞懸液制備(編輯修改稿)
2024-11-17 22:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 瘤細胞培養(yǎng)。腫瘤細胞多為貼壁細胞，將剛分散的細胞轉移至培養(yǎng)瓶后，待45 h后觀察細胞貼壁情況，此時可更換新的培養(yǎng)基，除去未能貼壁的細胞碎片及死細胞。2. 每日觀察細胞生長增殖情況，待細胞貼壁密度大于90%時，可用胰酶消化，按1:5比例進行傳代到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板上，可根據(jù)需要適當調(diào)整接種比例，或者取適量消化后進行其他細胞實驗。(二) 成纖維細胞的排除成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。而且成纖維細胞常比腫瘤細胞生長得快，最終能壓制腫瘤細胞的生長。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養(yǎng)中的關鍵。1. 機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序為：1) 標記：鏡下觀察，用記號筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位；2) 刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間；3) 用Hanks液/PBS緩沖液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞；4) 注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至完全除掉為止2. 反復貼壁法：根據(jù)腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點，并結合使用不加血清的營養(yǎng)液，把含有兩類細胞的細胞懸液反復貼壁，使兩類細胞相互分離，操作方法與傳代相同。1) 待細胞生長達一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后，Hanks /
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