20xx年醫(yī)學(xué)專題—第四章--腸道菌群的(編輯修改稿)
2024-11-16 01:00 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 綠等。 抑菌劑的主要作用是抑制其它雜菌，特別是革蘭氏陽性菌的生長。國家標(biāo)準(zhǔn)中LST肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。 抑菌劑雖可抑制樣品中的一些雜菌，而有利于大腸菌群細(xì)菌的生長和挑選，但對大腸菌群中的某些菌株有時(shí)也產(chǎn)生一些抑制作用。,第十九頁，共五十二頁。,檢樣稀釋(XīSH204。),以無菌操作將檢樣25ml(或25g)放于含有225ml滅菌生理鹽水或其它稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨作成1：10的均勻稀釋液。調(diào)pH為6.5～7.5。 用1ml滅菌吸管吸取1：10稀輕液1m1．注入含有9ml滅菌生理鹽水或其它稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻．作1：10的稀釋液。 另取1m1滅菌吸管，按上項(xiàng)操作依次作10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支1m1滅菌吸管： 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況(q237。ngku224。ng)的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管。,第二十頁，共五十二頁。,初發(fā)酵(Fā JI192。O)試驗(yàn),在乳糖發(fā)酵過程中，觀察產(chǎn)氣和產(chǎn)酸兩個(gè)現(xiàn)象。 將待檢樣品接種于LST發(fā)酵管內(nèi)(ɡuǎn n232。i)，接種量在1ml以上者，用雙料LST發(fā)酵管；1m1及1m1以下者，用單料LST發(fā)酵管，每一稀釋度接種3管，置36177。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24177。2小時(shí)，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性。如有產(chǎn)氣者，進(jìn)行分離和鑒定。,第二十一頁，共五十二頁。,第二十二頁，共五十二頁。,LST結(jié)果(JIē GUǒ)判斷,大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以(kěyǐ)使發(fā)酵倒管全部充滿氣體，少者可以(kěyǐ)產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時(shí)，可以(kěyǐ)用手輕輕打動試管。,第二十三頁，共五十二頁。,復(fù)發(fā)酵(Fā JI192。O),第二十四頁，共五十二頁。,大腸菌群最大可能(KěN201。NG)數(shù)檢索表,第二十五頁，共五十二頁。,其它(Q205。Tā),全部為0，報(bào)告為 ＜最低檢出線 如樣品中大腸菌群較少，可加大接種(jiēzh242。ng)量，采取雙料發(fā)酵管,第二十六頁，共五十二頁。,大腸菌群計(jì)數(shù)(J204。 SH217。)第二法——直接計(jì)數(shù)法,CFU 通過(tōnggu242。)數(shù)據(jù)直接求數(shù)學(xué)期望,第二十七頁，共五十二頁。,傾注(QīNGZH217。)培養(yǎng),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)(biāozhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，分別在稀釋的同時(shí)，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。 將涼至46℃結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基（VRBA平板）注入平皿約15～20mL，并轉(zhuǎn)動平皿，混合均勻。同時(shí)將1mL稀釋液（不含樣品）作空白對照。 待瓊脂凝固后，倒入3～4mL VRBA培養(yǎng)基鋪面，培養(yǎng)基凝固后翻轉(zhuǎn)平板，置36177。1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h。,第二十八頁，共五十二頁。,平板(P205。NGBǎN)菌落數(shù)的選擇,選取菌落數(shù)在15～150之間的平板，分別計(jì)數(shù)典型和可疑大腸菌群菌落。 典型菌落為紫紅色，菌落周圍(zhōuw233。i)有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑約為0.5mm。,第二十九頁，共五十二頁。,從VRBA平板上挑取10個(gè)不同(b249。 t243。nɡ)類型的典型和可疑菌落，分別移種于B
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