20xx年醫(yī)學專題—第七章-細胞融合與體細胞雜交61(編輯修改稿)
2024-11-16 00:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 胞。,含有多個核的異核細胞(x236。bāo)合并后形 成的單核細胞稱為合核細胞。,細胞核的合并發(fā)生在有絲分裂過 程中。但是這種有絲分裂只有當 兩個核的DNA合成基本同步時才 能發(fā)生：兩個核同時進行有絲分 裂，形成一個紡錘體，全部染色 體都排列在一個赤道板上，結(jié)果 伴隨著細胞分裂就形成了單核的 子細胞，其細胞核中含有雙親細 胞的染色體。,第十九頁，共六十二頁。,,五 細胞融合方法(fāngfǎ),1.生物(shēngw249。)法,病毒誘導細胞融合：研究最早的細胞融合誘導方法。主要是由于 病毒會與宿主細胞膜直接融合，同時進入兩個細胞就會打破兩個 細胞膜的隔閡，引發(fā)細胞質(zhì)的交流，進而達到細胞融合的目的(m249。d236。)。 原因可能是病毒的磷脂外衣與動物細胞膜相似，病毒外殼上的某 些糖蛋白有促進細胞融合的功能。,仙臺病毒、皰疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等。仙臺病毒（ HAJ）是兩層磷脂組成的外膜包裹著RNA與蛋白質(zhì)的復合體。因 HAJ病毒毒力弱，易被滅活而常采用。,缺點：要提前大量培養(yǎng)病毒，并且滅活后才能作為融合劑使用， 操作繁瑣，而且一旦滅活不充分的話，病毒還可能感染操作者與 親本細胞。因此，目前已經(jīng)很少使用病毒誘導法進行細胞融合。,第二十頁，共六十二頁。,,原理(yu225。nlǐ)與過程,（1）足夠量的病毒顆粒(kēl236。)附著在 細胞膜上起搭橋作用，使細胞 聚集在一起。,（2）通過病毒與原生質(zhì)體或細 胞膜的作用使兩個細胞膜間互 相滲透，胞質(zhì)互相(h249。 xiāng)融合。粘結(jié) 部位質(zhì)膜被破壞，不同細胞間 形成通道，細胞質(zhì)流通并融合 （病毒也隨之進入細胞質(zhì)）。,（3）有絲分裂，細胞核融合， 形成雜種細胞。,第二十一頁，共六十二頁。,2化學法,可以(kěyǐ)采用的化學誘導劑包 括：,NaNO高pH的高濃度Ca2+,離子(l237。zǐ)、聚乙二醇（PEG） 、溶菌酶、明膠、抗體、 植物凝血素伴刀豆球蛋白 A等。,細胞膜電荷平衡被打破(dǎ p242。)。,第二十二頁，共六十二頁。,,（ 1） NaNO3誘導(y242。udǎo)融合,1909年，凱斯特（Kuster）發(fā)現(xiàn)機械分離(fēnl237。)的發(fā)生,了質(zhì)壁分離的洋蔥(y225。ngcōng)表皮細胞原生質(zhì)體在NaNO3溶,液中可以恢復并伴隨著細胞融合。,1972年，卡爾森（Carlson）利用NaNO3誘導融,合了粉蘭煙草和郎氏煙草原生質(zhì)體，培育出世界 第一株體細胞雜種。,NaNO3的鈉離子可以中和原生質(zhì)體表面負電荷， 引起原生質(zhì)體聚集，促進細胞融合。NaNO3對原,生質(zhì)體無損害，但融合效率低，一般小于4%。,第二十三頁，共六十二頁。,,（ 2）高pH的高濃度 Ca2+離子(l237。zǐ)誘導融合,1973年，凱勒（Keller）和梅爾切斯（Melchers） 發(fā)現(xiàn)采用(cǎiy242。ng)強堿性（例如pH10.5）的高濃度鈣離子溶,液（50mmol/LCaCl2?2H2O）在37℃下處理(chǔlǐ)兩個品系,的煙草葉肉原生質(zhì)體，很容易促使融合，融合率可 以達到10%。,鈣離子中和原生質(zhì)體膜或細胞膜表明表面電荷，使 彼此緊密接觸，決定質(zhì)膜的穩(wěn)定性和可塑性；高pH 能改變質(zhì)膜的表面電荷，利于細胞融合。,第二十四頁，共六十二頁。,,（3）PEG誘導(y242。udǎo),聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)是一種(yī zhǒnɡ)多聚化合物,，分子式為H(OHCH2CH2)nOH)。常用(ch225。nɡ y242。nɡ)的PEG平均分子量在,200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以 上者為固體。,PEG分子具有輕微的負極性，可以與具有正極性基團的水 分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物形成氫鍵，在相鄰的原生質(zhì) 體間起到分子橋的作用，使原生質(zhì)體接觸。,當PEG分子被洗脫時，膜電荷發(fā)生紊亂而重新分配。此時 ，一種原生質(zhì)體上帶正電的基團可能與另外一個原生質(zhì) 體中帶負電的基團相連，導致原生質(zhì)體融合。,第二十五頁，共六十二頁。,（ 4）高Ca2+和pH誘導(y242。udǎo)P
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