20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第七章哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞技術(shù)(編輯修改稿)
2025-11-16 00:29 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5個(gè)月的非分化增殖，同時(shí)還保持著分化為滋養(yǎng)層組織及三種胚層組織的能力。這為胚胎干細(xì)胞的臨床應(yīng)用(y236。ngy242。ng)奠定了基礎(chǔ)。,第三十二頁(yè)，共七十頁(yè)。,1999年12月，美國(guó)科學(xué)家在《美國(guó)科學(xué)院院刊》報(bào)告說(shuō)，小鼠肌肉組織(jī r242。u zǔ zhī)的成體干細(xì)胞可以“橫向分化”為血液細(xì)胞。隨后，世界各國(guó)的科學(xué)家相繼證實(shí)，成體干細(xì)胞包括人類(lèi)的成體干細(xì)胞具有可塑性。 2000年5月，日本啟動(dòng)“千年世紀(jì)工程”，以干細(xì)胞工程為核心技術(shù)的再生醫(yī)療成為這項(xiàng)工程的四大重點(diǎn)之一，第一年度投資金額達(dá)108億日元。,第三十三頁(yè)，共七十頁(yè)。,2001年1月，英國(guó)議會(huì)上院通過(guò)法案，允許科學(xué)家克隆人類(lèi)早期胚胎，并利用它進(jìn)行醫(yī)療研究。 2001年4月，美國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，從病人臀部和大腿處抽取的脂肪中，含有大量類(lèi)似干細(xì)胞的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以發(fā)育成健康的軟骨(ruǎngǔ)和肌肉等。,第三十四頁(yè)，共七十頁(yè)。,2003年，美國(guó)衛(wèi)生獨(dú)立研究院（National Institutes of Health，NIH）華裔科學(xué)家施松濤等人首次發(fā)現(xiàn)牙齒間質(zhì)存在干細(xì)胞。 2005年報(bào)出干細(xì)胞研究領(lǐng)域乃至全球?qū)W術(shù)(xu233。sh249。)界一大學(xué)術(shù)(xu233。sh249。)丑聞：2004及2005年韓國(guó)漢城大學(xué)教授黃禹錫有關(guān)干細(xì)胞研究的論文兩次榮登Science雜志，結(jié)果經(jīng)各方查證證實(shí)其論文數(shù)據(jù)存在造假現(xiàn)象，2006年Science雜志宣布撤回這兩篇論文。,第三十五頁(yè)，共七十頁(yè)。,2006年，日本科學(xué)家山中亞彌等成功誘導(dǎo)出鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced Pluripotent Stem Cell， iPS細(xì)胞），此項(xiàng)研究成功將干細(xì)胞研究擴(kuò)充到一個(gè)新的領(lǐng)域：重編程！ 2007年，iPS研究取得巨大進(jìn)展：山中亞彌等人和湯姆森帶領(lǐng)下的華裔科學(xué)家俞君英等人分別(fēnbi233。)在Cell及Science發(fā)表論文宣布成功利用人類(lèi)上皮細(xì)胞誘導(dǎo)出iPS細(xì)胞。,第三十六頁(yè)，共七十頁(yè)。,2008年，美國(guó)科學(xué)家解析了microRNAs在干細(xì)胞發(fā)育及分化中的調(diào)控作用，為干細(xì)胞日后的研究提供了非常重要的參考資料。 2009年3月，美國(guó)白頭研究所（Whitehead Institute）科學(xué)家在成功誘導(dǎo)iPS細(xì)胞(x236。bāo)后，巧妙的將誘導(dǎo)iPS時(shí)帶入細(xì)胞的基因去除，大大降低了細(xì)胞癌變風(fēng)險(xiǎn)。 2009年3月，湯姆森和俞君英帶領(lǐng)的研究小組在iPS研究方面又邁進(jìn)一大步，他們利用質(zhì)粒作為誘導(dǎo)iPS基因的載體進(jìn)行誘導(dǎo)iPS細(xì)胞后，隨著細(xì)胞分裂丟失質(zhì)粒，可以得到純凈無(wú)外源DNA的iPS細(xì)胞，在iPS細(xì)胞應(yīng)用安全性方面又進(jìn)一步。,第三十七頁(yè)，共七十頁(yè)。,四 .胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)(p233。iyǎng)基本程序,1.胚胎干細(xì)胞的分離 目前ES細(xì)胞主要有兩個(gè)來(lái)源，即胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和生殖嵴中的原始生殖細(xì)胞，前者更為常用。 囊胚：盡量選擇體內(nèi)受精的胚胎分離ES細(xì)胞；對(duì)于相同來(lái)源的胚胎選擇色澤透亮，ICM明顯的胚胎。 胎兒性腺脊：經(jīng)酶消化后，可直接培養(yǎng)在分化抑制培養(yǎng)體系中，一般7d傳代一次，直至出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)均一的克隆細(xì)胞團(tuán)，挑選(tiāoxuǎn)后進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。,第三十八頁(yè)，共七十頁(yè)。,小鼠多用3－4天的胚泡或2－3天的桑椹(sānɡ zhēn)胚，,豬取8－10天的胚泡，,綿羊(mi225。ny225。ng)取8－9天的胚泡，,人和牛取7－8天的胚泡。,第三十九頁(yè)，共七十頁(yè)。,第四十頁(yè)，共七十頁(yè)。,從胚泡中分離出細(xì)胞團(tuán)的方法主要免疫外科學(xué)方法，顯微外科學(xué)方法和組織培養(yǎng)法等。 其中組織培養(yǎng)法是將胚泡接種在飼養(yǎng)層上，模擬(m243。nǐ)體內(nèi)胚泡的著床，更接近自然發(fā)育過(guò)程，較易獲得胚胎干細(xì)胞集落。,第四十一頁(yè)，共七十頁(yè)。,（1）免疫外科學(xué)方法：該法的原理是利用囊胚腔對(duì)抗體的不通透性，通過(guò)抗體、補(bǔ)體結(jié)合對(duì)細(xì)胞的作用，去除滋養(yǎng)層細(xì)胞，保留ICM細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。 以小鼠為例，將體外培養(yǎng)的小鼠胚泡去除透明帶后，經(jīng)抗小鼠脾細(xì)胞抗血清作用一定時(shí)間后再移入含新鮮豚鼠血清的培養(yǎng)液中處理，這樣滋養(yǎng)層細(xì)胞即被破壞，去除死去的滋養(yǎng)層細(xì)胞即得ICM，將ICM離散成卵裂球即可接種培養(yǎng)。 此法較為簡(jiǎn)單，且去除滋養(yǎng)層細(xì)胞較徹底(ch232。dǐ)，最為常用。,第四十二頁(yè)，共七十頁(yè)。,（2）顯微外科學(xué)方法：小鼠受精后34天，由子宮沖取胚泡，利用顯微操作系統(tǒng)直接從胚泡中吸出ICM細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng). （3）組織培養(yǎng)法:在小鼠受精2.5天后切除卵巢，給予外源激素，使胚胎繼續(xù)發(fā)育，但延緩著床，46天后，從子宮中取胚泡進(jìn)行培養(yǎng)。滋養(yǎng)層細(xì)胞生長(zhǎng)并在培養(yǎng)皿底壁上鋪展(pūzhǎn)，而ICM細(xì)胞增殖，垂直向上生長(zhǎng)，形成卵圓柱狀結(jié)構(gòu)，在顯微鏡下用玻璃針挑出這種柱狀結(jié)構(gòu)，消化傳代。,第四十三頁(yè)，共七十頁(yè)。,2.選擇抑制細(xì)胞分化的培養(yǎng)體系 由于ES細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中極易分化和失去正常二倍體核型，進(jìn)而失去全能性或多能性和喪失形成嵌合體動(dòng)物的能力，因此需特殊的培養(yǎng)條件阻止其分化，以確保維持其全能性或多能性。目前常用的抑制細(xì)胞分化的
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