20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第七章哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞技術(shù)-在線(xiàn)瀏覽
2024-11-16 00:29本頁(yè)面
【正文】 過(guò)交配可以分離出帶有ES細(xì)胞遺傳性狀的個(gè)體，這是ES細(xì)胞具有種系傳遞能力的一種證明。,ES細(xì)胞自我更新的分子機(jī)理 LIF（白血病抑制(y236。)因子）:ES細(xì)胞表面的有一復(fù)合受體，由低親和性的LIF受體和普通亞基gp130構(gòu)成異源二聚體，LIF與受體結(jié)合后激活Jak酶，通過(guò)對(duì)STAT3的磷酸化激活維持細(xì)胞自我更新的基因。,（2）轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子oct4： oct4是ES細(xì)胞維持多能性和進(jìn)入分化的開(kāi)關(guān)，是DNA特異結(jié)合蛋白，通過(guò)激活或者移植靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，維持ES細(xì)胞的自我更新。)量在50~150%，才能實(shí)現(xiàn)自我更新和維持多能性。,第十九頁(yè)，共七十頁(yè)。 q249。 SHP2和ERK對(duì)STAT3功能有負(fù)調(diào)控作用，抑制其信號(hào)傳導(dǎo)。,二、胚胎(pēitāi)干細(xì)胞研究的意義,1.ES細(xì)胞是研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生發(fā)育(fāy249。,2.是研究細(xì)胞分化的理想手段 ES細(xì)胞僅在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或添加白血病抑制因子或白細(xì)胞介素6家族的培養(yǎng)液中維持不分化狀態(tài)，當(dāng)培養(yǎng)液中添加分化誘導(dǎo)(y242。udǎo)分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，DMSO誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞等。,第二十二頁(yè)，共七十頁(yè)。,3.研究基因功能的首選細(xì)胞 由于ES細(xì)胞具有穩(wěn)定(wěnd236。 用遺傳修飾的ES細(xì)胞生產(chǎn)嵌合體或用細(xì)胞核移植技術(shù)獲得的克隆后代，通過(guò)觀察后代的表型變化，可探明未知基因的生物學(xué)功能和表達(dá)調(diào)控規(guī)律。,4.是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要方法之一 用外源基因轉(zhuǎn)染后，篩選陽(yáng)性細(xì)胞，然后注入到囊胚腔或其他卵裂球聚合獲得嵌合體后代，用轉(zhuǎn)染的ES細(xì)胞分化(fēnhu224。 也可把轉(zhuǎn)化后的ES細(xì)胞作為供體核，用細(xì)胞核移植技術(shù)直接獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。,第二十六頁(yè)，共七十頁(yè)。,人類(lèi)面臨的大多數(shù)醫(yī)學(xué)難題,如心血管疾病、自身免疫性疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松、癌癥(225。nɡ)、老年性癡呆、帕金森病、嚴(yán)重?zé)齻?、脊髓損傷和遺傳性缺陷等疾病,組織(zǔzhī)工程學(xué)、功能基因組學(xué)和 蛋白質(zhì)組學(xué)、發(fā)育生物學(xué),新藥開(kāi)發(fā)與藥效、毒性(dnɡ)評(píng)估等,第二十八頁(yè)，共七十頁(yè)。uyES細(xì)胞在正常的培養(yǎng)環(huán)境中能維持穩(wěn)定的核型，是研究致癌物質(zhì)誘發(fā)細(xì)胞癌變機(jī)理的理想材料； 在研究新藥過(guò)程中，需要對(duì)藥物的作用機(jī)理和藥效進(jìn)行研究，ES細(xì)胞在體外能分化多種體細(xì)胞，可以直接作為實(shí)驗(yàn)材料來(lái)篩選新藥，可縮短新藥開(kāi)發(fā)周期，且治療的針對(duì)性強(qiáng)。,三、胚胎干細(xì)胞研究(y225。njǐng)的生命科學(xué)科研究領(lǐng)域； 1999年干細(xì)胞研究被美國(guó)《SCIENCE》雜志評(píng)為1999年度世界十大科學(xué)之冠； 2000年干細(xì)胞研究再次被《SCIENCE》雜志評(píng)為該年度世界十大科學(xué)成就之一。,1981年英國(guó)劍橋大學(xué)的Evans和Kaufman用延緩著床的胚泡的胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)ICM （inner cells mass)獲得鼠的ES細(xì)胞； 同年(t243。n)美國(guó)的Maryin用條件培養(yǎng)基獲得鼠的ES細(xì)胞。,第三十一頁(yè)，共七十頁(yè)。 他們把胚胎干細(xì)胞與小鼠的骨髓間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行了共培養(yǎng)。這為胚胎干細(xì)胞的臨床應(yīng)用(y236。ng)奠定了基礎(chǔ)。,1999年12月，美國(guó)科學(xué)家在《美國(guó)科學(xué)院院刊》報(bào)告說(shuō)，小鼠肌肉組織(jī r242。隨后，世界各國(guó)的科學(xué)家相繼證實(shí)，成體干細(xì)胞包括人類(lèi)的成體干細(xì)胞具有可塑性。,第三十三頁(yè)，共七十頁(yè)。 2001年4月，美國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，從病人臀部和大腿處抽取的脂肪中，含有大量類(lèi)似干細(xì)胞的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以發(fā)育成健康的軟骨(ruǎngǔ)和肌肉等。,2003年，美國(guó)衛(wèi)生獨(dú)立研究院（National Institutes of Health，NIH）華裔科學(xué)家施松濤等人首次發(fā)現(xiàn)牙齒間質(zhì)存在干細(xì)胞。sh249。sh249。,第三十五頁(yè)，共七十頁(yè)。)在Cell及Science發(fā)表論文宣布成功利用人類(lèi)上皮細(xì)胞誘導(dǎo)出iPS細(xì)胞。,2008年，美國(guó)科學(xué)家解析了microRNAs在干細(xì)胞發(fā)育及分化中的調(diào)控作用，為干細(xì)胞日后的研究提供了非常重要的參考資料。bāo)后，巧妙的將誘導(dǎo)iPS時(shí)帶入細(xì)胞的基因去除，大大降低了細(xì)胞癌變風(fēng)險(xiǎn)。,第三十七頁(yè)，共七十頁(yè)。iyǎng)基本程序,1.胚胎干細(xì)胞的分離 目前ES細(xì)胞主要有兩個(gè)來(lái)源，即胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和生殖嵴中的原始生殖細(xì)胞，前者更為常用。 胎兒性腺脊：經(jīng)酶消化后，可直接培養(yǎng)在分化抑制培養(yǎng)體系中，一般7d傳代一次，直至出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)均一的克隆細(xì)胞團(tuán)，挑選(tiāoxuǎn)后進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。,小鼠多用3－4天的胚泡或2－3天的桑椹(sānɡ zhēn)胚，,豬取8－10天的胚泡，,綿羊(mi225。ng)取8－9天的胚泡，,人和牛取7－8天的胚泡。,第四十頁(yè)，共七十頁(yè)。 其中組織培養(yǎng)法是將胚泡接種在飼養(yǎng)層上，模擬(m243。,第四十一頁(yè)，共七十頁(yè)。 以小鼠為例，將體外培養(yǎng)的小鼠胚泡去除透明帶后，經(jīng)抗小鼠脾細(xì)胞抗血清作用一定時(shí)間后再移入含新鮮豚鼠血清的培養(yǎng)液中處理，這樣滋養(yǎng)層細(xì)胞即被破壞，去除死去的滋養(yǎng)層細(xì)胞即得ICM，將ICM離散成卵裂球即可接種培養(yǎng)。dǐ)，最為常用。,（2）顯微外科學(xué)方法：小
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