哺乳動物細(xì)胞克隆(1)-在線瀏覽
2025-03-10 18:00本頁面
【正文】 6月 06日 1克隆馬 意大利克雷莫納的再生技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的研究人員于 2022年 5月底克隆出了第一只馱馬，這意味著馬也加入了貓、山羊、母牛、兔子以及綿羊等被人類克隆過的動物行列。 1克隆鹿 2022年 5月 23日，美國德州農(nóng)業(yè)機(jī)械大學(xué)克隆出世界第一只白尾鹿，名字叫 “ 杜威（ Dewey） ” 。 1克隆狗 2022年，韓國漢城國立大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院的科學(xué)家率先在世界上首次成功進(jìn)行了狗的克隆。 兩只克隆狼的名字分別為Snuwolf和 Snuwolfy。 治療性克隆 動物模型 器官移植 瀕危動物 轉(zhuǎn)基因動物乳腺生物反應(yīng)器 基礎(chǔ)研究 遺傳育種 克 隆 （ 2）克隆動物研究意義 產(chǎn)生遺傳相同個體 (克?。┑脑砼c方法 ? 胚胎分割 ? 細(xì)胞核移植 （包括連續(xù)細(xì)胞核移植 或繼代核移植或重復(fù)克隆）。 胚胎分割法 “多胚胎復(fù)制 ” 的原理與方法 ? 定義：著床的早期胚胎經(jīng)顯微手術(shù)后，分割為二、四、六等多等份，給每個受體子宮內(nèi)移植一塊分割物而妊娠產(chǎn)仔，這樣由一個胚胎產(chǎn)生出多個遺傳性能完全一樣的后代個體。 隨著分割次數(shù)增加，發(fā)育成完整個體的能力越差。去掉任何一個分裂球，就不能發(fā)育成為一個完整胚胎。 特點(diǎn) ： ?第一 ,去掉早期胚胎的一半，其余部分可以調(diào)整發(fā)育方向，仍可形成一個完整胚胎。 ?第三，調(diào)整發(fā)育分化能力隨胚胎發(fā)育的進(jìn)行逐漸減弱，組織發(fā)育方向變得愈來愈固定。 ? 研究表明，哺乳動物 從早期分裂階段到原腸胚胚胎都能夠復(fù)制 。 ? 如：分割胚的 胚細(xì)胞只負(fù)責(zé)構(gòu)成胚盤，胚盤的正常發(fā)育需要滋養(yǎng)層細(xì)胞。 （ 1）卵裂球分離培養(yǎng)法 ? 用吸管固定胚胎，用玻璃針自上而下切開透明帶使其形成一個切口，用微吸管自切口處伸入透明帶吸住半數(shù)卵裂球，等分胚胎為兩部分。 ? 瓊脂包埋后，移入受體輸卵管。 (2)桑葚胚及其以后階段的直接分割法 ? 這一階段的胚胎分割時，可用固定吸管固定胚胎或不進(jìn)行固定而直接分割。否則，由于透明帶的韌性，在分割時一部分卵裂球會受到機(jī)械損傷。 圖 81 分割針垂直分割胚胎示意圖 圖 82 半胚裝入透明帶示意圖 圖 83 “分割刀 ” 水平分割胚胎示意圖 細(xì)胞核移植技術(shù) ? 細(xì)胞核移植 （ nuclear transfer） 技術(shù)是目前最常用的、科技成分含量高的動物克隆技術(shù)，是動物克隆技術(shù)的核心。 (1)原理 ?胚胎細(xì)胞 核移植到成熟卵母細(xì)胞中，可因其特殊因子的作用，使植入的核基因表達(dá)被重新編排或調(diào)整，將 “ 發(fā)育鐘 ”撥回到受精狀態(tài) ，即恢復(fù)全能性。 ?胎兒成纖維細(xì)胞和成年體細(xì)胞 等分化細(xì)胞在經(jīng)過 “ 去分化 ” 培養(yǎng)后，可以恢復(fù)其全能性。 ? 研究表明，以 MⅡ 期卵母細(xì)胞胞質(zhì)為核移植的受體細(xì)胞最好 ,目前應(yīng)用也最普遍。 ?① 受體胞質(zhì)的準(zhǔn)備 圖 84 核受體成熟卵去核過程示意圖 第二 ,受體卵去核 ② 核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備 ? 核供體細(xì)胞主要有兩大類三種：胚胎細(xì)胞 (胚胎細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞 )和體細(xì)胞 。 ? 方法 ：消化掉卵裂球外面的黏蛋白層和透明帶，用細(xì)玻璃管吹打胚胎細(xì)胞，使其分散成單細(xì)胞后進(jìn)行核移植。這種技術(shù)稱為 “ 胚胎繼代克隆 ”（ multiple generational embryo cloning）或 胚胎再克隆 （ embryo recloning）。 ? 第二 ,胚胎干細(xì)胞核移植 ： 胚胎干細(xì)胞 是將早期胚胎或胎兒的原始生殖細(xì)胞經(jīng)體外抑制分化培養(yǎng)后，篩選出的具有發(fā)育全能性的細(xì)胞 。 利用胚胎干細(xì)胞核移植能生產(chǎn)更多的動物個體。 ? 第三 ,體細(xì)胞核移植 ：用已高度分化的細(xì)胞作核供體。 成年體細(xì)胞 ： 卵丘細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞以及皮膚成纖維細(xì)胞 等。 ? ：用一個外徑 5～ 10μm 的注核針吸取卵母細(xì)胞核后，刺破卵質(zhì)膜，將核直接注射到受體細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的方法（見下圖）。 圖 4417直接注射法制作重組胚過程示意圖 圖 8－ 5 直接注射法制作重組胚過程示意圖 (4)核移植重組胚的激活 ?激活是胚胎發(fā)育所必需的。 ?原理：通過電刺激、鈣離子載體等方法，使卵母細(xì)胞從 MII中解放出來，并轉(zhuǎn)入“ 受精 ” 狀態(tài)。 ?(5)重組胚的體內(nèi)或體外培養(yǎng) ： 將融合和激活的重組胚移入中間受體作體內(nèi)或體培養(yǎng)，觀察重組胚的發(fā)育率。大鼠、小鼠和兔的核移植胚多作 體外培養(yǎng) ，發(fā)育至桑葚胚或囊胚。
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