哺乳動物細胞克隆(1)(參考版)
2025-01-24 18:00本頁面
【正文】 第八章 習 題 “ 克隆 ” ? ？ 幾類 ? ？ “ 多莉 ” 的技術路線及成功的根本原因？ ，受體細胞為什么一般均選用卵母細胞 ? 。利用轉基因細胞或基因敲除細胞作為核供體，進行動物克隆，作為未來生物制藥工廠； ? 第三 ,治療性克隆是一個重要的研究領域 。對供體細胞核與受體細胞質之間的相互作用關系進行深入研究，從分子水平上闡明已分化的體細胞如何在受體卵母細胞質中去分化而重新獲得全能性。 ? （ 3）克隆技術的應用 ，利用克隆技術 “ 復制 ” 優(yōu)良品種家畜，并逐步推動其實現(xiàn)產業(yè)化，直接為市場和經濟發(fā)展服務； ? （ 4）拯救瀕危動物， 為有效保護提供一種新的思路和方法。 ? (3)違背了 “ 平等原則 ” 在克隆活動中 ， 存在一個設計者 （ 操作克隆的人 ） 與被設計者 （ 被克隆出的人 ） 的關系 ， 本質上違背了人與人的 “ 平等原則 ” 。 在家畜不重要 ， 可以殺掉 ， 人怎么辦 ？ ? (2) 違背了 “ 自主原則 ” 新生命的產生是兩性配子隨機結合的結果 。說明老齡細胞經過克隆后可以在遺傳和生理上轉化成全新的新生細胞。 (2) 生育能力 楊向忠（ 1999）利用 1頭 13歲母牛的耳朵皮膚細胞克隆牛誕生 (在人類相當于80歲 ) 。這就意味著“ 多莉 ” 可能比普通羊衰老得更早。 克隆動物的生命力與生育力 (1) 早衰問題 1995年 5月，克隆 “ 多莉 ” 羊的英國 PPL醫(yī)療公司和羅斯林研究所宣布， “ 多莉 ” 的染色體端粒長度比同年齡普通綿羊短20%。 核移植中線粒體可能的三種命運 ? 用線粒體細胞色素 B 基因特異的引物擴增體外培養(yǎng)的獼猴 兔異種克隆胚胎中的線粒體 DNA，PCR產物經測序證明， 細胞至囊胚期胚胎中同時存在獼猴體細胞與兔卵胞質來源的線粒體。 ?重構胚或核移植個體中以供體類型的線粒體占主導 。 ?兩種來源的線粒體可同時存在 。 線粒體與核移植的關系 ?只剩下受體類型的線粒體 。核－質之間協(xié)調互作是供核完成重編程并指導全程發(fā)育的先決條件。 ? 人們認為這與體細胞在受體卵母細胞中全能性的恢復有關。 ? 其次，用微衛(wèi)星 DNA技術和 DNA指紋分析冷凍的供體乳腺組織、體外培養(yǎng)的乳腺細胞系及多莉羊的血樣后，證明產生多莉羊的供體來自高度分化的乳腺細胞 動物克隆存在的問題 ? 動物克隆技術的不完善性 。 （ 2）驗證 ? 首先，從生理上講，由循環(huán)系統(tǒng)得到的胚胎可能性很小。 以此計算體細胞移植的成功率 ， 總體是 1/434， 即成功率為 %。 對 “ 多利 ” 羊身份的質疑及最后的定論 (1)質疑 ： 第一 ， 成功率在低 ， 具有偶然性 。 多莉 ” 羊獨特點 及 成功原因 (1)獨特點 : 核供體是高度分化了的體細胞 乳腺上皮細胞 ， 而非早期胚胎細胞 。 ?(4)重構胚的孵育與移植 新的卵細胞在體外培養(yǎng)（或植入到另一只羊的結扎的輸卵管內）， 6天后發(fā)育為桑椹期胚胎或囊胚（ 8～ 16細胞期），再移植給假孕母羊的子宮內。 ?(3)重構胚的融合 將核供體細胞注入去核的卵母細胞的卵周隙。 ? (2)獲取卵母細胞 給另一只母羊 B（ 蘇格蘭黑面綿羊 ）注射促性腺激素 Gn促使其排卵 ， 取其未受精卵并去核 。被譽為二十世紀生物學領域的突破性成就。 ?(6) 胚胎移植 將合格重組胚胎移植至假孕母體至發(fā)育到期產出。羊、牛、豬的核移植胚常采用 體內培養(yǎng)方法 獲得桑葚胚和囊胚。電融合時的電脈沖也施加了激活重組胚的作用。受精和人工方法均能激活卵母細胞。 ? ：把供體細胞核注射在透明帶與卵母細胞之間的卵周隙中，核移植后用電刺激進行細胞融合，形成重組胚。 受體 受體 體細胞供體 核供體 再稀釋沉淀，分散沉淀細胞 體細胞核移植方法： 將組織切成碎片 消化、低速離心（ 1 000r/min） 取上清，中速離心（ 3 000r/min），獲沉淀的細胞核 獲得單個體細胞，在 37℃ 、 5%CO2下培養(yǎng)，備用 1 2 3 4 5 (3)核移植胚的重構（核質融合） ?按照供體核植入受體卵的部位，將細胞核移植分為兩種：即胞質內注射和透明帶下注射。包括： 胎兒體細胞 ：由妊娠早期胎兒組織分離、克隆以及傳代培養(yǎng)的 胎兒成纖維細胞 。但目前僅在小鼠分離克隆出胚胎干細胞系并成功克隆出成體鼠。 ? 核移植方
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