20xx年醫(yī)學(xué)專題—第四章-動物干細胞-在線瀏覽
2024-11-16 01:00本頁面
【正文】 g)干細胞 肝臟干細胞 皮膚干細胞 肌肉干細胞等,第十四頁，共七十四頁。)且不分化的胚胎干細胞系的技術(shù)稱為胚胎干細胞的建系。,二、胚胎(pēitāi)干細胞的建系,主要步驟包括： 1. 培養(yǎng)(p233。,1. 培養(yǎng)(p233。)特性和多能性。 為了阻斷飼養(yǎng)層細胞的分裂，而不影響其分泌蛋白的產(chǎn)生，通常采用γ射線或絲裂霉素C處理之。,培養(yǎng)基的準(zhǔn)備： 用DMEM（高糖）培養(yǎng)液，其中胎牛血清的濃度和質(zhì)量很重要，還要加非必須(b236。 常采用添加LIF等抑制ESC的分化潛能；添加EGF等生長因子來促進ESC的增殖。,LIF抑止(y236。)相應(yīng)蛋白抑止ESC的分化,第十九頁，共七十四頁。 3. ICM的獲取 1）直接分離法：囊胚于飼養(yǎng)層上自行(z236。ng)發(fā)育成孵化囊胚，待ICM擴大增殖時挑取。 2）免疫分離法：鏈霉蛋白酶去除囊胚晚期胚泡ZP，依次轉(zhuǎn)移至補體滅活和未滅活的抗血清中，去除滋胚層細胞后，吸取ICM，移至飼養(yǎng)層培養(yǎng)。,4. ICM的離散(l237。n) 胰蛋白酶消化即可離散ICM。,三、胚胎(pēitāi)干細胞的應(yīng)用,第二十二頁，共七十四頁。,第二十四頁，共七十四頁。udǎo)增殖或分化； 能參與胎兒所有組織的發(fā)育過程；,第二十五頁，共七十四頁。zhēng) 體積小、核大，有一個或多個核仁； 胚胎干細胞克隆緊密堆積，細胞之間無明顯的界限，細胞克隆有一定形狀規(guī)律。,第二十七頁，共七十四頁。n)標(biāo)志,第二十八頁，共七十四頁。 Otc4基因只能在胚胎中才能得到完全表達，而在成體(ch233。這就意味著克隆人技術(shù)的第一步就存在很大問題。,第二十九頁，共七十四頁。nd236。ngt224。 2. 核型分析： 二倍體核型，染色體受損情況等。,3. ESC特異性表面抗原表達的鑒定： 小鼠ESC以SSEA1為主，人以SSEASSEA4為主。 4. 端粒酶活性鑒定： 端粒長度及端粒酶活性檢測。ngl236。,改變細胞的培養(yǎng)條件: 改變細胞的培養(yǎng)條件是ES細胞定向分化的基本策略,常用的方法有:與輔助細胞共培養(yǎng)。添加生長因子、化學(xué)誘導(dǎo)劑等。 體內(nèi)定向分化,使ES 細胞多數(shù)分化為該組織特異性的細胞。)的方法,第三十二頁，共七十四頁。u)細胞 TGFB1, VEGF, bFGF 胚胎干細胞－－－－－－－－－－－－－－－?血管和內(nèi)皮細胞 RA+胰島素+T3 胚胎干細胞－－－－－－－－－－－－－－－?脂肪細胞 BMP2, BMP4 胚胎干細胞－－－－－－－－－－－－－－－?軟骨細胞 地塞米松，磷酸甘油 胚胎干細胞－－－－－－－－－－－－－－－?骨細胞 基因轉(zhuǎn)染 胚胎干細胞－－－－－－－－－－－－－－－?胰島素分泌細胞,第三十三頁，共七十四頁。,人胚胎(pēitāi)干細胞注射至免疫缺陷小鼠的后腿肌肉中形成的各種組織： （a）腸樣結(jié)構(gòu)；(b)神經(jīng)上皮花結(jié)；(c）骨骼；(d)軟骨 ；(e)橫紋肌；(f)腎。,A.小鼠成纖維飼養(yǎng)細胞上培養(yǎng)8天后的ICM（標(biāo)尺＝100um） B.ICM中分離出的H9細胞系（標(biāo)尺＝100um） C. H9細胞系（標(biāo)尺＝50um） D.在無小鼠胚胎成纖維細胞，但有LIF（20ng/ml）的條件(ti225。n)下培養(yǎng)5d后，H9細胞發(fā)生分化（標(biāo)尺＝100um）,第三十六頁，共七十四頁。bāo)潛能的干細胞(x236。 生物學(xué)特征： 慢周期
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