7新4es胚胎干細(xì)胞-在線瀏覽
2024-10-05 20:55本頁面
【正文】 ? ③ 臍帶血 ,可以提供專能干細(xì)胞 。 第十二頁，共七十六頁。 ES細(xì)胞可不斷保持增殖而不分化且在連續(xù)培養(yǎng)后仍能具有發(fā)育成三個胚層的潛能。 第十三頁，共七十六頁。其實質(zhì)是細(xì)胞基因組中決定蛋白質(zhì)編碼的所有基因按一定的時空順序依次表達(dá)。 第十四頁，共七十六頁。如果 ES細(xì)胞能和去核的細(xì)胞融合發(fā)育成重構(gòu)胚，而且經(jīng)過胚胎移植，重構(gòu)胚能發(fā)育形成個體，那么說明 ES細(xì)胞具有全能性。重構(gòu)胚經(jīng)過胚胎移植，有活的羔羊產(chǎn)生，證明了綿羊的類 ES細(xì)胞具有發(fā)育全能性。 ES細(xì)胞研究開展史 ? 1981年，英國劍橋大學(xué)的 Evans和 Kaufman用囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán) (ICM)建立小鼠 ES細(xì)胞系 ? 1998年美國 Thomson從人的體外受精囊胚中別離得到了 ES細(xì)胞。 ? 人 ES細(xì)胞的別離成功給人類的基因治療和器官移植打下了根底。 第十六頁，共七十六頁。 2024年 3月，美國麻省理工學(xué)院的科學(xué)家宣布，他們首次利用人體胚胎干細(xì)胞培育出毛細(xì)血管，證明了胚胎干細(xì)胞技術(shù)在治療心血管疾病等領(lǐng)域的應(yīng)用潛力。 第十七頁，共七十六頁。 胚胎干細(xì)胞系的建立過程 分離囊胚的內(nèi)細(xì)胞群 與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)， ES 細(xì)胞非分化增殖 分離胚胎生殖腺脊細(xì)胞 ? 胚胎干細(xì)胞的鑒定 ? 定向誘導(dǎo)分化 ? 成體干細(xì)胞 ? 功能細(xì)胞 概述 第十九頁，共七十六頁。 第二十一頁，共七十六頁。 培養(yǎng)條件： (1) 特殊的培養(yǎng)液：用 DMEM培養(yǎng)液，其中胎牛血清的濃度和質(zhì)量很重要，加非必須氨基酸； β巰基乙醇。 (3) 必須參加 LIF，抑制細(xì)胞分化。 早期胚胎及 PGCs的培養(yǎng) ? 將早期胚胎或 PGCs置于飼養(yǎng)層或條件培養(yǎng)基上，在5%CO 37－ 39度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)液中可添加多種細(xì)胞因子或分化抑制物，如 . 3巰基乙醇等。 傳 代 ? 進(jìn)行體外培養(yǎng)時，當(dāng) ICM增殖后或 PGCs出現(xiàn) ES樣克隆后即可傳代。豬類ESC每 20h倍增一次 。牛類 ESC每 18－ 24h倍增一次。 第二十五頁，共七十六頁。 〔 2〕細(xì)胞功能 〔 3〕細(xì)胞外表的特殊標(biāo)志： AKP陽性 〔 4〕細(xì)胞內(nèi)特異基因的表達(dá) 第二十六頁，共七十六頁。 胚胎干細(xì)胞檢測指標(biāo) (1) 細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性高 (2) 端粒酶活性高 (3) 不被 Hoechst33342 和 Rhodamine123染色 (4) 細(xì)胞膜外表有特殊的標(biāo)記： SSEA3, SSEA4, TRA160, TRA181。 ICM細(xì)胞 EG細(xì)胞 來源 附置前早期胚胎 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 早期胎兒生殖嵴 原始生殖細(xì)胞 形態(tài)學(xué) 直徑一般為 12～15μm 直徑一般 15～18μm 胰島素樣生長因子受體 (Insulinlikereceptor,Igf2r)基因甲基化狀態(tài) 印記基因 Igf2r包含 1個母系甲基化位點和 1個父系非甲基化位點 印記基因 Igf2r兩個位點均處于非甲基化狀態(tài) 體內(nèi)分化 形成畸胎瘤 不形成 6. 兩種來源的 ES細(xì)胞的區(qū)別 第二十九頁，共七十六頁。 第三十一頁，共七十六頁。 四、 ES細(xì)胞的應(yīng)用前景 ? 胚胎干細(xì)胞〔 ES〕成為當(dāng)今生命科學(xué)和生物技術(shù)研究的熱點。 ? 干細(xì)胞是未分化的原始細(xì)胞。 第三十三頁，共七十六頁。 第三十四頁，共七十六頁。 在進(jìn)行 ES細(xì)胞建系和定向分化的同時 ,以 ES細(xì)胞為材料，在核移植、嵌合體、轉(zhuǎn)基因動物研究等方面也進(jìn)行了廣泛的嘗試 ,已經(jīng)充分表達(dá)出 ES細(xì)胞在加快良種家畜繁育、生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物、哺乳動物發(fā)育模型、基因和細(xì)胞治療等方面有著廣闊的應(yīng)用前景。 近幾年來，胚胎工程技術(shù)、基因工程技術(shù)、組織工程技術(shù)與 ES細(xì)胞研究的結(jié)合已經(jīng)成為現(xiàn)實，將使相關(guān)的根底學(xué)科研究以及醫(yī)藥業(yè)、畜牧業(yè)等發(fā)生重大變化，走向一個新的時代。 2. 胚胎干細(xì)胞的用途 ? 為在細(xì)胞和分子水平研究研究哺乳動物早期胚胎發(fā)育規(guī)律提供了良好的材料和方法，是基因功能研究的有效手段。 第三十七頁，共七十六頁。 ? 生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物：建立轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，抗病育種；藥用蛋白 第三十八頁，共七十六頁。 ? ES細(xì)胞也可進(jìn)行基因敲除 ， 獲得基因敲除動物 ， 如豬可以作為人異種器官移植的器官供體來源 。 ? 在發(fā)育生物學(xué)根底研究中 ， 利用 ES細(xì)胞研究細(xì)胞分化的機(jī)埋 ， 有助于說明細(xì)胞分化調(diào)
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