胚胎干細(xì)胞的研究與應(yīng)用畢業(yè)論文正文-在線瀏覽
2024-08-02 19:06本頁面
【正文】 ）一如去核的受體（卵母細(xì)胞或受精卵）胞質(zhì)構(gòu)成重組胚，通過對(duì)重組胚的激活、培養(yǎng)得到動(dòng)物胚胎干細(xì)胞。自從利用分化的成年乳腺細(xì)胞的大第一只體細(xì)胞克隆綿羊多利，其它物種的克隆也取得了很大的進(jìn)展。在目前的克隆實(shí)驗(yàn)中，不同物種間克隆的效率略有區(qū)別，但總效率不高！ iPS細(xì)胞 iPS細(xì)胞首先是由Takahashi和Yamanaka在2006年建立的。接著，利用里一個(gè)多能性標(biāo)志分子Fbx15的表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行了篩選，最終得到了具有胚胎干細(xì)胞某些特征的多能性干細(xì)胞，并命名“誘導(dǎo)產(chǎn)生的多能性干細(xì)胞”。不久，另外兩項(xiàng)研究相繼報(bào)道了利用形態(tài)學(xué)作為篩選標(biāo)準(zhǔn)來建立iPS細(xì)胞的方法，這一方法在建立人類iPSxde 研究中具有潛在的優(yōu)勢(shì)。緊隨其后，Yamanaka小組又在原有工作基礎(chǔ)上取得重要突破；從4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子中去掉了腫瘤相關(guān)因子CMyc，使iPS細(xì)胞的產(chǎn)生更為安全。在短短一年多的時(shí)間里，iPS細(xì)胞的建立方法有了明顯的改善，并且成功的應(yīng)用于人類細(xì)胞的研究和疾病模型動(dòng)物的治療，說明這一方法既有可操作性和穩(wěn)定性，并且其安全性也在不斷提高，因此這種方法對(duì)將來的醫(yī)學(xué)研究有著巨大的價(jià)值！第三章 ESCs的基本特征3．1 形態(tài)學(xué)特性 各種動(dòng)物的ESCs具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)： 細(xì)胞體積小，胞質(zhì)胞漿少，細(xì)胞核大，有一個(gè)或多個(gè)核仁，胞質(zhì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，散布著大量的核糖體和線粒體，核形正常，保留了雙倍體性質(zhì)。不同動(dòng)物胚胎干細(xì)胞直徑有所不同。 3．2 基本特征 3．2．1 多能性(Pluripotency) ESCs的多能性是指ESCs具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能，參與部分組織的形成?？尚纬膳邩咏Y(jié)構(gòu)類胚體，類似于正常胚胎的囊胚期，隨后可進(jìn) 行不同程度的分化產(chǎn)生多種分化細(xì)胞。③嵌合體：通過顯微注射或其它方式使ESCs與受體胚結(jié)合，嵌合后，嵌合體就會(huì)參與多種組織發(fā)育。在體外抑制分化培養(yǎng)時(shí)，ESCs不但可以增殖，而且可以被用來進(jìn)行各種操作，而這一點(diǎn)是以ESCs的以下兩方面特性為前提的：①在對(duì)ESCs進(jìn)行各種操作的過程中，其仍能保持其擴(kuò)增和發(fā)育的全能性和多能性。由于來源于著床前胚胎的 ESCs的某些細(xì)胞表面免疫相關(guān)蛋白(如MHC)還未來得及表達(dá)，用于移植時(shí)不易產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，因此使其成為移植治療和細(xì)胞治療的潛在資源[6]。ESCs具有很強(qiáng)的分化能力，可以無限增殖并分化成為全身200多種細(xì)胞類型，進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官。 3．3 ESCs建系概況 ESCs建系的原理是將早期胚胎或是用外科手術(shù)法得到 的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或者PGCs，與分化抑制物共同培養(yǎng)，使之增殖而又保持未分化狀態(tài)， 這樣代代相傳，從而使數(shù)量有限的胚胎或者 PGCs能夠成千上萬倍的克隆。雖然來源于PGCs的ESCs與來源于ICM的細(xì)胞同屬胚胎干細(xì)胞系，但相比之下，前者具有著更加巨大的科學(xué)意義和實(shí)踐價(jià)值：①由于獲得囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)來源的ESCs需要破壞具 有生命的胚胎，所以這項(xiàng)研究在許多國(guó)家是被禁止或嚴(yán)格限制的[7]，而PGC來源于早期流產(chǎn)的胚胎，于是來源于PGCs的EGCs系的建立給研究人員帶來了新的希望；②PGcs 是胚胎形成后機(jī)體的干細(xì)胞，與胚泡期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)相比，經(jīng)歷了著床的篩選，而生理狀態(tài)下有相當(dāng)量的胚泡因生長(zhǎng)發(fā)育不良而不能正常著床并自行排出，因此PGCs的健康程度應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ICM[8]；③雖然PGCs用于ESCs的培養(yǎng)還存在諸多問題，但無論在數(shù)量上還是取材方法上，PGCs的獲取均比桑椹胚和囊胚的獲取容易,因而更具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。常規(guī)使用的培養(yǎng)液有白血病細(xì)胞抑制因子(LIF)、胎牛血清、L一谷氨酸、非必須氨基酸(NEAA)以及高濃度的DME等。因此采用DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)液是能夠滿足胚胎干細(xì)胞和飼養(yǎng)層細(xì)胞的生長(zhǎng)要求的[9]。目前廣泛應(yīng)用的飼養(yǎng)層有三種，STO(一種已建系的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)、Pmef(小鼠原代胚胎成纖維細(xì)胞)。故更有利于ESCs生長(zhǎng)[10]。因此，從理論上說，可提取動(dòng)物睪丸SCs，然后將PGCs與SCs共培養(yǎng)，不僅可促進(jìn)PGCs貼壁。 第五章 ESCs的應(yīng)用前景ESCs的應(yīng)用最主要的應(yīng)用是基礎(chǔ)科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)科學(xué)等方面，特別是在發(fā)育生物學(xué)、克隆動(dòng)物、藥學(xué)研究以及組織器官的修復(fù)移植等方面有著無比廣泛的應(yīng)用前景[12]。5．2 器官移植ESCs作為一種“種子細(xì)胞”為臨床的組織、器官移植提供 了大量的材料，hESC經(jīng)過免疫排斥基因剔除后．再定向誘導(dǎo)終末器官以避免不同個(gè)體間的移植排斥，這樣就可能解決一直困擾著免疫學(xué)界及醫(yī)學(xué)界的同種異型個(gè)體間的移植排斥難題。目前
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