20xx年醫(yī)學(xué)專題—第七章-細(xì)胞融合與體細(xì)胞雜交61(已改無(wú)錯(cuò)字)
2024-11-16 00 本頁(yè)面
【正文】 EG結(jié)合誘導(dǎo),在高Ca2+和pH溶液的作用下，將 與質(zhì)膜結(jié)合的PEG分子洗脫，將 進(jìn)一步加劇電荷平衡失調(diào)，從而 提高融合的幾率。因此，PEG結(jié) 合高pH的高濃度Ca2+離子(l237。zǐ)誘導(dǎo)融 合方法成為一種較常用的細(xì)胞融 合方法。,優(yōu)點(diǎn)：基于PEG的誘導(dǎo)融合優(yōu)點(diǎn) 是融合成本低，勿需特殊設(shè)備； 融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合 過(guò)程不受物種(w249。zhǒng)限制。,缺點(diǎn)：是融合過(guò)程繁瑣，PEG可 能對(duì)細(xì)胞有毒害。,第二十六頁(yè)，共六十二頁(yè)。,細(xì)胞融合例子1 甘藍(lán)與大白菜的化學(xué)誘導(dǎo)(y242。udǎo)融合,第二十七頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,第二十八頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,第二十九頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,第三十頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,第三十一頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,3 物理(w249。lǐ)法,電融合誘導(dǎo)法（Electrofusion）：利用電場(chǎng)來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞彼此連接 成串，再施加(shījiā)瞬間強(qiáng)脈沖促使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，促進(jìn)細(xì)胞融 合的技術(shù)。,原理：在直流電脈沖的刺激下，細(xì)胞膜或原生質(zhì)體質(zhì)膜表面的電荷 和氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細(xì)胞或原生質(zhì)體粘合并發(fā)生質(zhì)膜 瞬間破裂，進(jìn)而連接，直到閉和成完整的膜形成融合體。 優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性與可控制性強(qiáng)。 缺點(diǎn)：可能會(huì)造成(z224。o ch233。nɡ)不可恢復(fù)的細(xì)胞損傷。,第三十二頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,棉花(mi225。n hua)細(xì)胞電融合,BLS細(xì)胞融合儀 （1）聚集：在直流電脈沖 的誘導(dǎo)下，極化產(chǎn)生偶極子 ，彼此靠近，定向排列成串 球狀。 （2）細(xì)胞膜融合：在直流 電脈沖的誘導(dǎo)下，原生質(zhì)體 膜兩側(cè)產(chǎn)生電勢(shì)，正負(fù)電荷 相吸，細(xì)胞膜變薄，觸發(fā)(ch249。fā)膜 的穿孔（質(zhì)膜瞬間破裂）。 （3）異核體：膜之間形成 通道，細(xì)胞質(zhì)等得以交換、 融合。 （4）融合細(xì)胞：細(xì)胞核融 合。,第三十三頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,細(xì)胞融合舉例2 ——薄荷的電誘導(dǎo)(y242。udǎo)融合,親本：E3E47兩個(gè)(liǎnɡ ɡ232。)薄荷親本原生質(zhì)體（59105） ，0.7M山梨醇。,儀器(y237。q236。)：Eppendorf電轉(zhuǎn)儀、融合杯（250微升，50微 升）,觀察：DAPI染色：4，6聯(lián)脒2苯基吲哚是一種常用 的熒光染料，與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的 熒光基團(tuán)的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好 UV（紫外光）的激發(fā)波長(zhǎng)正好是356nm。染色標(biāo)記細(xì) 胞核的位置。 參數(shù)：,電壓：1.53V，超過(guò)2V破裂，選1.5V。 脈沖電壓：0300V。,脈沖時(shí)間：3060S，每次增加10S，40S最佳。,第三十四頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,融 合 率 達(dá) 到 1627%， 原生質(zhì)體存 活率97%,第三十五頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,六 融合細(xì)胞(x236。bāo)篩選,因融合的隨機(jī)性而成為細(xì)胞融合的關(guān)鍵(guānji224。n)而必需,的技術(shù)(j236。sh249。),第三十六頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,1篩選(shāixuǎn)的原因與必要性,細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)的物理過(guò)程，經(jīng)融合后細(xì)胞 將以多種形式出現(xiàn)，需要通過(guò)培養(yǎng)和篩選，除去 不需要的細(xì)胞，分離出需要的雜種(z225。zhǒng)細(xì)胞，從而解 決融合細(xì)胞的選擇問(wèn)題。,問(wèn) 題 ：A 與B 融 合過(guò)程(gu242。ch233。ng)中，你能預(yù)見(jiàn)有哪些 形式的細(xì)胞嗎？ AB，AA，BB。,AAA，BBB，AAB,BBA等多聚體。 未融合的A，B。,第三十七頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,2雜種細(xì)胞(x236。bāo)篩選方法,（1）細(xì)胞形態(tài)大小(d224。xiǎo)差異,（2）選擇性培養(yǎng)基篩選法：利用原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng) 基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細(xì)胞的方法。 例如：利用抗性標(biāo)記、酶缺陷型、激素需求差異 等。親本原生質(zhì)體生長(zhǎng)要求外源激素，而有的雜 種細(xì)胞由于雙親互補(bǔ)作用會(huì)產(chǎn)生內(nèi)激素，從而(c243。ng 233。r)使 雜種細(xì)胞能在無(wú)激素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 （3）再生后雜種與親本形態(tài)、性質(zhì)差異,第三十八頁(yè)，共六十二頁(yè)。,,
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1