【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 suān)酯蛋白相結(jié)合，所以樣品在提取氏要用酸或酶水解。 酶解、酸解的條件選擇：酶的品種、酶解的酶用量、酶解時(shí)間,第三十七頁，共一百零二頁。,提取 提取的方法有液液萃取法、固相萃取法、超臨界提取法。 凈化 最常用的凈化手段是固相萃取法〔SPE〕，也有人采用免疫親和色譜法、液液凈化法。 免疫親和色譜法：用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)出特異性抗體，抗體純化后被結(jié)合(ji233。h233。)到瓊脂糖膠上制成柱，樣品上柱后， β興奮劑就與這些柱上的抗體結(jié)合(ji233。h233。)在一起而保存下來，然后再用溶劑洗脫?，F(xiàn)在已有商品化的可重復(fù)使用的IAC柱。,第三十八頁，共一百零二頁。,衍生化 GC/MS、GC/FTIR確證前，采用衍生化技術(shù)以提高檢測(cè)靈敏度。最常用的衍生化試劑有：三甲基硅烷〔TMS〕、環(huán)狀二甲基硅烷嗎啉〔DMS〕。另外(l236。nɡ w224。i)還有碳酰氯〔COCl2〕、甲基硼酸〔MBA〕、五氟一丙酐。,第三十九頁，共一百零二頁。,2. 檢測(cè)(jiǎn c232。),GC/MS 這是β興奮劑檢測(cè)非常有效、靈敏、準(zhǔn)確的手段，電離(di224。nl237。)方式有電子轟擊EI、化學(xué)離子化CI兩種方式。 采用TMS作衍生化試劑、EI電離方式電離某些β興奮劑的碎片如下： 克倫特羅：86，262，243，333，277，187 沙丁胺醇：86，369，350，440，384，294 特布他林：86，356，336，426，370，280,第四十頁，共一百零二頁。,HPLC 常用的檢測(cè)器有紫外〔UV〕、熒光、電化學(xué)等。 免疫分析法 放射免疫分析法、酶免疫分析法 優(yōu)點(diǎn)：一次可處理(chǔlǐ)多個(gè)樣品、有商品化試劑盒供給，檢測(cè)靈敏度高 薄層色譜法 HPLC/MS GC/FTIR,第四十一頁，共一百零二頁。,合成(h233。ch233。ng)的β沖動(dòng)劑,瘦肉精——克倫特羅；鹽酸(y225。n suān)克倫特羅；鹽酸(y225。n suān)雙氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨雙氯喘通；氨雙氯醇胺。,化學(xué)名為“2「〔叔丁氨基〕甲基」－4氨基3，5二氯苯甲醇鹽酸鹽〞，是一種(yī zhǒnɡ)從天然兒茶酚胺衍生合成的化合物；也稱羥甲叔丁腎上腺素, 是一種(yī zhǒnɡ)強(qiáng)效興奮劑。,第四十二頁，共一百零二頁。,上世紀(jì)80年代初，美國(guó)脂胺公司研究人員意外地發(fā)現(xiàn)，將一定量的鹽酸克倫特羅參加飼料中，能夠改變營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝途徑，促進(jìn)動(dòng)物肌肉特別是骨胳肌蛋白質(zhì)的合成，同時(shí)抑制(y236。zh236。)脂肪合成，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，增加瘦肉率。根據(jù)試驗(yàn)得出，在飼料中添加適量的鹽酸克倫特羅，可以提高飼料轉(zhuǎn)化率、生長(zhǎng)速率、瘦肉相對(duì)增加10％以上，于是這項(xiàng)技術(shù)開始在養(yǎng)殖業(yè)中大行其道。,瘦肉精用于養(yǎng)殖(yǎngzh237。)的發(fā)現(xiàn),第四十三頁，共一百零二頁。,作用(zu242。y242。ng)機(jī)理,它的主要作用機(jī)理是作為一種強(qiáng)效沖動(dòng)劑，選擇性的作用于腎上腺素β2受體上，激活(jī hu243。)腺苷酸環(huán)化酶(cAMP)，使環(huán)磷腺苷增加，加強(qiáng)脂肪分解，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)再分配，故又將瘦肉精稱作“生長(zhǎng)促進(jìn)劑(growth promoter)〞和營(yíng)養(yǎng)“重分配劑(repartitioning agent)〞。,第四十四頁，共一百零二頁。,為提高豬肉的瘦肉率，瘦肉精作為飼料添加劑，使用劑量是人用藥劑量的10倍以上。它用量大、使用的時(shí)間長(zhǎng)、代謝(d224。ixi232。)慢，所以屠宰后上市的豬肉中瘦肉精殘留量很大。同時(shí)該藥化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，一般加熱方法不能將其破壞。殘留藥物通過食物進(jìn)入人體，大量積蓄使人中毒。如果一次攝入量過大，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重中毒。,瘦肉精的危害(wēih224。i),第四十五頁，共一百零二頁。,對(duì)人的危害(wēih224。i)的主要表現(xiàn),反復(fù)使用(shǐy242。ng)會(huì)產(chǎn)生耐受性，對(duì)支氣管擴(kuò)張作用減弱及持續(xù)時(shí)間縮短。,克倫特羅還可通過胎盤屏障(p237。ngzh224。ng)進(jìn)入胎兒體內(nèi)產(chǎn)生蓄積，從而影響子代。,易引起急性中毒：表現(xiàn)為心悸，面頸、四肢肌肉顫抖，頭暈、乏力。心動(dòng)過速，室性早博，心電圖示ST段壓低與T波倒置。,與糖皮質(zhì)激素合用可引起低血鉀，從而導(dǎo)致心律失常。,第四十六頁，共一百零二頁。,1998年5月，香港因內(nèi)地供港豬肉內(nèi)臟含β興奮劑而發(fā)生(fāshēng)中毒事件，事后在寧波供港豬場(chǎng)和基地牧場(chǎng)查出β興奮劑等違禁藥品4000多公斤。,動(dòng)物性食品(sh237。pǐn)中毒案例一,第四十七頁，共一百零二頁。,2001年8月22日，廣東信宜市510人因食用殘留鹽酸克倫特羅的豬肉(zhū r242。u)而中毒，其中51人出現(xiàn)嚴(yán)重的中毒現(xiàn)象。 11月7日廣東省河源市484人，也都因食用含有鹽酸克倫特羅的豬肉或豬肝而中毒。,動(dòng)物性食品中毒(zh242。ng d)案例二,第四十八頁，共一百零二頁。,無公害豬肉(zhū r242。u)理化指標(biāo),,第四十九頁，共一百零二頁。,克倫特羅藥物(y224。ow249。)的允許量,,,第五十頁，共一百零二頁。,但當(dāng)前瘦肉精卻屢禁不止，原因之一就是國(guó)內(nèi)外檢測(cè)CLB的方法手段還不夠完善(w225。nsh224。n)，還沒有建立宰前監(jiān)測(cè)體系和準(zhǔn)確迅速方便精確的檢測(cè)方法，從而使不法分子有機(jī)可乘。,當(dāng)前(dāngqi225。n)現(xiàn)狀,第五十一頁，共一百零二頁。,感官(gǎnguān)識(shí)別,色譜(s232。 pǔ)檢測(cè)技術(shù),免疫(miǎny236。)分析技術(shù)(IA),綜合化學(xué)法,電化學(xué)檢測(cè),瘦肉精的檢測(cè)方法,第五十二頁，共一百零二頁。,一般含鹽酸克倫特羅的豬肉色特別鮮紅，脂肪非常薄，肉皮緊貼著瘦肉，瘦肉纖維比較疏松，肉皮與瘦肉之間幾乎無肥肉( 肥膘厚度不到1.5cm) 一般健康肉淡紅色肉質(zhì)彈性好 通過這種感官(gǎnguān)識(shí)別方法就可以快速簡(jiǎn)單定性對(duì)動(dòng)物性食品中有無CLB作出初步判定。 缺點(diǎn)：只是一種經(jīng)驗(yàn)的判斷，不夠準(zhǔn)確,感官(gǎnguān)識(shí)別,第五十三頁，共一百零二頁。,無公害豬肉感官(gǎnguān)指標(biāo),,第五十四頁，共一百零二頁。,色譜(s232。 pǔ)檢測(cè)技術(shù),毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CE),高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLCMS),氣相色譜傅立葉紅外聯(lián)用法(GC FTIR),薄層色譜法(TLC),第五十五頁，共一百零二頁。,色譜檢測(cè)(jiǎn c232。)技術(shù),,第五十六頁，共一百零二頁。,克倫特羅在碳糊電極和鉑碳電極外表有不可逆氧化波產(chǎn)生，可直接采用電化學(xué)方法進(jìn)行測(cè)定。 但是，電化學(xué)系統(tǒng)儀器和毛細(xì)管電泳儀均不是一般實(shí)驗(yàn)室常備檢測(cè)儀器，不利于大量(d224。li224。ng)樣品中克倫特羅殘留測(cè)定。,電化學(xué)檢測(cè)(jiǎn c232。)技術(shù),第五十七頁，共一百零二頁。,綜合(zōngh233。)化學(xué)法,根據(jù)CLB的化學(xué)結(jié)構(gòu)，CLB可顯芳香第一胺類的鑒別反響，也可以顯氯化物的鑒別反響。 該法儀器與試劑廉價(jià)，無復(fù)雜的樣品(y224。ngpǐn)前處理，操作簡(jiǎn)單，適合基層防疫工作者初選CLB殘留的方法。 但最低檢測(cè)限較高，靈敏度低。,第五十八頁，共一百零二頁。,免疫(miǎny236。)分析技術(shù)(IA),免疫(miǎny236。)分析是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反響為根底的新型分析技術(shù)。 免疫反響具有很高的選擇性和靈敏性，因此，免疫分析技術(shù)無論作為獸藥殘留分析的檢測(cè)手段還是樣本凈化方法都能使分析過程特別是前處理步驟大大簡(jiǎn)化。,第五十九頁，共一百零二頁。,免疫分析(fēnxī)技術(shù)(IA),酶免疫(miǎny236。)分析技術(shù)(EIA),放射免疫分析(fēnxī)技術(shù)(RIA),熒光免疫分析法(簡(jiǎn)稱熒免法，F(xiàn)IA),膠體金免疫技術(shù)(DIGFA),根據(jù)檢測(cè)CLB標(biāo)記物的不同主要有：,第六十頁，共一百零二頁。,放射免疫分析法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，準(zhǔn)確、快速，操作簡(jiǎn)便，易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)；目前國(guó)外已有很多RIA試劑盒投放市場(chǎng)，這些試劑盒可檢測(cè)一種或多種β興奮劑。 但是由于放射免疫分析法需要較昂貴的液體閃爍儀或放射儀，且放射性同位素對(duì)工作人員有一定的傷害，廢棄物又不易處理(chǔlǐ)，這些不利因素限制了該法的廣泛應(yīng)用。,放射免疫,第六十一頁，共一百零二頁。,熒光免疫分析法(FIA) 克服了放射免疫法中的核輻射缺點(diǎn)。其檢測(cè)限10ng/ml。 熒免法檢測(cè)藥物殘留具有特異性高，穩(wěn)定性好，對(duì)樣品處理要求簡(jiǎn)單，一次可檢測(cè)