【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 CD三類(lèi)； ? 手性離子對(duì)添加劑 ? 原理：對(duì)映體與手性離子對(duì)形成非對(duì)映體離子對(duì)而分離。 高效毛細(xì)管電泳分析 ? 電泳是帶電粒子在電場(chǎng)作用下定向移動(dòng)。 ? 高效毛細(xì)管電泳（ high performance capillary electrophoresis HPCE)是以高電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，在細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管內(nèi)荷電粒子按其淌度或分配系數(shù)的不同而分離的一種技術(shù)。 ? 電泳作為分離技術(shù)是瑞典科學(xué)家 Tiselius在 1937年首先提出，并且創(chuàng)造了 Tiselius電泳儀，建立了移動(dòng)電場(chǎng)界面方法，第一次成功的從血清中分離出 α α 2 β 、 γ — 球蛋白。 1948年獲得若貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 ? 1967 hjerten 最先提出在高電場(chǎng)強(qiáng)度、 3mm內(nèi)徑的毛細(xì)管中作自由溶液的區(qū)帶電泳（ capillary zone electrophoresis CZE）；1981年，用 30kV的高電壓獲得了理論塔板數(shù) 40萬(wàn) /m的分離效果。 ? 1984Terabe將等離子型表面活性劑膠束引入毛細(xì)管電泳緩沖溶液體系，以膠束作為分配相，使電中性物質(zhì)在毛細(xì)管電泳儀上通過(guò)在水相和膠束相的分配不同而分離 — 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ micellar electrokiic capillary chromatography MECC 或 MEKC）。此法提高了分離選擇性，擴(kuò)大了毛細(xì)管電泳應(yīng)用范圍 ? 1985 年， Hjerten 將傳統(tǒng)的等電聚焦電泳方法引入毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行，提出了毛細(xì)管等電聚焦（ capillary isoelectric focusing CIEF）使 CIEF技術(shù)在蛋白質(zhì)分離中成為強(qiáng)有力的微柱分離分析工具，達(dá)到能分辨等電點(diǎn)僅相差 ? 1987 Cohen and kaiger發(fā)表了毛細(xì)管凝膠電泳（ capillary gel electrophoresis CGE）的研究成果，實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)碎片 CGE分離。 ? 毛細(xì)管電泳工作示意圖 ? 1 緩沖溶液樣品（ +） ? 2 高壓電源 ? 3 緩沖溶液（ — ） ? 4 毛細(xì)管 ? 5 檢測(cè)器 ? 6 信號(hào)處理器 ? 7信號(hào)輸出 ? 8毛細(xì)管恒溫 毛細(xì)管電泳基本理論 ? 電滲或電滲流的產(chǎn)生 電滲（ electroosmosis)或電滲流 (electroosmostic flow EOE)是指管內(nèi)溶液在外力電場(chǎng)作用下整體朝一個(gè)方向運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。 石英毛細(xì)管由于硅醇電離成硅醇負(fù)離子，使管壁表面帶負(fù)電荷。為了保持電荷平衡，溶液中水合離子被吸附到表面附近，形成雙電層。當(dāng)毛細(xì)管兩端加電壓時(shí)，雙電層中陽(yáng)離子朝負(fù)極運(yùn)動(dòng)，由于離子是溶劑化的，帶動(dòng)了毛細(xì)管中整體溶液向負(fù)極運(yùn)動(dòng)。 電滲流的特點(diǎn) 電滲流特點(diǎn)是具有平面流型（高效液相色譜液體流型是拋物線狀）電滲驅(qū)動(dòng)力均勻驅(qū)動(dòng)，電滲速度徑向分布幾乎是均勻的。 電滲流的控制 電滲流是毛細(xì)管電泳中的基本操作要素，為了優(yōu)化分離，往往需要控制電滲流。控制最基本的方法是改變毛細(xì)管內(nèi)壁表面電荷或降低緩沖溶液粘度。改變毛細(xì)管內(nèi)壁表面物理狀況影響被分離組分的遷移速度，因此，改變電滲流需要通過(guò)毛細(xì)管整個(gè)操作條件優(yōu)化實(shí)現(xiàn)。 焦耳熱和溫度梯度 ? 焦耳熱和溫度梯度的產(chǎn)生 ? 焦耳熱是電流通過(guò)電泳介質(zhì)產(chǎn)生，大小取決于操作功率大小。與毛細(xì)管尺寸、介質(zhì)電導(dǎo)及電場(chǎng)強(qiáng)度有關(guān)。焦耳熱通過(guò)管壁向周?chē)⒁輹r(shí)形成溫度梯度。 ? 焦耳熱和溫度梯度的控制 ? 毛細(xì)管內(nèi)過(guò)熱的產(chǎn)生和可能存在溫度梯度表現(xiàn)在分離效能隨著操作電壓升高而降低。電滲流或溶質(zhì)的遷移時(shí)間隨著操作電壓升高而不成正比例增加，電流與電壓不成線性關(guān)系。 ? 減少操作電壓、或降低離子強(qiáng)度、或降低緩沖溶液濃度可以減少緩沖溶液的導(dǎo)電性，使操作功率降低 — 不符合毛細(xì)管電泳發(fā)展初衷 — 不利于優(yōu)化分離。 ? 使用低淌度的具有大緩沖容量，低電荷的緩沖溶液是降低焦耳熱的有效方法。 ? 減少毛細(xì)管內(nèi)徑（一般 25— 75微米）來(lái)降低溫差會(huì)回造成檢測(cè)困難、進(jìn)樣少和易于堵塞。用高速空氣對(duì)毛細(xì)管控溫足夠了（功率5— 7W/m）。 ? 遷移時(shí)間和有效淌度 樣品組分從進(jìn)樣口遷移到檢測(cè)窗所需要的時(shí)間稱(chēng)為遷移時(shí)間（ migration time,).它等于遷移距離除以遷移速度： ? μ a = tm E = lL / tm V ? μ a 為表觀淌度， l為毛細(xì)管有效長(zhǎng)度， tm為遷移時(shí)間， E 為電場(chǎng)強(qiáng)度 ， L為毛細(xì)管總長(zhǎng)度 ， V為操作電壓。 ? 毛細(xì)管有效長(zhǎng)度是指從進(jìn)樣口到檢測(cè)窗的長(zhǎng)度。柱上官學(xué)檢測(cè)，有效長(zhǎng)度比總長(zhǎng)度短 5— 20cm；柱后檢測(cè)，有效長(zhǎng)度等于總長(zhǎng)度。 毛細(xì)管電泳中表觀淌度是電泳淌度和電滲淌度之和 : μ a = μ e + μ eo 當(dāng)溶質(zhì)組分電泳方向與電滲方向一致時(shí)， μ eo取正號(hào)；相反時(shí)取負(fù)號(hào)。 電滲可以用中性標(biāo)記物測(cè)定，如二甲基亞砜、丙酮測(cè)得其遷移時(shí)間teo μ eo = l / teo E = l L / teoV μ e = μ a — μ eo = （ l L/V）（ 1/ tm — 1/ teo） 由以上三個(gè)公式可以很方便的由毛細(xì)管分離圖譜計(jì)算出陽(yáng)離子組分、中性溶質(zhì)、陰離子組分的有效淌度（ μ eo ）。 分離效能和分離度 ? 分子擴(kuò)散理論與理論塔板數(shù) 對(duì)于一個(gè)高斯峰，區(qū)帶展寬對(duì)應(yīng)峰底寬度： Wb = 4? Wb為峰底寬度， ? 為峰的標(biāo)準(zhǔn)偏差，可以用時(shí)間、長(zhǎng)度或體積表示。 沿用色譜理論塔板數(shù)來(lái)表示電泳分離效能 N = （ l / ? ） 2 N為分離效能， l 為毛細(xì)管有效長(zhǎng)度。 理想條件（柱塞式進(jìn)樣，徑向擴(kuò)散不計(jì)，毛細(xì)管抗對(duì)流性，分離效能可以與色譜分離中分子擴(kuò)散項(xiàng)聯(lián)系： ? 2 = 2D tm = 2D l L / μ a V D 為溶質(zhì)分子擴(kuò)散系數(shù) ， L 為毛細(xì)管總長(zhǎng)度， μ a 為淌度， V為操作電壓 聯(lián)立兩式，毛細(xì)管電泳分離效能基本表達(dá)式為： N = μ a V l / 2D L 當(dāng) l = L 時(shí)： N = μ a V / 2D 這是 Jenson amp。 Lukacs在 1981年提出的毛細(xì)管電泳分離效能經(jīng)典公式。它表明使用高強(qiáng)度的電場(chǎng)可以獲得高的分離效能。這是因?yàn)楦唠妶?chǎng)可以縮短遷移時(shí)間，分子擴(kuò)散減少。大分子如蛋白質(zhì)分子擴(kuò)散系數(shù)小，區(qū)帶展寬小，可以獲得比小粉子溶質(zhì)小得多的分離效能。 實(shí)際分離效能可以從電泳圖譜中求出： N = （ / W1/2） 2 tm為遷移時(shí)間， W1/2為半峰寬度。 實(shí)際分離效能小于理論效能，因?yàn)檫€存在其它影響因素。 ? 分離度 Rs ? Rs = 2(tm 2— tm 1） /（ W1+ W2 ） ? 其中 tm tm 1為兩個(gè)組分的遷移時(shí)間， W W2為兩個(gè)峰底寬度。 ? 毛細(xì)管電泳與色譜分離不同主要是基于高的分離效能，而不是選擇性。組分電泳淌度差別小于 %時(shí)也可以完全分離。 ? 分離度用分離效能表示： ? Rs = N1/2/4（ Δμ /μ ） ? Δμ = μ 2 — μ 1 ， ǔ = （ μ 2 + μ 1 ） /2，并且用表觀淌度代替 ǔ ，則有： ? Rs = （ 1/4 21/2）（ Δμ ） [（ V /D（ ǔ + μ eo） 1/2 ? 分離度 Rs與操作電壓平方根成正比。 常用分離模式 ? 毛細(xì)管電泳是在極細(xì)的毛細(xì)管中進(jìn)行電泳的技術(shù)，根據(jù)分離機(jī)理不同有多種不同分離模式： ? 毛細(xì)管區(qū)帶電泳（ CZE）或自由溶液毛細(xì)管電泳（ FSEC）； ?